不同性别大鼠在2型糖尿病造模过程中的稳定性

目的研究不同性别大鼠在2型糖尿病造模过程中的成功率及模型的稳定性。方法高糖高脂饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素诱导建立雄、雌性大鼠2型糖尿病模型。成模后所有大鼠每周固定时间测血糖和体重。观察24周后,心脏穿刺取血,测定空腹血糖（FPG）、血清胰岛素（FINS）、HbA1c、甘油三脂（TG）、胆固醇（TC）、高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）。结果单纯高糖高脂饮食喂养,雄、雌性大鼠血糖与正常组无显著差异;STZ注射后,雄性大鼠血糖升高并逐渐平稳,而雌性需两次STZ注射,模型才比较稳定。实验结束时,雄、雌性糖尿病大鼠FPG、FINS、HOMA-IR以及TG、TC、LDL-C均显著升高,说明模型存在胰岛素抵抗和脂代谢紊乱。结论高糖高脂饲料加一次性小剂量链脲佐菌素腹腔注射,可成功建立雄性大鼠2型糖尿病模型,而同等剂量,雌性模型需两次STZ。雄、雌性糖尿病大鼠模型具有高血糖、脂质代谢紊乱和胰岛素抵抗特点。造模成功率及稳定性与性别有关,雄性大鼠较雌性大鼠成模率高,稳定性好,且耗时更短。     

cDNA RDA在类似普通2型糖尿病大鼠肾脏组织基因差异表达筛查中的应用

应用代表性差异分析 (cDNARDA)技术 ,对类似普通 2型糖尿病大鼠肾脏组织基因差异表达进行筛查 ,初步探讨类似普通 2型糖尿病大鼠肾脏损害发病的分子机制 .首先以类似普通 2型糖尿病大鼠肾脏组织作为实验组 (Tester) ,正常大鼠肾脏作为对照组或驱动组 (Driver)通过cDNARDA进行基因差异表达筛查 ;最终的差异产物亚克隆到Puc 18载体 ,测序及并进行生物信息学分析 ;半定量RT PCR对筛查到新的基因进行初步的鉴定 .结果发现 9个新ESTs ,2个新基因 .这 2个新基因分别与人及小鼠的丝氨酸蛋白酶抑制因子F ,及真核细胞转录启动因子 3亚单位 5 (EIF 3epsilon)基因有高度的相似性 (>90 % )并在类似普通 2型糖尿病大鼠肾脏组织表达上调 .推测 2个新基因分别是大鼠的丝氨酸蛋白酶抑制因子F及真核细胞转录启动因子 3亚单位 5 .两个新基因在类似普通 2型糖尿病大鼠肾脏组织表达上调 ,可能与类似普通 2型糖尿病大鼠肾脏损害相关 .同时 ,对新基因RS91进行了全长cDNA克隆     

磺酰脲受体1基因多态性与2型糖尿病的相关性

目的：研究磺酰脲受体1（sulfonylurea receptorl,SUR1）基因外显子16-3c／t多态性与湖北汉族人群2型糖尿病的相关性。方法：采用同胞对（2型糖尿病人及其正常同胞）和随机病例一对照两种实验设计,应用PCR-RFLP方法分析共405个样本的SUR1基因外显子16-3c／t多态性,并测定身高、体重、腰围、臀围、血压、空腹血糖等生理生化指标。结果：两种实验设计中病例组与对照组的基因型和等位基因频率均无显著性差异（P〉0．05）。结论：在湖北汉族人群中未发现SUR1基因外显子16-3c／t多态性与2型糖尿病之间存在关联,该基因座可能不是该人群的致病基因。     

