培养基对重组质粒pcDNA3—HGF产率的影响

重组质粒ＤＮＡ用于基因治疗需要大量符合药学规格的质粒ＤＮＡ,发酵是影响质粒产率的关键步骤之一。比较了４种不同的培养基对ｐｃＤＮＡ３－ＨＧＦ产率的影响,其中自配复合培养基（ＺＰ）质粒产率最高,而ＬＢ培养基的质粒产率最低,５Ｌ发酵罐发酵最终ｐｃＤＮＡ３－ＨＧＦ产率达７２ｍｇ／Ｌ,为大规模发酵生产提供依据。     

用β-紫罗兰酮筛选虾青素高产菌株

用β-紫罗兰酮作为筛选剂选择性分离海洋红酵母虾青素高产突变菌株.实验结果表明,在β-紫罗兰酮存在的情况下,由于类胡萝卜素合成受到抑制,海洋红酵母的生物量和虾青素合成量都减少;当平板培养基中β-紫罗兰酮浓度达到370 mg/L时,海洋红酵母的致死率为92.3%:在这种平板培养基上涂布经甲基磺酸乙酯诱变的海洋红酵母,随机筛选200个菌落,结果表明生物量、虾青素体积产率和细胞产率均有所提高的正突变株占18%,生物量、虾青素体积产率和细胞产率的单项指标有所提高的正突变株分别占22.5%、45%和46%.该实验结果表明在分离培养基中添加β-紫罗兰酮可选择性地分离海洋红酵母虾青素高产菌株,提高虾青素高产突变株的筛选效率.     

罗伊乳杆菌增殖培养基中碳源氮源的优化

目的提高罗伊乳杆菌的发酵活菌数,以提高发酵产率,降低生产成本。方法采用光电比浊法与活菌计数法,通过单因素试验和正交设计方法对罗伊乳杆菌的增殖培养基的碳源和氮源进行优化,并且绘制优化前后的生长曲线。结果罗伊乳杆菌增殖培养基中最佳的碳源、氮源种类与浓度为葡萄糖2.1%、蔗糖3.0%、牛肉膏1.5%、酵母粉1.4%,最佳的培养时间为10h。结论通过优化罗伊乳杆菌的增殖培养基,提高了发酵产率,降低了生产成本。     

几种添加物对D—核糖产量的影响

研究了几种物质对D－核糖产量的影响,研究表明,当发酵培养基中玉米浆的含量为25g/L,D－核糖产量达到最高,为65g/L。发酵培养基中添加适量的粉及山梨醇亦有利于D－核糖的积累,当粉与山梨醇的添加量分别为10g/L及40g/L时,D－核糖产率分别增加7.8%、4.7%,而在发酵培养基中加入丙二酸可抑制D－核的分泌,在40ml发酵培养基中添加1ml丙二酸后,D－核糖的产率下降73.8％。甲醇也可抑制D－核糖的积累,当发酵培养基中的甲醇添加量为16g/L时,D－核糖产率下降66.2%。     

用紫外线和耐柔红霉素及其复合诱变一株天兰淡红链霉菌HM1482

柔红霉素是半合成表阿霉素等低毒高效抗癌药物的重要原料。用紫外线和耐柔红霉素及其复合诱变柔红霉素产生菌—天兰淡红链霉菌ＨＭ1 4 82的诱变效果 ,曾获一株高产诱变株 1 4 82 -77,在生产罐中应用 ,其柔红霉素产率较出发菌株提高 1 2 2 .6%。材料与方法 :①斜面与分离平皿培养基主要成份为可溶性淀粉、天冬素、Ｋ2 ＨＰＯ4 和琼脂等。②种子与发酵培养基主要成份为玉米粉、黄豆粉、葡萄糖、碳酸钙及微量(ＮＨ4 ) 2 ＳＯ4 、Ｋ2 ＨＰＯ4 等。产率 (效价 )测定采用ＴＬＣ、ＨＰＬＣ ,主要实验数据见表 1。　　　表 1　　产率测定数据表　　…     

