肝细胞与肝癌细胞内β-葡萄糖醛酸酶免疫电镜比较研究

β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ,简称β－Ｇ）在正常人体组织匀浆和体液中含量很低,在人体细胞中β－Ｇ超微结构定位尚未见报道。采用低温包埋,胶体金标记、免疫电镜技术,进行了人体肝细胞和肝癌细胞内β－Ｇ的定位。实验结果表明,β－Ｇ定位于内质网,同时观察到肝癌细胞中标记β－Ｇ的金颗粒数目明显多于肝细胞中金颗粒数目。这一结果可能对肝癌的期发现,早期诊断提供一种新方法     

人肝细胞内β-葡萄糖醛酸酶定位定量研究

本实验采用抗β┐葡萄糖醛酸酶（β┐Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ,简称β┐Ｇ）抗体及胶体金探针技术对人肝细胞超微细胞内β┐Ｇ进行定位及定量研究,结果表明,β┐Ｇ定位于肝细胞中的溶酶体和内质网,并且在溶酶体内分布的量较多,与内质网中分布的量相比有显著性差异（Ｐ＜０．０１）,因此溶酶体可做为研究β┐Ｇ与肝细胞病变关系在细胞超微结构水平的形态学研究的模型     

β—连接素在膀胱移行细胞癌中表达的意义

目的 探讨β－连接素（β－ctenin）蛋白的表达及其与膀胱移行细胞癌组织学特征和侵袭的关系。方法 采用免疫组化SP法检测46例膀胱移行细胞癌组织中的β－ctenin的表达。结果 正常膀胱粘膜上皮细胞全部表达β－ctenin,膀胱移行细胞癌中β－ctenin的表达率分别是“＋＋＋”为52．1％（24／46）,“＋＋”为32．6％（15／46）,“＋”O 15．2％（7／46）。侵袭型的膀胱移行细胞癌中β－ctenin表达率是“＋＋＋”为11．1％（1／9）,显著低于乳头状型者（P＜0．01）。结论 β－ctenin的表达与膀胱移行细胞组织学特征及侵袭有相关性,可作为判断肿瘤恶笥肿瘤、侵袭、预后的价值指标。     

极耐热性β-葡萄糖醛酸酶的高效表达和酶学性质及其应用

从海栖热袍菌克隆出编码热稳定性β-葡萄糖醛酸酶基因,以热激载体pHsh为表达质粒,在大肠杆菌中得到高效表达。基因表达产物通过一步热处理后,酶纯度达电泳均一。纯化重组酶酶学性质研究表明,β-葡萄糖醛酸酶的最适反应温度为80℃,最适反应pH为5．0,pH5．8～8．2之间酶的稳定性较好,80℃的半衰期为2h,SDS—PAGE结果显示分子量为65.9kD,与理论推算值相吻合。以对硝基苯-β-葡萄糖醛酸苷（pN/PG）为底物时,其动力学参数Km值0.18mmol／L,Vmax值为312u／mg。初步的应用分析表明,该重组酶能催化甘草酸转化为甘草次酸。     

血清β-葡萄糖醛酸酶测定在早期肝癌诊断的意义

研究血清 β-葡萄糖醛酸酶 (β- G)活性测定对早期肝癌的临床意义。用 EL ISA技术 ,测定早期肝癌患者血清 β- G活性 ,并对早期肝癌患者治疗前、后血清 β- G活性变化进行检测。结果表明早期肝癌患者血清 β- G活性明显高于对照组 ,(P<0 .0 1)。早期肝癌患者经手术切除或介入治疗后 ,血清 β- G活性明显降低 ,(P<0 .0 5 )。结果显示血清 β- G检测对早期肝癌的诊断、治疗的判断均有一定的意义。     

重组β-葡萄糖醛酸苷酶键选择性的半理性改造

为了提高Escherichia coli重组表达的β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-E)的键选择性,本研究以PGUS-E结构与功能关系的推测为指导,选择了可能影响PGUS-E的键选择性的R329、T369、N467位点进行定点饱和突变,利用薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对键选择进行筛选,得到优势突变酶R329K、T369V。结果显示:与PGUS-E酶相比,突变酶R329K、T369V键选择性分别提高26.9%、34.3%。突变酶的酶学性质研究表明,突变酶的最适p H和温度与PGUS-E一致,但其酶催化效率下降。由此可见,R329、T369对酶催化的键选择性和酶的活性有显著影响。综上结果,本文应用饱和突变方法改善了PGUS-E的键选择性,为酶的结构和功能关系理解提供了实验依据。     