2型糖尿病早期大鼠外周神经节基因表达谱分析

糖尿病神经病变(Diabetic neuropathy,DN)是糖尿病在神经系统发生的多种并发病变的总称。文章旨在筛选2型糖尿病早期大鼠外周神经节差异表达的基因。采用Illumina大鼠基因表达芯片,比较糖尿病模型与非糖尿病大鼠外周神经节基因表达谱差异。结果表明,全基因组12 604个已知基因中,158个基因差异表达。糖尿病组与非糖尿病组相比,87个基因表达上调,71个表达下调。对差异表达的基因进行GO分析,发现上调基因所参与的最显著(P<0.001)的几个生物学过程都与神经细胞骨架及运动功能有关;下调基因所参与的最显著的生物学过程主要与"对病毒/生物刺激/其它生物的反应"有关。KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)分析显示,差异表达的基因所参与的最显著(P<0.001)的生物学通路为代谢通路。结果表明:高血糖可导致糖尿病大鼠外周神经节代谢紊乱;高血糖可能通过免疫炎症反应、改变神经细胞骨架及运动功能相关的基因的表达,继而损害外周神经节的结构和功能。     

有氧运动对2型糖尿病大鼠骨骼肌ERK1/2活性的影响

目的：观察有氧运动对2型糖尿病大鼠骨骼肌细胞外信号调节激酶（ERK1/2）活性的影响,探讨有氧运动对2型糖尿病的预防和调控机制。方法：将75只SD大鼠随机分为正常对照组（CON）、糖尿病对照1组（DC1）、糖尿病运动1组（DE1）、糖尿病对照2组（DC2）、糖尿病运动2组（DE2）5组（n=15）。正常对照组用普通饲料喂养,糖尿病组用高脂高糖配方饲料喂养。经过8周高脂高糖喂养后,糖尿病2组大鼠腹腔内注射链脲佐菌素（STZ）,诱发2型糖尿病;糖尿病运动1组游泳的最后1周初和糖尿病对照1组同时注射STZ,注射剂量为35 mg/kg,3 d后尾部取血测血糖≥ 16.7 mmol/L为造模成功。运动干预8周后,测定大鼠血清胰岛素、骨骼肌中ERK1/2蛋白表达等指标。结果：①与正常对照组比较,糖尿病各对照组血液中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）、游离脂肪酸（FFA）显著升高（P<0.05,P<0.01）,空腹血糖（FBG）、胰岛素（FIN）含量和胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）显著升高（P<0.01）,ERK1/2磷酸化的蛋白表达显著下降（P<0.05）,糖尿病对照2组ERK1/2蛋白含量显著下降（P<0.05）;②8周游泳运动后,与糖尿病对照组比较,糖尿病运动组血液中TC、TG、FFA、LDL-C显著下降（P<0.05）,FBG、FIN、HOMA-IR显著下降（P<0.05,P<0.01）,ERK1/2磷酸化蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论：长时间有氧运动,增加了骨骼肌ERK1/2磷酸化水平,改善了2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的状况,降低血糖。这可能是改善糖代谢紊乱,提高胰岛素敏感性的机制之一。     