拟干酪乳杆菌发酵L-乳酸合成培养基的优化

为开发一种适合于乳酸发酵过程代谢流分析(MFA)的合成培养基,以拟干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei为对象,考察主要营养成分对其生长和乳酸合成的影响.在合成培养基的优化过程中,先确定了影响菌体生长和乳酸合成的主要营养物质及其浓度范围,针对葡萄糖、混合氛基酸、核苷类物质、维生素等生长因子、混合磷源、CaCO3六大类营养成分,使用正交试验法先后设计了六因素五水平和四因素三水平正交试验以及氨基酸梯度试验和氨基酸缺失试验,得到了最佳培养基组成(1L):葡萄糖80g、醋酸钠2g、吐温-80 1 mL、柠檬酸氢二铵1g、金属离子0.72g、混合氨基酸3.925g、核苷类物质0.15g、维生素等生长因子0.075g、混合磷源0g、CaC03 35g.以半合成培养基为对照,考察优化后的合成培养基对菌体生长和乳酸合成的影响.结果表明,菌体在合成培养基中的乳酸产量、产率均比半合成培养基中高.这些结果为L.paracasei的代谢流定量研究莫定了基础.     

新疆紫草细胞生产阶段培养中细胞生长及产物合成的研究Ⅱ:发酵培养

用内循环气升式反应器进行新疆紫草细胞生产阶段培养,当培养基浓度增加时,色素产率也随之提高,其数量及增长的幅度远大于悬浮培养。当接种量为180gFW／1,培养基为3倍的M9时能获得最大的色素产率：2．28g／l,是培养基非加倍时的5．4倍,太高的接种量不利于色素的合成。为降低成本而减少培养基中某些成份的用量时,要得到较高的色素产量,需同时调整其它成份的浓度。     

限磷对产甘油假丝酵母甘油合成与胞内磷积累的影响

研究了磷酸盐限量对产甘油假丝酵母甘油合成与胞内磷积累的影响。结果表明, 当酵母细胞从适磷或富磷培养基转接入低磷培养基时, 发酵过程中胞内积累的磷逐渐减少; 而当菌体从低磷培养基转接入适磷或富磷培养基时, 发酵过程中胞内聚磷酸盐的积累量迅速增加。当细胞在第14小时和第38小时从适磷培养基转接入低磷培养基时甘油得率分别高达60.9%和61.4%, 而甘油产率则分别为2.03 g/(L·h)和2.23 g/(L·h)。这些现象说明限制发酵培养基中的磷浓度是产甘油假丝酵母高产甘油的必要条件, 并为其反复分批发酵法生产甘油提供了重要依据。     

细胞培养生产人参寡糖素降低成本的途径

在人参（Ｐａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇ）细胞悬浮培养中,以无离子水代替重蒸馏水,细胞生长速率和寡糖素产率分别降低２．３％和２．９％。用白糖代替蔗糖,细胞生长速率和寡糖素产生率分别降低１．７４％和１．２３％。综合上述两方面结果,以无离子水和白糖分别替代原培养基中的重蒸馏水和蔗糖组成替代培养基,用替代培养基培养人参培养细胞,其生长速率可达０．５０９ｇＤＷ／Ｌ．ｄ．寡糖素产率可达１．４４３ｇ／Ｌ,和原培养基相     

提高豆渣固态发酵核黄素产率的研究

在豆渣固态发酵生产核黄素工艺基础上,研究了改变液体种子和固体发酵培养基成分对阿舒假囊酵母菌核黄素产率的影响。结果表明,发酵培养基中添加１０％麦麸或２％小米可使核黄素产率分别提高２５％或１４％,添加２５μｍｏｌ／Ｌ碘乙酸则比对照组核黄素产率提高６．２─１０．４％。正交实验表明,接种量５％,并添加１０％麦麸、２％小米、１％玉米浆和２５μｍｏｌ／ｋｇ碘乙酸可使核黄素的产率最高达到６．１４ｍｇ／ｇ基料,蛋白质含量由１０．２％提高到１５．８％．     

