用PCR检测恶性纤维组织细胞瘤体DNA的变化

为了进一步探讨恶性纤维组织细胞瘤的癌变机 理,作者采用聚合酶链反应PCR对该肿瘤患者的瘤 细胞和淋巴细胞DNA进行了配对扩增实验。 如果来自同一个体的两种组织的DNA序列完全 一致,经聚合酶链反应扩增后的DNA片段大小应完 全相同,如果经扩增后的片段大小不一致或有片段的 丢失增加,则提示DNA序列有改变。     

连接介导PCR及其在体内足迹研究中的应用

连接介导聚合酶链反应是以连接反应为基础的单侧PCR技术,首先在DNA片段的一端连接上一个公共连接子,而后在这个连接子与另一个DNA序列特异的引物间扩增.Vent聚合酶的使用,延伸产物捕获及连接子标记选择策略的采用,大大提高了连接介导聚合酶链反应的敏感性.这一技术的发明大大促进了体内足迹等研究的进行.     

聚合酶链反应及其在病毒学工作中的应用

聚合酶链反应(Polymerase Chain reaction,PCR)又称体外基因放大技术,是一种在体外将特异性DNA序列进行高效扩增的方法。DNA或RNA均可作为模板(template),进行扩增。由于逆转录酶的作用,将mRNA转化为cDNA。模板DNA热变性解链,两个寡核苷酸引物(oligonucleotide primers)分别连结在待扩增的DNA片段两侧。在DNA     

基因工程

介绍了新发展的一种方法.用于检测并监视遗传工程菌在环境中的动向.方法中采用了聚合酶链反应法进行靶DNA扩增,然后使扩增产物与特异性寡聚核昔酸     

“聚合酶链反应（PCR）原理”的教学设计

试将“聚合酶链反应（PCR）技术”选修内容,移到必修的“DNA的复制”之后,引导学生由DNA体内扩增类比推理DNA体外扩增,构建单元知识结构框架。运用科学史料,引导学生体验PCR原理和技术的形成过程,认同从科学灵感到技术实践是科学家的智慧结晶。     

应用聚合酶链反应改造蛙鱼生长激素cDNA

为了在大肠杆菌中表达天然序列的娃鱼生长激素基因,本研究应用聚合酶链反应扩增方法改造娃 鱼生长激素cDNA,成功地扩增出编码蛙鱼生长激素成熟肤的序列,并在该序列的5端和3端分别引 人EcoRI和BamHI的识别序列,使之便于进入载体,获得亚克隆。结果表明：应用聚合酶链反应扩 增及分子克隆方法改造蛙鱼生长激素cDNA较传统的DNA重组方法简便,效率高。文中对聚合酶链 反应扩增中非预期突变进行了讨论。     

聚合酶链反应实验课的教学

聚合酶链反应(PCR)是近年发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的分子生物学技术,该法操作简便快速,并且非常有效,可在很短的时间内得到数百万个特异DNA序列的拷贝.     

聚合酶链反应在牛血清支原体检测中的应用

为了探讨聚合酶链反应在牛血清支原体检测上的应用价值,以支原体高度保守的rRNA操纵子(支原体基因组中16SrRNA的编码区序列)设计引物,采用碱裂解法提取牛血清中支原体DNA作为模板进行聚合酶链反应。结果表明,阳性、阴性和内控对照都扩增出了预期的条带,聚合酶链反应与支原体培养法比较,有灵敏、快速、特异性高的特点,可用于牛血清中支原体的常规检测。     

人头发DNA的提取及其基因扩增

头发是犯罪现场最容易得到的材料之一。本文报道从人的头发中提取DNA的方法以及利用PCR(聚合酶链反应)技术,从少量人发DNA扩增大量拷贝数的基因片段。对基因扩增得到的大量基因片段进行进一步的基因分析,将为法医物证学提供客观证据,具有重要价值。     

聚合酶链反应用于高效基因定位改造

聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction,简称PCR）是近几年发展起来的一种DNA体外扩增技术,其原理和它的一些应用（诸如在临床医学、考古学和法医学等方面）已有综述[1,2,3].     

主编导读

热稳定性高、耐盐性能好、扩增速率高、保真度高的DNA聚合酶在PCR反应中具有广泛的用途.翁妍等[1]从超嗜热古菌(Thermococcus eurythermalis)中克隆了一个B家族DNA聚合酶,命名为Teu-PolB DNA聚合酶.该DNA聚合酶的扩增速率和保真度优于Taq和Pfu DNA聚合酶.扩增产量略高于P...     