有氧运动和白藜芦醇对2型糖尿病大鼠肾脏JAK2及TGF-β1的影响

目的: 研究有氧运动和白藜芦醇对2型糖尿病大鼠肾脏Janus激酶2(JAK2)及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,探讨运动与白藜芦醇改善糖尿病肾损伤的可能作用机制。方法: SD大鼠经5周高糖高脂饲料喂养加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型后,将糖尿病大鼠随机分为糖尿病安静组(DC组),糖尿病运动组(DE组),糖尿病药物组(DR组)和糖尿病运动药物组(DER组),每组各12只,另设正常对照组(NC组)。运动组大鼠进行8周的有氧运动(跑速为20 m/min),每天运动60 min,每周运动6 d;药物组大鼠进行8周的白藜芦醇灌胃(每天45 mg/kg,7天/周)。8周末,检测血糖、24 h尿白蛋白(24 h UA)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)的变化;采用荧光定量PCR检测肾脏JAK2 mRNA的表达,免疫组织化学法和Western blot法检测肾脏JAK2和TGF-β1的表达。结果: 8周干预后,与NC组相比, DC组血糖浓度、24 h UA、Scr、BUN均显著上升(P＜0.05),肾组织病理损伤加重,肾组织TGF-β1、JAK2和JAK2 mRNA的表达均明显增加(P＜0.05)。与DC组相比,DE、DR和DER组血糖浓度、24 h UA、Scr、BUN均显著下降(P＜0.05),肾组织病理损伤减轻,肾组织TGF-β1、JAK2和JAK2 mRNA的表达均明显减少(P＜0.05),且DER组的降低更显著,与DE、DR组相比差异有显著性(P＜0.05)。结论: 有氧运动、白藜芦醇及联合干预可能通过下调肾脏JAK2 mRNA表达,抑制JAK2蛋白的合成,使TGF-β1表达减少,从而改善糖尿病大鼠肾脏损伤的病理性变化。有氧运动联合白藜芦醇干预减轻肾脏病理损伤的效果优于单一的有氧运动或白藜芦醇干预。     

花生油对2型糖尿病大鼠海马CA1区神经生长因子及胆碱乙酰转移酶表达的影响

目的通过观察2型糖尿病大鼠海马CA1区神经生长因子（NGF）和胆碱乙酰转移酶（ChAT）表达的改变,研究花生油对2型糖尿病大鼠海马神经元NGF及ChAT表达的影响,探讨花生油在防治糖尿病脑病中的作用。方法 60只健康雄性SD大鼠随机分为4组：正常对照组（C组）、2型糖尿病组（T2DM组）、2型糖尿病给予2 mL花生油组（T2DM＋2 mL组）及2型糖尿病给予5 mL花生油组（T2DM＋5 mL组）。其中C组给予正常饮食,糖尿病组大鼠给予高脂饮食喂养,2个月后,按25 mg/kg体质量腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制成2型糖尿病模型,T2DM组、T2DM＋2 mL组及T2DM＋5 mL组大鼠继续给予高脂饮食。糖尿病造模1个月后处死全部大鼠,行脑冰冻切片,用免疫组织化学方法检测各组大鼠海马CA1区NGF和ChAT的表达。结果 （1）T2DM组大鼠海马CA1区NGF表达比C组明显降低（P〈0.05）,T2DM＋2 mL组及T2DM＋5 mL组大鼠海马CA1区NGF表达均明显高于未给予花生油的T2DM组（P〈0.05）。（2）T2DM组大鼠海马CA1区ChAT表达显著低于C组（P〈0.05）,T2DM＋2 mL组和T2DM＋5 mL组大鼠海马CA1区ChAT表达均明显高于未给予花生油的T2DM组（P〈0.05）。结论 2型糖尿病大鼠海马CA1区神经生长因子表达降低,胆碱能神经元数量减少,这可能是2型糖尿病脑病发生的原因之一。花生油能增加2型糖尿病大鼠海马区内神经生长因子表达,促进胆碱能神经元存活,表明花生油具有一定的保护大鼠糖尿病脑病的作用。     