β-catenin和磷酸化的β-catenin在上尿路移行细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨β- catenin在上尿路移行细胞癌中表达的临床意义.方法免疫组化法检测β-catenin和磷酸化β-catenin在38例上尿路移行细胞癌中的表达情况,并分析其与预后的关系;Western blot法检测β-catenin在26例上尿路移行细胞癌中的表达情况.结果磷酸化的β-catenin在所有标本中均为阴性表达.β-catenin随着病理分级的增高正常表达率下降(P<0.05),随着临床分期的增高,正常表达率下降(P<0.05);β-catenin异常表达方式为下调表达,没有在细胞内的分布异常;β-catenin异常表达组预后不良.结论上尿路移行细胞癌中存在β-catenin的异常表达,异常表达与预后不良有关,可作为判断预后的指标.     

基于膨润土的层柱黏土固定β-葡萄糖醛酸苷酶的研究

以膨润土制备的层柱黏土为载体,考察给酶量、固定化pH、温度和时间对固定化β-葡萄糖醛酸苷酶活性的影响,并对其操作稳定性进行研究。结果表明：给酶量为2700U／g,最适pH为3．6,固定化温度40℃,固定化60min条件下固定化酶催化活性较高;酶经固定化后其热稳定性及储存稳定性显著提高。     

产紫青霉中β-葡萄糖醛酸苷酶的诱导表达

针对产紫青霉(Penicillium purpurogenum)Li-3发酵生产β-葡萄糖醛酸苷酶存在的碳代谢阻遏现象,研究β-葡萄糖醛酸苷酶的高效诱导表达策略。在发酵条件优化的基础上,建立了新的产酶诱导工艺:葡萄糖的初始质量浓度5 g/L,在葡萄糖耗尽时加入20%诱导剂(10 g/L GL+1.2%Tween80)进行诱导,每24 h添加1次诱导剂,诱导72 h后立即转到40℃摇床发酵48 h。采用该工艺进行发酵,菌体出现了"二次生长"现象,比酶活从647.99 U/mL提高至2 356 U/mL,提高了近3倍。     

胆汁β-葡萄糖醛酸苷酶的性质及其计算荧光法

 胆汁经Sephadex G-25分子筛层析和DEAE-纤维素吸附处理,除去其中直接胆红素及胆汁酸盐,然后对其中的β-葡萄糖醛酸苷酶(GUSB)的性质进行了详细研究:该酶的最适温度为56℃;最适pH为4.5;以4mu Gr为底物测得Km为0.68mmol/L;直接胆红素是其竞争性抑制剂,其k_i=2.04×10~(-3)mmol/L;PI_1=6.0—6.2,PI_2=7.2—7.4,MW=280kD。根据竞争性抑制的米氏方程式设计建立了一个在直接胆红素并存的条件下,定量测定胆汁GUSB的计算荧光法,准确性为97.97±1.79％,重复性CV=1.2％,测定时间大大缩短。利用本法在pH4.5和7.0条件下测定了20例胆红素胆结石和17例胆固醇胆结石患者的胆汁GUSB的真实活性。结果指出:不论在pH4.5或7.0条件下,前组活性均显著高于后组(P<0.01)。证明胆汁中高GUSB活性与胆红素胆结石的形成有密切关系。     

血清β—葡萄糖醛酸酶测定的早期肝癌诊断的意义

研究血清β－葡萄糖醛酸酶（β－G）活性测定对早期肝癌的临床意义。用ELISA技术,测定早期肝癌患血清β－G活性,并对早期肝癌患治疗前、后血清β－G活性变化进行检测。结果表明早期肝癌患血清β－G活性明显高于对照组,（P＜0.01）。早期肝癌患经手术切除或介入治疗后,血清β－G活性明显降低,（P＜0.05）。结果显示血清β－G检测对早期肝癌的诊断、治疗的判断均有一定的意义。     