用b-紫罗兰酮筛选虾青素高产菌株

用β-紫罗兰酮作为筛选剂选择性分离海洋红酵母虾青素高产突变菌株。实验结果表明, 在β-紫罗兰酮存在的情况下, 由于类胡萝卜素合成受到抑制, 海洋红酵母的生物量和虾青素合成量都减少; 当平板培养基中β-紫罗兰酮浓度达到370 mg/L时, 海洋红酵母的致死率为92.3%; 在这种平板培养基上涂布经甲基磺酸乙酯诱变的海洋红酵母, 随机筛选200个菌落, 结果表明生物量、虾青素体积产率和细胞产率均有所提高的正突变株占18%, 生物量、虾青素体积产率和细胞产率的单项指标有所提高的正突变株分别占22.5%、45%和46%。该实验结果表明在分离培养基中添加β-紫罗兰酮可选择性地分离海洋红酵母虾青素高产菌株, 提高虾青素高产突变株的筛选效率。     

甘蓝型油菜下胚轴原生质体培养的研究

从甘蓝型油菜下胚轴分离纯化原生质体。种子萌发时进行光照处理对原生质体产率影响不大,但可提高其活力。对液体浅层、固体平板和“琼脂岛”3种培养方法进行比较,结果“琼脂岛”法效果最好,不但细胞分裂速度快,而且克隆形成频率高。再生的愈伤组织转到分化培养基上后迅速分化出芽。诱导生根后进行移栽,生长状况良好。     

用神经网络和遗传算法优化怀槐悬浮细胞合成异黄酮

为了获得怀槐悬浮细胞合成异黄酮的最适培养条件 ,采用ANNs(人工神经网络 )结合RAGA(实数编码加速遗传算法 )对培养基组成进行全局寻优。培养基中影响异黄酮染料木素产率的主要组成是KNO3、(NH₄)₂SO₄ 、2 ,4 D和 6 BA。在它们的有效作用浓度范围内 ,用随机10组培养基组合及细胞染料木素产率为输入和输出由ANNs对数据建模 ,由RAGA优化模型参数。建立的优化模型准确性高 ,依赖模型由RAGA全局寻优获得的最佳培养基组合是149.68mg L (NH₄)₂SO₄ 、2.936 1.0mg LKNO3、0.01mg L 2 ,4 D和 0.19mg L6-BA ,染料木素产率达14.13mg L ,与模型预测值的误差为 7.38%。结果表明 ,运用神经网络结合遗传算法优化怀槐细胞合成异黄酮的培养条件是可行的 ,优化后的培养基使怀槐细胞异黄酮合成能力比优化前有很大的提高.     

利用Fusarium poae制备T-2毒素的培养条件和提取方法

比较2种不同优化方法对分离纯化梨孢镰孢菌(Fusarium poae)产生的T-2毒素的效果,并得到高纯度的T-2毒素,解决国内T-2毒素产业化问题.在优化Fusarium poae产毒培养条件的基础上,对Burmeister的提取方法和Gregory培养基进一步优化以最大限度地提高T-2毒素的产率,从而得到高纯度并且...     