有氧运动与饮食控制对2型糖尿病大鼠肝chemerin及其受体CMKLR1的影响

目的：研究4周有氧运动与饮食控制对2型糖尿病（DM）大鼠肝chemerin及其受体趋化因子样受体1（CMKLR1）的影响及其在改善糖脂代谢中的影响。方法：50只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（Con,n=6）和糖尿病造模组（n=44）。采用高脂高糖饲料联合小剂量链脲佐菌素（STZ）（30 mg/kg）的方法制备2型糖尿病模型大鼠。造模成功的DM大鼠随机分为4组（n=6）：糖尿病对照组（DM）、糖尿病运动组（EDM）、改喂普通饲料的糖尿病饮食控制组（NDM）和糖尿病运动+饮食控制组（ENDM）。运动组大鼠进行为期4周中等强度跑台有氧运动,每周运动6 d。采用罗氏血糖仪检测大鼠空腹血糖（FBG）,全自动生化分析仪检测大鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白（LDL）水平,real time PCR和Western blot分别检测大鼠肝chemerin、CMKLR1的mRNA和蛋白水平。结果：DM大鼠FBG和血清TC、TG、LDL水平显著升高的同时,肝chemerin和CMKLR1的mRNA和蛋白水平显著增加;4周有氧运动和/或饮食控制显著降低EDM、NDM和ENDM组FBG和血清TC、TG、LDL的同时,显著降低这3组大鼠的肝chemerin蛋白水平,其中ENDM组降低最显著（P<0.01）;NDM和ENDM组大鼠的肝CMKLR1蛋白水平升高（P<0.01）。结论：4周有氧运动和/或饮食控制降低2型糖尿病大鼠的肝chemerin蛋白水平、增加CMKLR1蛋白水平,这可能与其改善糖尿病大鼠的糖脂代谢有关。     

葛根素对2型糖尿病大鼠的治疗作用*

目的:观察葛根素对2型糖尿病(T2DM)大鼠的治疗作用。方法:采用高糖高脂饲料喂养加一次性腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素的方法建立T2DM 大鼠模型,随机分为正常组,模型组,二甲双胍(40 mg/kg)组,葛根素低、中、高剂量(40,80,160 mg/kg)组,每组10只大鼠;造模成功后,灌胃给药4周,每周测量大鼠体重和空腹血糖(FBG),末次给药24 h后取血,收集血清,检测各组大鼠的血糖、血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC) 、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)水平、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C),血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、尿酸(UA)水平。结果:干预4周后,与正常组比较,模型组大鼠体重显著降低(P＜0.01),FBG,TC,TG,LDL-C,ALT,AST,BUN,SCr,UA均显著升高(P＜0.01),而HDL-C 显著降低(P＜0.01);与模型组比较,二甲双胍组和葛根素各剂量组大鼠体重均显著增加(P＜0.01),FBG,TC,TG,LDL-C,ALT,AST,BUN,SCr,UA均显著降低(P＜0.01),而HDL-C显著升高(P＜0.01)。结论:葛根素能够减少T2DM大鼠体重降低幅度,降低血脂、血糖水平,可用于T2DM的治疗。     

Autoantibodies against IA-2, GAD, and topoisomerase II in type 1 diabetic patients

Prevalence of autoantibodies against IA-2 (IA-2A), glutamic acid decarboxylase (GADA), and type II DNA topoisomerase (TopIIA) of Taiwanese type 1 diabetes mellitus (T1DM) patients was investigated. Correlations of these autoantibodies with patients' clinical manifestations were also analyzed. Prevalence of IA-2A, GADA, and TopIIA in our patients was 23.6%, 47.1%, and 55.2%, respectively. Eighty percent of the IA-2A recognized the carboxyl terminus of the IA-2 protein tyrosine phosphatase-like domain. Average disease duration of IA-2A+ patients was significantly shorter than that of IA-2A- patients [3.76+/-0.42 vs. 4.98+/-0.34 years, p = 0.028]. Presence of GADA was correlated with the mean age of onset [10.82+/-0.76 vs. 8.38+/-0.77 years for GADA+ and GADA- patients, p = 0.026]. Patients with adolescent onset have higher GADA prevalence and better residual beta-cell functions. TopIIA and GADA are suggested to be better markers for Taiwanese T1DM patients because of their higher prevalence and persistence.     

