人体白细胞转移因子和“免疫”核糖核酸的联合抽提法——Ⅱ.“免疫”核糖核酸

本文继续介绍联合抽提法的第Ⅱ部分“免疫”核糖核酸(iRNA)的抽提。将白细胞匀浆沉淀残渣按Scherrer 和Darnell 的十二烷基磺酸钠加苯酚的热抽提法抽提。每克白细胞可得iRNAl～2毫克。A_(260)/A_(230)=2.05～2.26,A_(260)/A_(280)=2.03～2.20。RNA 含量为48.33±4.72%,DNA 含量为4.31±2.53%,蛋白质为2.76±0.32%,糖原含量为42.92±9.92%。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示五条区带,相当于4S、8S、9S、15S 和20S。冻干的iRNA 制剂经动物实验证明无毒性、无热原和无过敏性,但对家兔具有抗原性。制剂经RNase、DNase 或pronase 处理后与抗血清仍有沉淀反应,但经唾液淀粉酶处理后沉淀线消失。所以认为抗原性系由制剂中所含糖原所引起。溶于肝素溶液的制剂注射于病人,能提高其迟发型皮肤变态反应及细胞免疫反应。     

人体白细胞转移因子和“免疫”核糖核酸的联合抽提法——Ⅱ.“免疫”核糖核酸

本文继续介绍联合抽提法的第Ⅱ部分“免疫”核糖核酸(iRNA)的抽提。将白细胞匀浆沉淀残渣按Scherrer和Darnell的十二烷基磺酸钠加苯酚的热抽提法抽提。每克白细胞可得iRNA1～2毫克。A_(260)/A_(230)=2.05～2.26,A_(260)/A_(280)=2.03～2.20。RNA含量为48.33±4.72%,DNA含量为4.31±2.53%,蛋白质为2.76±0.32%,糖原含量为42.92±9.92%。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示五条区带,相当于4S、83、9S、15S和20S。冻干的iRNA制剂经动物实验证明无毒性、无热原和无过敏性,但对家兔具有抗原性。制剂经RNase、DNase或pronase处理后与抗血清仍有沉淀反应,但经唾液淀粉酶处理后沉淀线消失。所以认为抗原性系由制剂中所含糖原所引起。溶于肝素溶液的制剂注射于病人,能提高其迟发型皮肤变态反应及细胞免疫反应。     

“免疫”核糖核酸对热处理后的人淋巴细胞恢复花环的作用

正常人外周血T淋巴细胞经46℃处理1小时,失去与绵羊红细胞形成玫瑰花环的能力。这种淋巴细胞用正常人白细胞“免疫”核糖核酸(iRNA)4℃保温1小时,可以部分地恢复与绵羊红细胞形成玫瑰花环的能力。玫瑰花环恢复的程度在一定范围内与所用的白细胞iRNA浓度有关。白细胞iRNA经核糖核酸酶处理后其恢复玫瑰花环的能力明显降低,但脱氧核糖核酸酶或胰蛋白酶处理后对恢复玫瑰花环的作用很少影响,若白细胞iRNA先与绵羊红细胞温育,再以此红细胞与加热处理的淋巴细胞在4℃温育1小时,未见玫瑰花环的恢复作用,提示白细胞iRNA的这种作用是通过淋巴细胞来实现的。对白细胞iRNA恢复加热处理的淋巴细胞的作用机理进行了讨论。     

正常肝信息核糖核酸的翻译和对离体肝癌细胞的逆转分化作用

正常肝信息核糖核酸是从肝聚核蛋白体抽提RNA,通过寡聚(dT)纤维素亲和层析制备。分离的正常肝mRNA在麦胚蛋白合成系统和爪蟾卵翻译系统检定,能够翻译白蛋白,由此证明是有生物学活性的。用正常肝mRNA在离体情况下对肝癌细胞进行逆转分化研究,发现:(1)小鼠正常肝mRNA能抑制小鼠腹水肝癌细胞核酸和蛋白质的合成;初步见到人的正常肝mRNA能轻度抑制人体肝癌细胞(BEL-7404)的生长。(2)相应的正常肝mRNA分别在小鼠腹水肝癌和人肝癌细胞诱导了白蛋白合成;在人体肝癌细胞内核蛋白体聚成聚核蛋白体。(3)人体肝癌细胞受刀豆凝集素(Con A)凝集的能力减弱,这种凝集特性的改变,可以维持至3次细胞传代。这些实验结果显示肝癌细胞并非固定不可改变的,在正常肝mRNA作用下能够向正常逆转分化;讨论了mRNA转化机理,认为可能是通过肝mRNA翻译的蛋白质或mRNA本身直接调节基因转录来实现的。     