青霉PT95菌株固态发酵产生类胡萝卜素的研究

本文对青霉Penicillium sp. PT95菌株在固态发酵条件下菌核内产生类胡萝卜素进行了初步研究。结果表明,在3种固态发酵培养基中,玉米粉培养基(SMA)比麸皮培养基和棉籽壳培养基更适合于PT95菌株固态发酵产生类胡萝卜素。为了增加菌核干重和提高类胡萝卜素产率,SMA中需要添加氮源、碳源和植物油。在所试的各种氮、碳源中,以硝酸钠和麦芽糖效果最佳。通过正交试验确定了在培养基盐溶液中添加硝酸钠3g/L,麦芽糖10g/L,豆油2.5g/L能使菌核干重由536g/100g提高到970g/100g(干料);类胡萝卜素产率由2149μg/100g提高到5260μg/100g(干料);β-胡萝卜素在类胡萝卜素中的含量由614%提高到71.3%。     

粉叶小檗愈伤组织单细胞克隆

以粉叶小檗愈伤组织为材料 ,用B5液体培养基进行悬浮培养建立悬浮细胞系。经 3～ 4次继代培养即可得到悬浮的单细胞。悬浮细胞通过细胞平板克隆 (一般B5培养基平板克隆 ,优化培养基平板克隆和条件培养基平板克隆 ) ,经 5代连续继代培养观察和薄板层析 -分光光度法分析 ,发现用优化培养基进行平板克隆植板率最高 ,且克隆最易成功 ,并且还筛选到一株小檗碱产率高且稳定的克隆CV 5 7,其平均生长速率为 14 .4 12mg .Fw/L .d ,为原始株系的 1.91倍 ,平均小檗碱含量为 2 .17%干重 ,是原始株系的 2 .2 6倍。     

细胞密度和营养供给对H1N1流感病毒产率的影响

探究细胞培养生产流感病毒过程中,高细胞密度引起低单位细胞病毒产率(Svy)的原因及找到解决方法。通过增加微载体浓度以及换液操作获得较高的细胞密度;考察了感染时细胞密度(CCI)和病毒感染用维持培养基对病毒产量和单位细胞病毒产率的影响。在12.6 g/L微载体培养过程中,通过换液操作,可获得高细胞密度,达到1.47×107 cells/m L。在CCI为1×107cells/m L条件时,选择合适的维持培养基,其Svy最高达到5.14×103 virions/cell,比同等条件下用DMEM维持培养基的Svy值提高了近一倍。高密度培养MDCK细胞生产流感病毒时,充分考虑不同阶段的培养条件和营养需求,可以提高细胞密度和单位细胞病毒产率,进而提高流感病毒的产量。该研究结果为工业化生产流感病毒疫苗提供了基础数据。     

微生物培养基质量控制技术和标准*

微生物培养基的酸碱度、凝胶强度和选择性等直接影响到培养基的质量,在理化试验方法中采用连接可渗透陶器型液体接头的电极和平头电极或者连接微型探头的电极可分别测定液体和固体培养基的pH值,而采用Gelometer和theLFRATextureAnalyser可测定固体培养基的凝胶强度。在微生物学方法中固体培养基采用倾注平板法、涂布法、划线法(半定量法)、改良的Miles-Misra法等测定生长情况,液体培养基采用稀释法测定生长率,用目标菌和杂菌的混合菌株评价选择性增菌培养基的选择性,利用OD值评价液体培养基生长     

新疆紫草细胞生产阶段培养中细胞生长及产物合成的研究Ⅰ:悬浮培养

新疆紫草细胞生产阶段培养时生物产量随接种量的增加而增大,但生物量的倍增数并不增大.色素产量只在一定范围内与接种量成正相关关系,超过一定范围反而下降.当选定适当接种量时,加大培养基的浓度可提高色素产率.扩大培养规模,色素产量下降.     

Zymomonas mobilis用甜菜底物生产酒精的比较

利用在葡萄糖基质培养基上培养Z.mobilis菌生产酒精比酵母有几个优点.其中最重要的是较高酒精收率(超过理论值95%)和较高酒精产率(高出3—5倍).关于用Z.mobilis在蔗糖基质培养基上进行酒精发酵有两个主要问题.首先,由于果聚精和山梨糖醇付产物的形成,酒精收率减小到理论值的70—80%.其次,在象甘蔗糖蜜这样天然底物中Zmobilis的生长和酒精产量都很低.