大肠杆菌及其L型β－葡萄糖醛酸酶活性测定

本文采用改良的Ｆｉｓｈｍａｎ法对胆石症、胆系感染者的胆汁标本中分离出的２０株大肠杆菌及其Ｌ型进行β－葡萄糖酸酶活性测定。结果显示２０株大肠杆菌及其Ｌ型均可产生β－葡萄糖醛酸酶,但大肠杆菌Ｌ型产此酶的能力仅为其细菌型的５８．６９％。胆汁中的细菌主要以Ｌ型的形式存在,所以,大肠杆菌Ｌ型与胆红素钙结石的形成有关。     

大肠癌细胞分泌的β—葡萄糖醛酸苷酶与其侵袭力关系的研究

以Fischman法检测了6种培养的人大肠癌细胞系分泌至培养液的β-葡萄糖醛酸苷酶活力。结果显示高侵袭力细胞系分泌的该酶活力显著高于低侵袭力细胞系,提示培养的人大肠癌细胞分泌的β-葡萄糖醛酸苷酶水平可作为判断其侵袭力高低的有用指标。     

一氧化氮合酶（NOS）在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

目的检测膀胱移行细胞癌中一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）的表达,并分析其表达与肿瘤病理特性的关系.方法采用免疫组织化学技术检测35例膀胱移行细胞癌标本、12例癌旁粘膜标本及8例正常膀胱粘膜标本中一氧化氮合酶三种亚型的表达情况.结果 35例肿瘤标本中nNOS、iNOS、eNOS阳性表达率分别为74.3%、85.7%、42.9%,膀胱移行细胞癌中iNOS表达较正常膀胱粘膜增高.但移行细胞癌、癌旁粘膜、正常粘膜三组间nNOS及eNOS表达无差别.nNOS、iNOS、eNOS表达与膀胱移行细胞癌分期分级可能无相关性.结论 iNOS在膀胱移行细胞癌中表达增高,可能参与膀胱移行细胞癌的发生发展.     

通过葡萄糖醛酸酶-半乳糖苷酶-色氨酸酶(GGT)试验快速检定大肠杆菌的

本文报告用纸片法检查376株细菌产生葡萄糖醛酸酶、半乳糖苷酶和色氨酸酶的能力(GTT试验),97%的大肠杆菌,47.4%的志贺氏菌,41.1%的沙门氏菌能产生葡萄糖醛酸酶。肠杆菌科的其它细菌,包括枸橼酸杆菌,产气肠杆菌,阴沟肠杆菌,蜂窝哈夫尼亚菌,肺炎克雷伯氏菌,爱德华氏菌,沙雷氏菌属,变形杆菌,摩根氏菌属,司徒氏普鲁菲登斯菌(一株例外),雷极氏普鲁菲登斯菌和小肠结肠炎耶氏菌均不产生葡萄糖醛酸酶,假单胞菌属中的绿脓杆菌、粪产碱杆菌以及弧菌科的类志贺邻单胞菌也为阴性。132株大肠杆菌中,90.9%的菌株,其     

基于双酶偶联法合成尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的研究

尿苷二磷酸（uridine diphosphate,UDP）-葡萄糖醛酸是细胞内重要的糖基供体,参与多种代谢途径,也是体外进行糖基化反应的重要糖基供体,但其价格昂贵、工艺复杂,限制了其大量使用,无法满足生产需求。基于此,利用双酶偶联法氧化UDP-葡萄糖生成UDP-葡萄糖醛酸,并研究反应产物的合成情况。以UDP-葡萄糖为底物、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+）为辅因子,利用化脓性链球菌Streptococcus pyogenes源的尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶（UDP-glucose dehydrogenase,UGD）、猪源的乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）,双酶偶联催化合成UDP-葡萄糖醛酸,并通过高效液相色谱、质谱及核磁共振氢谱对反应产物进行检测,确定产物的结构及产物的生成量。结果表明,利用双酶偶联法氧化UDP-葡萄糖所得到的产物为UDP-葡萄糖醛酸。在UGD的作用下,氧化UDP-葡萄糖生成UDP-葡萄糖醛酸,同时辅因子NAD+在LDH的作用下实现循环再生,减少高能产物辅酶还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide,NADH）对反应的反馈抑制作用,产物的生成率约为60.17%。研究提高了产物UDP-葡萄糖醛酸产物生成量,为后续工业化制备提供了新思路。     