大黄素介导铁死亡途径抑制MHCC-97H人肝癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨大黄素对肝癌细胞生长的影响及其作用机制。方法 体外培养人肝癌细胞MHCC-97H,使用不同浓度的大黄素处理细胞,使用CCK-8实验检测细胞存活率筛选后续大黄素实验剂量。并将MHCC-97H细胞随机分为Blank组、Dose 1组（8μmo/L的大黄素）、Dose 2组（16μmo/L的大黄素）和Positive组（60μg/mL的顺铂）,药物处理24 h后采用平板克隆法检测细胞菌落形成,Western blot检测细胞GPX4、ACSL4、FTH1蛋白表达水平,Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力,并评估细胞铁离子含量和GSH水平。结果 大黄素可呈剂量依赖性降低细胞存活率;大黄素可降低MHCC-97H细胞克隆形成率、迁移和侵袭细胞数、GPX4蛋白水平、GSH水平,提高细胞凋亡率、铁离子含量、及ACSL4和FTH1蛋白水平。结论 大黄素可能通过诱导铁死亡途径,抑制细胞迁移和侵袭,诱导凋亡。     

免疫核糖核酸研究的进展

从定型的免疫活性细胞中抽提出的核糖核酸制品称为免疫核糖核酸。各种体内或体外的试验证明免疫核糖核酸能超越种间屏障特异地传递免疫反应。现在有证据表明,免疫核糖核酸可能具有信息核糖核酸的分子特征;它的主要来源是巨噬细胞,而受其作用后产生效应的细胞是 T 淋巴细胞或 B 淋巴细胞。免疫核糖核酸研究是一项意义重大而探索性较强的工作,本文着重讨论了关于其化学本质、细胞来源和作用机理等方面的新近进展,并且指出了今后工作中有待解决的若干关键问题。     

免疫核糖核酸——转移免疫信息的物质

致敏淋巴细胞含有两类转移免疫信息的物质,一类为可透析的转移因子(Transfer factor, TF);另一类为不可透析的免疫核糖核酸(Immune RNA, iRNA),这是两类具有重要潜能     

甲胎蛋白在体外对人肝癌细胞生长的影响

本文用MTT比色法观察了甲胎蛋白(AFP)在体外对人肝癌细胞生长的影响。结果表明,AFP能促进SMMC-7721人肝癌细胞的生长。当AFP与AFP抗体合用时,AFP抗体能减弱AFP对SMMC-7721细胞生长的促进作用;AFP抗体单用对此种细胞的生长亦有抑制作用。另一方面,在相同的实验条件下,AFP和AFP抗体对HL-60人白血病细胞的生长无明显影响;提示AFP的促生长作用具有一定的肿瘤细胞特异性,并非一种蛋白质对培养细胞的非特异性营养作用。此外,AFP亦能促进MCF-7人乳腺癌细胞的生长,AFP抗体对此种细胞的生长有抑制作用。由于MCF-7细胞存在功能性AFP受体,也能合成和分泌AFP。这就提示,人肝癌细胞中的AFP很可能与其受体特异性结合,产生促生长效应。确切机制尚待进一步阐明。     

异视黄酸对人肝癌细胞的诱导分化作用

10μmol/L的异视黄酸(13顺视黄酸,IRA)可使培养的人肝癌细胞株SMMC-7721中肝癌标志酶γ-GT逐日下降,而肝细胞分化酶TAT明显增加,峰值从对照的第4天延至第6天。这些作用基本上和视黄酸(全反式视黄酸,RA)相仿,唯IRA培养后期(第6、8天)的作用强于RA。用ABC免疫组织化学法发现:IRA还可使该细胞生成的甲胎蛋白(AFP)减少,尤其在培养的第4天作用最为明显,仅为对照细胞的1/3—1/4。并且,在IRA培养4天后,细胞表面的纤维连接蛋白Fn增高至对照的6.7—8.2倍。这些结果提示IRA能使肝癌细胞某些恶性表型转变,向正常细胞的方向诱导分化。     

异种抗血清对癌细胞的膨胀致死效应

用Ehrlich腹水癌免疫的兔子抗血清,处理Ehrlich腹水癌、S180、HAC和Hela癌细胞,可使它们发生光学显微镜下可见的膨胀现象,细胞核明显地显露出来,细胞核和细胞膜之间出现宽阔的透明区。台酚蓝溶液并不使膨胀的癌细胞染成蓝色。将膨胀的癌细胞洗涤后注入小鼠腹腔中,不会产生腹水,被注射的小鼠能长期成活。     

肺癌个体基因型免疫核糖核酸的研制

为进一步研究肿瘤的免疫治疗,探索一种型特异、体专一的肿瘤免疫核糖核酸的制备方法。取一供体肺癌患者术后切下的病变组织免疫羊,再用羊的免疫器官提制核酸,然后回注射于供体。实验中制备的型、体特异性免疫核糖核酸,各种药理指标能够达到国家同类药品标准。此法可获得有实用价值的肿瘤免疫核糖核酸,为临床应用提供了理论依据。     

