野生和人工繁育树鼩部分生理指标检测与比较

比较野生和人工繁育树鼩的部分生理指标,为人类疾病的动物模型创制提供基本参数.血液采自昆明地区54只野生树鼩(被捕获后人工饲养1-2月)和54只子一代人工繁育树鼩.该研究首次报道在两组动物中,肌酸激酶、肌钙蛋白I、总胆汁酸、果糖胺、低密度脂蛋白胆固醇等在性别间差异无显著性;这些指标在人工繁育树鼩中的中位数(四分位数间距)依次为:1449(956)U/L、5.94(7.23)μg/L、15.6(19.7)μmol/L、393.5(80.8)μmol/L和0.36(0.32)mmol/L;在野生树鼩中依次为:986(564)U/L、4.01(4.10)μg/L、20.0(20.6)μmol/L、379.0(104.0)μmol/L和0.46(0.23)mmol/L.人工繁育树鼩生理指标表现出个体间离散程度降低趋势,但个别反映肝脏功能及心肌情况的指标表现出平均值上升,个体离散程度扩大的现象.这些生理指标为人类疾病的树鼢模型创制打下了基础.     

大鼠尿中酶类参考值检测

目的调查正常大鼠尿液样本中酶类参考值范围。方法采集95只正常SD大鼠的4 h尿液,用生化仪检测尿液中的N-乙酰基-β-D氨基葡萄糖酶（NAG）、碱性磷酸酶（ALP）、谷氨酰氨基转移酶（γ-GT）和乳酸脱氢酶（LDH）的值,参考范围以95%百分位上界表示。结果参考值范围为,雌性：NAG〈5.3 U/L,ALP〈110.8 U/L,γ-GT〈753.0 U/L,LDH〈32.6 U/L;雄性：NAG〈27.3 U/L,ALP〈329.0 U/L,γ-GT〈769.8 U/L,LDH〈40.0 U/L。以/g Cre为单位的参考值范围,雌性：NAG〈28.9 U/g,ALP〈723.5 U/g,γ-GT〈1763.2 U/g,LDH〈113.1 U/g;雄性：NAG〈84.3 U/g,ALP〈680.2 U/g,γ-GT〈2522.3 U/g,LDH〈121.8 U/g。结论尿中酶类参考值范围为药物肾毒性评价提供了背景数据。     

树鼩视线阻隔后的取食行为观察和食物选择

为获得树鼩行为学特征的基础数据,通过视线阻隔处理,观察雄性成年树鼩的行为变化。结果表明树鼩的活跃度和取食逐步提高,阻隔时间与运动树鼩数及取食数有回归关系,回归方程为:运动树鼩数=50.954+时间×0.607(R2=0.870,n=80)。取食树鼩数=e(4.356-0.721/时间)(R2=0.996,n=80)。树鼩对4种水果(F=294.234;d=3;P=0.000)、动物性食物(F=279.692;d=3;P=0.000)及混合食谱(F=239.692;d=3;P=0.000)的取食量有显著差异(P0.01),树鼩喜好甜而多汁的石榴和面包虫。本研究建立了一种行为学观察的基础方法和数据,为树鼩行为学研究提供依据。     

树鼩血清丙氨酸氨基转移酶参考水平

用 Reitman 氏法检测123只健康树鼩(♀71只♂52只)的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),其平均正常值为22.45±12.25单位,正常值范围在6—62之间,♀♂无明显差别。这一结果为树鼩肝功能损害情况的观察提供了客观的对比数据。     

全自动生化分析仪测定血清AST同工酶

应用天冬氨酸氨基转移酶抑制剂“AMANO-3”水解样品中的线粒体型天冬氨酸氨基转移酶同工酶（m-AST）,测定血清中剩余的胞浆型AST同工酶（c-AST）活性,进而与总AST活性相比较并计算出受抑制剂水解的m-AST同工酶活性．由于此方法采用蛋白水解反应破坏m-AST,因此测定方法可直接应用于生化自动分析仪．亦建立了一个适于日立7150分析仪的AST同工酶联合测定方法．其测定和计算出的m-AST同工酶批内CV为3.5％～7.9％;其结果(y)与AST同工酶电泳迁移率(x)相关．y=1.019x-0.489,r＝0.996（n＝30）．测定了113名健康人m-AST和c-AST,其m-AST参考值范围1.64～9.64U/L,x±s＝(5.641±2.013)U/L;c-AST参考值范围5.69～16.81U/L,x±s＝(5.641±2.013)U/L．     