Novel protein tyrosine phosphatase 1B inhibitors: interaction requirements for improved intracellular efficacy in type 2 diabetes mellitus and obesity control

Resistance to the hormones insulin and leptin are hallmarks in common for type 2 diabetes mellitus and obesity. Both conditions are associated with increased activity and expression of protein tyrosine phosphatase (PTP)1B. Therefore, inhibition of PTP1B activity or down-regulation of its expression should ameliorate insulin and leptin resistance, and may hold therapeutic utility in type 2 diabetes mellitus and obesity control. This background has motivated the fervent search for PTP1B inhibitors, carried out in the recent years. The purpose of this review is to provide the most recent advances in understanding the structural details of PTP1B molecule relevant to the interactions with inhibitors, and the progress towards compounds with enhanced membrane permeability, affinity, specificity, and potency on intracellular PTP1B; several inhibitors of benefit in type 2 diabetes mellitus and obesity control are presented and discussed.     

Autophagic adaptations in diabetic cardiomyopathy differ between type 1 and type 2 diabetes

Little is known about the association between autophagy and diabetic cardiomyopathy. Also unknown are possible distinguishing features of cardiac autophagy in type 1 and type 2 diabetes. In hearts from streptozotocin-induced type 1 diabetic mice, diastolic function was impaired, though autophagic activity was significantly increased, as evidenced by increases in microtubule-associated protein 1 light chain 3/LC3 and LC3-II/-I ratios, SQSTM1/p62 (sequestosome 1) and CTSD (cathepsin D), and by the abundance of autophagic vacuoles and lysosomes detected electron-microscopically. AMP-activated protein kinase (AMPK) was activated and ATP content was reduced in type 1 diabetic hearts. Treatment with chloroquine, an autophagy inhibitor, worsened cardiac performance in type 1 diabetes. In addition, hearts from db/db type 2 diabetic model mice exhibited poorer diastolic function than control hearts from db/+ mice. However, levels of LC3-II, SQSTM1 and phosphorylated MTOR (mechanistic target of rapamycin) were increased, but CTSD was decreased and very few lysosomes were detected ultrastructurally, despite the abundance of autophagic vacuoles. AMPK activity was suppressed and ATP content was reduced in type 2 diabetic hearts. These findings suggest the autophagic process is suppressed at the final digestion step in type 2 diabetic hearts. Resveratrol, an autophagy enhancer, mitigated diastolic dysfunction, while chloroquine had the opposite effects in type 2 diabetic hearts. Autophagy in the heart is enhanced in type 1 diabetes, but is suppressed in type 2 diabetes. This difference provides important insight into the pathophysiology of diabetic cardiomyopathy, which is essential for the development of new treatment strategies.     

2型糖尿病鼠类模型的研究进展

小鼠、大鼠糖尿病模型对基础与临床防治研究十分重要,不同的研究目标对应不同的动物模型载体。本文就目前常用的2型糖尿病鼠类模型的构建、主要疾病特征及应用等进行评述,为研究者了解、选择适合的动物模型提供参考。     

脊髓自噬功能激活与大鼠2型糖尿病神经病理性疼痛的关系

目的：探讨脊髓自噬功能与大鼠2型糖尿病神经病理性疼痛（DNP）的关系。方法：雄性SD大鼠（42只）高糖高脂饲养8周,腹腔单次注射链脲佐菌素（STZ）制备大鼠2型糖尿病模型。两周后检测机械缩足阈值（MWT）和热缩足潜伏期（TWL）,降至基础值80%以下者为2型糖尿病神经病理性疼痛大鼠,记为DNP组（24只）;未降至基础值80%以下者为2型糖尿病无神经病理性疼痛大鼠,记为DA组（18只）。另取18只大鼠为对照（control,C）组,普通饲料喂养。于确定DA与DNP分组后的第3、7和14天,测定机械缩足阈值（MWT）和热缩足潜伏期（TWL）,并在行为学检测结束后各组随机取6只大鼠处死,取L4~L6脊髓膨大,采用Western blot法检测自噬特异性蛋白微管相关蛋白1（Beclin-1）、微管相关蛋白1轻链3（LC3）和P62的表达。另取6只7 d DNP组大鼠采用免疫荧光双染法检测脊髓背角P62与小胶质细胞、星形胶质细胞、神经元的共表达情况。结果：连续8周喂养高糖高脂饲料的SD大鼠的血浆胰岛素水平升高,胰岛素敏感指数下调,表明出现胰岛素抵抗;在腹腔注射STZ后,血糖升高达到2型糖尿病诊断标准（≥16.7 mmol/L）;与C组、DA组比较,DNP组大鼠在第3、7和14天时MWT降低,TWL缩短,并且脊髓背角LC3-Ⅱ、Beclin-1表达上调,P62表达下降（P<0.05）。免疫荧光双染色显示,P62在脊髓背角表达,主要与神经元共存,少量与小胶质细胞共存,几乎不与星形胶质细胞共表达。结论：2型糖尿病神经病理性疼痛大鼠脊髓LC3-Ⅱ、Beclin-1和P62表达的改变提示脊髓自噬功能激活;脊髓背角中神经元自噬激活在2型糖尿病大鼠DNP的发生和发展起着关键作用。     