PCR技术在疾病诊断中的应用

多聚酶链反应(PCR)是近几年发展起来的先进的快速体外基因扩增技术,它是以待扩增的两条DNA(或RNA)链为模板,由一对人工合成的寡核苷酸引物介导,通过DNA聚合酶酶促反应,快速体外扩增特异DNA序列,并具有操作简便、快速、特异和灵敏的特点,已在很短的时间里迅速进入生命科学、医学研究、遗传工程、法医学、考古学、疾病诊断等各个领域,本文仅就在疾病诊断中的应用作一介绍。     

LCR将引致诊断学革命

聚合酶链反应(PCR)的分枝——连接酶链反应(LCR)因其易于自动化并可得出定量结果,在诊断学中可能比PCR更有效。此两种方法均以DNA扩增和水生栖热菌(Thermus aquaticus)的耐高温酶为基础,只是在LCR中使用的是DNA接连酶。PCR利用包括目标序列在内的寡核苷酸片段(OFs)进行扩增,而LCR所用的OFs是实际存在于目标序列中的OFs。因此,用PCR法扩增的序列是不确定的,必须经过进一步鉴定,而用LCR法只扩增特定的OFs,所以扩增和检测一步完成。     

念珠菌DNA同源性研究的方法及应用

念珠菌感染在临床的患病率和致死率都很高,研究念珠菌同源性有利于了解念珠菌的流行病学特点,为临床诊断和治疗提供帮助,本文就研究念珠菌同源性常用的方法：随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA,RAPD）,脉冲场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis,PFGE）,聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR single—strand conformational polymorphism,PCR—SSCP）,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR restriction fragment length polymorphism,PCR—RFLP）的原理、应用作一综述。     

单根毛发具有不同的DNA分型

在DNA水平上研究遗传变异性已在基因定位和疾病诊断方面取得明显进展,并应用于法医学领域。用限制性片段长度多态性(RFLP)分析DNA时,多个位点分型需要微克量的DNA,单个位点则需数百毫微克量的DNA。象单根毛发和血斑等法医样品往往不能获得上述量的DNA。既然单个DNA分子的某一特定基因片段也能用聚合酶链反应(PCR)大量扩增,为了检测人单根毛发中的多态性DNA顺序,实验以PCR扩增毛发DNA,然后进行DNA分型。     

1109型微电脑自动基因扩增仪

当前,采用分子生物学最新技术——聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)可在生物体外,靠Taq DNA聚合酶的作用,于较短的时间内将目的基因不失真地扩增几十万倍到一百万倍。从而使分析鉴定某些基因片段序列的工作省略了许多复杂的步骤。 应用PCR技术对目的基因进行扩增时,原始的方法是把盛有反应液的样品管用手工在热     

Bst DNA聚合酶大片段在全基因组扩增中的应用

Bst DNA聚合酶大片段作为一种常用的DNA聚合酶,因其独特的特点:能引发链置换反应、高保真、耐高温等,而成为一种重要的DNA多重置换扩增酶。目的:为减少成本,设计一种高产,方便且扩增活性高的Bst DNA聚合酶大片段表达体系;探究该酶应用于胃癌石蜡包埋组织基因组DNA的扩增条件。方法:采用p TWIN1质粒作为载体克隆表达Bst DNA聚合酶大片段,应用几丁质亲和层析柱纯化该酶,使用该酶对人类基因组DNA进行不同温度下扩增,探究其最适反应温度,并据此对胃癌石蜡包埋组织基因组DNA进行扩增。结果:由此得到的Bst DNA聚合酶大片段能运用于胃癌石蜡包埋组织基因组DNA的扩增,扩增效率可达200倍,并能应用于a CGH芯片。结论:扩增得到保真性高,覆盖基因组范围大的DNA扩增产物。该应用与a CGH结合,使得对少量的癌症石蜡包埋组织DNA样本进行全基因组扩增,并进行其基因拷贝数变异研究成为可能。     

利用聚合酶链反应扩增基因片段

聚合酶链反应(PCR)是一种模拟天然DNA复制过程的核酸扩增法,具有敏感特异、产率高、操作简单、容易自动化等特点。由于它有成指数倍(2~n)扩增靶序列的能力,又被称之为“无细胞分子克隆”或“试管内分子克隆”。我们以化学合成的寡核苷酸的粗提物为引物,含目的基因片段的重组质粒DNA为模板,利用PCR技术成功地扩增出数百至3544bp的特异性     

用DNA扩增法检测镰状细胞基因

本文报道应用DNA扩增技术对国内首例镰状细胞特征患者(Hb s杂合子)进行基因诊断。方法是从患者干血标本中微量抽提基因组DNA,通过聚合酶链反应(PCR)扩增其β珠蛋白基因,经限制性内切酶MstⅡ消化后作电泳分析直接检测Hb S基因。本文介绍的DNA诊断技术快速、灵敏、简便,它不需要放射性同位素标记的探针,可以采用干血抽提的DNA,因此,对遗传病基因诊断和携带者的筛查具有重要价值。     

聚合酶链反应在研究DNA多态性中的应用

聚合酶链反应(Polymerase chain reaction PCR)是一种体外DNA扩增技术,自1985年Saiki等首次报道PCR方法以来,PCR技术迅速发展,并已广泛应用于生命科学各个方面。如基因克隆、遗传病的诊断、传染病的诊断、癌基因的检测等,由于PCR技术特异性强,扩增效率高、快速、录敏,且能克服限制性片段长度多态性(RFLP)的局限性,因此,它被有效地应用于研究DNA多态性。