树鼩骨髓间充质干细胞体外分离培养及成脂成骨诱导

目的：探讨树鼩骨髓间充质干细胞（ BM-MSCs）的体外分离、传代及定向诱导为脂肪细和成骨细胞的可行性。方法通过密度梯度离心联合贴壁培养法对树鼩骨髓间充质干细胞进行体外分离、扩增、纯化,倒置相差显微镜进行形态学观察。用成脂诱导液（ DMEM/F12＋10％FBS＋100 U/mL青霉素＋100μg/mL链霉素＋1.0μmol/L地塞米松＋0.2 mmol/L吲哚美辛＋0.01 mg/mL胰岛素＋0.5 mmol/L IBMX）和成骨诱导液（高糖DMEM＋10％FBS＋100 U/mL青霉素＋100μg/mL链霉素＋50 ng/mL BMP-2）对分离的树鼩BM-MSCs分别定向诱导为脂肪细胞和成骨细胞。结果原代和传代细胞为梭形或三角形,可增殖形成克隆。 BM-MSCs成脂诱导后油红O染色细胞内出现红色脂滴,成骨诱导后茜素红染色可观察到矿化结节。结论密度梯度离心联合贴壁培养法分离培养树鼩BM-MSCs简便可行,获得的BM-MSCs可体外诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞。     

DMBA诱导树鼩乳腺肿瘤(中缅树鼩)

目的:建立一个合适的乳腺癌动物模型将在研究人类乳腺癌的发生、发展、转移等方面中发挥着越来越重要的作用。7,12-二甲基苯并蒽(7,12-dimethylbenz anthracene,DMBA)在实验中能诱导大鼠产生乳腺肿瘤。树鼩的基因的结构与人类的相似程度比啮齿类动物要高,而且树鼩的自发性乳腺癌已经有被报道,因而树鼩很有可能是研究乳腺肿瘤更合适的动物模型。因此我们想用致癌剂DMBA诱导树鼩产生乳腺肿瘤而建立树鼩的乳腺肿瘤模型。方法:在这个研究中,我们采用了十只在分娩之后失去幼崽的雌树鼩,其中一半的树鼩在腰部双侧乳房的脂肪垫注射100 mg/kg的DMBA,其余的树鼩作为对照组没有作DMBA处理。对生成的肿瘤组织进行病理切片HE染色的形态特点分析以及免疫组化化学法测定Ki-67、雌激素受体、孕酮受体、人表皮生长因子受体-2、E-钙粘蛋白、P120连环蛋白的表达。结果:通过诊断在DMBA处理的树鼩中,5分之1发展浸润性导管癌,其余发展成原位导管癌。结果还证明了诱导出来的乳腺肿瘤的形态学和病理学特征与人类的浸润性导管癌相似。结论:结果显示我们采用DMBA注射失去幼崽的雌树鼩的乳腺来诱导乳腺肿瘤是有效的,诱导出来的肿瘤组织学特征与人的乳腺癌相似,诱导的肿瘤组织表达目前人常用的乳腺癌相关分子生物学标记,并且表达情况与人的乳腺癌相似。这表明了DMBA诱导树鼩乳腺癌可以提供一个适合于研究人类乳腺癌发生、发展、转移和治疗的动物模型。     