抗绿脓杆菌核糖核酸的免疫活性研究

在应用抗菌素比较容易地解决了各种细菌感染的治疗之后,临床上出现了“条件致病菌”的感染问题。在革兰氏阴性杆菌中,绿脓杆菌是分布广、自然抗药性发生率高的一类条件致病细菌。它所引起的感染性疾病,近来有逐年增加的趋势,已经成为死亡率较高的难治病之一。绿脓杆菌感染常在机体防御功能低下时发生。虽然临床上不断使用新的抗菌素,但如果机体条件不改善,疗效就受到一定限制。因此国内外都在研究应用各种免疫制剂治疗和予防绿脓杆菌的感染,以便给临床控制和治疗绿脓杆菌感染寻找新途径。鉴于免疫核糖核酸有特异促进噬菌细     

甲胎蛋白(AFP)信息核糖核酸的纯化——Ⅱ.人胚肝和正常大鼠肝信息核糖核酸(mRNA)的制备

应用寡聚胸腺嘧啶纤维素(简称OdC)柱层析从哺乳动物RNA样品中提取mRNA已被人们普遍采纳。这一方法首先需要用改良的酚-氯仿法提取总RNA,然后再经OdC柱层析分离得到mRNA(下称此法为间接法)。近年来,有人用0.5％十二烷基磺酸纳(SDS)解聚多聚核糖核蛋白体(简称多聚核糖体)后,直接经OdC柱层析分离某些mRNA获得成功。据报道这一方法(下称直接法)具有条件温和、产率较高及不影响翻译活力等特点。     

抗呼吸道合胞病毒免疫核糖核酸免疫活性的研究

本文在小鼠模型系统中,应用ELISA和~(125)IUdR释放试验分别研究抗呼吸道合胞病毒免疫核糖核酸(RSV—i—RNA)诱生血清特异性抗体活性和以细胞毒活性为指标检测其增强细胞免疫的作用。实验结果表明:RSV-i-RNA能诱生血清特异性抗体和提高鼠脾细胞对靶细胞的杀伤作用,且明显高于正常核糖核酸对照组。 RSV-i-RNA的上述作用可被RNase所阻断,但不受DNase和Pronase的影响。     

蛋白激酶对活性氧调节7721人肝癌细胞生长的影响

以有义和反义人锰型超氧化物歧化酶 (MnSOD)、蛋白激酶B (PKB)cDNA分别转染人 772 1肝癌细胞系建立高、低表达MnSOD和PKB的模型 ,通过改变细胞内、外源性活性氧和抗氧化水平及PKB的活性 ,研究活性氧调节肝癌细胞生长过程中与PKB信号转导途径的关系。结果表明 ,低浓度外源性活性氧过氧化氢 (1～ 10μmol/L)应激及MnSOD低表达细胞中内源性活性氧水平升高 ,都可促进肝癌细胞增殖 ,而抗氧化剂丹参素 (4 0mg/L)干预及MnSOD高表达使细胞内源性活性氧水平相对下降 ,都可一定程度抑制细胞的生长。采用3 2 P参入法检测细胞PKB酶活性 ,发现细胞内、外源性活性氧均能激活PKB ,而采用抗氧化干预 ,能明显抑制PKB的酶活性。采用RT PCR法检测AP 1转录因子组成成员c fos和c jun基因的mRNA表达 ,发现与PKB活性呈正比。说明活性氧在特定细胞内氧化 /还原环境下可通过激活PKB途径传递信号、调控转录因子AP 1表达、促进肝癌细胞生长     

罗格列酮对裸鼠移植性人肝癌细胞生长的抑制作用

目的:研究罗格列酮(rosiiglitazone,ROZ)对裸鼠体内人肝癌SMMC7721细胞增殖的影响.方法:建立人肝癌裸鼠移植瘤模型,实验动物分为罗格列酮治疗组及对照组.观察罗格列酮对移植瘤体积和重量的变化,采用光镜观察移植瘤细胞形态学变化,流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布,免疫组织化学和蛋白印迹检测瘤组织内增殖细胞核抗原(proliferating cellnuclear antigen,PCNA)蛋白表达变化.结果:罗格列酮在体内能明显抑制移植瘤的生长,抑瘤率为50.81%;组织学显示治疗组瘤细胞异型性降低,核质比下降;流式细胞术分析显示,对照组移植瘤细胞处于G2/M期细胞为13.1%,与对照组比较,治疗组处于G2/M期细胞显著增多(29.1%).免疫组织化学和蛋白印迹检测均显示检测显示,经罗格列酮处理后,裸鼠移植瘤组织PCNA蛋白表达明显下调(P＜0.05).结论:罗格列酮可体内抑制人肝癌SMMC7721细胞增殖,并使癌细胞阻滞于G2/M期.     

影响肝星形细胞激活的免疫细胞

已知肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是一种具有多潜能的幼稚间质细胞,经一些能导致纤维化发生的细胞因子如转化生长因子(TGF)、血小板衍生生长因子(PEGF)等刺激后由富含维生素A类物质的静止表型转化为活化的肌成纤维(MFB)样表型,即发生了所谓的HSC激活[2,3]。MFB通过旁