高脂饮食联合链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型的研究进展

2型糖尿病大鼠模型的建立能够为糖尿病及其并发症的发病机制、预防、诊断及治疗的研究提供理想的动物实验技术平台。2型糖尿病大鼠模型的成模率受多种因素的影响,本文就建立2型糖尿病大鼠模型的主要影响因素STZ的应用、高脂高糖饮食及大鼠的选择与饲养等做一综述。以期对建立2型糖尿病大鼠模型的方法提供一定的参考价值。     

达格列净对2型糖尿病大鼠肾脏葡萄糖转运蛋白2及葡萄糖转运蛋白4基因表达的影响

目的:探讨达格列净对2型糖尿病大鼠肾脏葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因表达的影响。方法:使用高脂饲料和一次性注射40 mg/kg链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病大鼠模型,造模大鼠以空腹血糖(FBG)含量≥16.7 mmol/L时视为造模成功。造模成功后随机分为模型组(B组,生理盐水)、达格列净低剂量组(C组,0.75 mg/kg)、达格列净中剂量组(D组,1.5 mg/kg)、达格列净高剂量组(E组,3.0 mg/kg),每组6只;另选取6只健康的SD大鼠作为正常对照组(A组,生理盐水)。各组均为灌胃给药,每天1次,连续7周。灌胃给药7周后测定大鼠的体重以及血清FBG、糖化血红蛋白(Hb A1c)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)的变化;采用酶联免疫吸附测定血清及肾组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px);采用HE观察肾脏病理学变化;采用Western blot检测肾脏组织中GLUT2、GLUT4蛋白表达; RT-qPCR检测肾脏组织中GLUT2、GLUT4 mRNA相对表达量。结果:与A组比较,各组大鼠...     

Hydrogen peroxide and peroxynitrite enhance Ca2+ mobilization and aggregation in platelets from type 2 diabetic patients

Cytosolic Ca²⁺ mobilization, especially Ca²⁺ entry, is enhanced in platelets from type 2 diabetic individuals, which might result in platelet hyperaggregability. In the present study, we report an increased oxidant production in resting and stimulated platelets from diabetic donors. Pretreatment of platelets with catalase or trolox, an analog of vitamin E, reversed the enhanced Ca²⁺ entry, evoked by thapsigargin plus ionomycin or thrombin, observed in platelets from diabetic subjects, so that in the presence of these scavengers Ca²⁺ entry was similar in platelets from healthy and diabetic subjects. In contrast, mannitol was without effect on Ca²⁺ mobilization. Catalase and trolox reduced thrombin-induced aggregation in platelets from type 2 diabetic subjects, while mannitol did not modify thrombin-induced platelet hyperaggregability. We conclude that H₂O₂ and ONOO⁻ are likely involved in the enhanced Ca²⁺ mobilization observed in platelets from type 2 diabetic patients, which might lead to platelet hyperactivity and hyperaggregability.