人轮状病毒G1P[8]型感染树鼩原代小肠上皮细胞模型的建立

目的探究树鼩原代小肠上皮细胞的增殖特性,建立人轮状G1P[8]型病毒体外感染树鼩原代小肠上皮的细胞模型。方法采用胶原酶XI和中性蛋白酶I联合消化法获取树鼩原代小肠上皮细胞,经纯化和鉴定,用人轮状G1P[8]型病毒感染细胞,测定培养上清的病毒滴度和载量,并用Western blot和间接免疫荧光检测法检测人轮状病毒G1P[8]型VP6蛋白的表达情况,评价人轮状G1P[8]型病毒体外对树鼩原代小肠上皮细胞的感染性。结果分离的树鼩原代小肠上皮细胞经传代培养纯化,获得纯度达90%树鼩原代小肠上皮细胞。对树鼩原代小肠上皮细胞、原代肾细胞、HCT116细胞和MA104细胞进行轮状病毒易感性比较,确定树鼩原代小肠上皮细胞可以被人轮状病毒G1P[8]感染,培养72 h时病毒滴度可达到2.0×105TCID_(50)/m L。经Western blot和间接免疫荧光发现在人轮状G1P[8]型病毒感染树鼩原代小肠上皮细胞1~5 d均能检测到人轮状病毒VP6蛋白的表达和分布。结论确立了树鼩原代小肠上皮细胞的分离、纯化与培养方法,并建立了人轮状G1P[8]型病毒感染树鼩原代小肠上皮细胞的体外模型。     

树鼩呼肠孤病毒的分离鉴定

致病性病毒严重危害树鼩(treeshrew,Tupaia)生命健康,但却鲜见有关树鼩自然感染病毒的报道。该研究采集6份因腹泻死亡的野生树鼩粪便,用Vero细胞进行病毒分离,72h后细胞发生病变,特征为颗粒增多、破碎、变圆固缩、拉网及脱落等;电镜观察显示该病毒为球形,双层衣壳,完整直径~75nm。纯化病毒经核酸PAGE电泳后呈现10个核酸节段,并为典型的3:3:4排列。哺乳动物呼肠孤病毒(mammalian orthoreovirus,MRV)L1基因保守区RT-PCR检测、序列分析及进化树构建结果表明,该病毒株属于MRV,且与来源于蝙蝠的呼肠孤病毒分离株(T3/Bat/Germany/342/08)同源性最高。MRV是人兽共患病病毒,该实验首次从树鼩体内成功分离到MRV,对今后研究制定实验树鼩病毒学控制标准具有指导意义,同时为有效预防该病毒在树鼩与人类之间传播提供了实验依据。     

树鼩血压和心率的无创测定

目的建立健康树鼩的心率、血压正常值参考范围,并探讨不同来源、不同性别、不同年龄树鼩心率、血压的差异。方法随机挑选实验树鼩180只,按来源分为野生成年组、F1代自繁成年组和青幼年组三个组,每组雌雄各半,共60只。采用智能无创血压计（鼠仪）逐只测定HR（心率）、SBP（收缩压）、DBP（舒张压）和MBP（平均动脉压）。结果野生成年树鼩、自繁成年树鼩和青幼年树鼩心率分别为394.33±37.74 BPM、351.61±72.76 BPM和378.19±69.04 BPM,野生和自繁成年树鼩组差异有显著性（P〈0.05）。自繁成年树鼩收缩压、舒张压和平均动脉压均明显低于青幼年树鼩,差异有极显著性（P〈0.01）。野生成年树鼩和自繁成年树鼩相比,收缩压、舒张压和平均动脉压差异均无显著性（P〉0.05）。结论大鼠无创血压计适合于树鼩的血压、心率的测量。通过测定,获得了野生成年树鼩、F1代自繁成年树鼩和青幼年树鼩的心率和血压参考值范围,丰富了树鼩基础生理数据,可为相关研究提供科学参考。     

Laboratory photobioreactors

Growing phototrophic microorganisms consume the light energy. These microorganisms most often suffer from light deficiency because of exponential decrease in the energy of light passing through an absorbing medium. Therefore, effective distribution of light within the cultures is needed for their intensive cultivation. This is possible in special devices called photobioreactors. The photobioreactors described in the literature are classified into several types according to their geometric features. Their advantages and drawbacks are analyzed. Criteria currently used for comparing various photobioreactors are specified.