极耐热性b-葡萄糖醛酸酶的高效表达和酶学性质及其 应用

从海栖热袍菌克隆出编码热稳定性b-葡萄糖醛酸酶基因, 以热激载体pHsh为表达质粒, 在大肠杆菌中得到高效表达。基因表达产物通过一步热处理后, 酶纯度达电泳均一。纯化重组酶酶学性质研究表明, b-葡萄糖醛酸酶的最适反应温度为80oC, 最适反应pH为5.0, pH 5.8~ 8.2之间酶的稳定性较好, 80oC的半衰期为2 h, SDS-PAGE结果显示分子量为65.9 kD, 与理论推算值相吻合。以对硝基苯-b-葡萄糖醛酸苷(pNPG)为底物时, 其动力学参数Km值0.18 mmol/L, Vmax值为312 u/mg。初步的应用分析表明, 该重组酶能催化甘草酸转化为甘草次酸。     

树脂包埋胃粘膜上皮细胞内β－葡萄糖醛酸酶免疫电镜的研究

树脂包埋胃粘膜上皮细胞内β－葡萄糖醛酸酶免疫电镜的研究张弘,康麟,于安民,陈铁镇,刘树立（中国医科大学病理解剖学教研室,沈阳１１０００１,沈阳市大东区卫生局）许多研究证实了细胞中含有的溶酶体酶与炎症反应,细胞毒性,抗原改变等有关,有的文献提示溶酶体酶...     

抗体形成细胞发育的免疫电镜研究

用包埋前免疫电镜技术,研究以辣根过氧化物酶二次免疫后2、3、5、8和10天豚鼠腘淋巴结中抗体形成细胞的发育和分化。按照细胞的不同发育阶段和抗体阳性反应特征,可将它们分为四类细胞:(1)Ⅰ类细胞(淋巴细胞),核位于细胞中央,胞质很少,核周腔呈阳性反应,细胞质中有大量均匀分布的阳性颗粒;(2)Ⅱ类细胞(前浆细胞),核质比减低,有的核偏位,胞质中出现大量颗粒状短或棒状阳性反应物,其中有一些呈平行排列;(3)Ⅲ类细胞(前浆细胞),胞质中显示大量平行排列的阳性反应物;(4)Ⅳ类细胞(浆细胞),胞质中平行排列的阳性反应物连结成网状。根据细胞的形态以及胞质中阳性反应物从颗粒状、短棒状到平行排列的片层和连结成网状的变化,显示出从淋巴细胞经前浆细胞发育为成熟浆细胞,不断合成并累积抗体的动态过程。     

激光捕获显微切割技术在膀胱移行细胞癌相关基因研究中的应用

背景与目的:激光捕获显微切割技术 (LCM)是获取均一目的细胞的有效方法。利用LCM技术从膀胱粘膜中分离膀胱移行上皮细胞从肿瘤间质细胞中分离膀胱癌细胞,进行RNA提取、纯化、浓缩以备进一步研究。方法:采用LCM技术分别从正常膀胱粘膜及膀胱癌组织冰冻切片中获取膀胱移行上皮细胞及膀胱癌细胞,提取RNA,并对微量RNA进行纯化、浓缩。然后用RT PCR验证TotalRNA中β actin基因表达水平。结果:对照实验Ⅰ证实经LCM后RNA完整性较好;经对照实验Ⅱ初步确定设定条件下LCMshooting次数与可获得RNA量间对应关系。从膀胱粘膜中捕获膀胱移行上皮细胞 2 5万shootings;从膀胱癌组织中获取癌细胞 2 0万shootings。经RT PCR验证β actin基因表达表达完整。结论:使用LCM技术能成功地获取较为均一的研究目的细胞,RNA完整性较好,能用于进一步研究中。