白藜芦醇对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的：研究白藜芦醇体外活性,确定它的植物雌激素作用。方法：采用MTT法观察不同浓度白藜芦醇对MCF-7细胞增殖作用的影响。采用DNA ladder法和荧光显微镜观察高浓度白藜芦醇对细胞的影响。免疫组化法观察低浓度白藜芦醇对核增殖抗原PCNA表达的影响。结果：MTT结果显示白藜芦醇高浓度抑制MCF-7细胞增殖,IC50为8.70×10-5mol/L;低浓度（10-7~10-6mol/L）则对细胞有促增殖作用,最高促增殖浓度为1.0×10-7mol/L。DNA ladder和荧光显微镜可观察到高浓度白藜芦醇作用后细胞典型的凋亡形态。免疫组化结果显示低浓度白藜芦醇作用后,细胞核内PCNA表达明显增加（P〈0.05）。结论：高、低浓度的白藜芦醇对MCF-7细胞分别表现为诱导凋亡和促增殖作用,呈现出植物雌激素对MCF-7细胞典型的双向调节作用。     

白藜芦醇对乳腺癌细胞MCF-7 增殖的影响

目的:研究白藜芦醇体外活性,确定它的植物雌激素作用。方法:采用MTT法观察不同浓度白藜芦醇对MCF-7细胞增殖作用的影响。采用DNA ladder法和荧光显微镜观察高浓度白藜芦醇对细胞的影响。免疫组化法观察低浓度白藜芦醇对核增殖抗原PCNA表达的影响。结果:MTT结果显示白藜芦醇高浓度抑制MCF-7细胞增殖,IC50为8.70×10-5mol/L;低浓度(10-7~10-6mol/L)则对细胞有促增殖作用,最高促增殖浓度为1.0×10-7mol/L。DNA ladder和荧光显微镜可观察到高浓度白藜芦醇作用后细胞典型的凋亡形态。免疫组化结果显示低浓度白藜芦醇作用后,细胞核内PCNA表达明显增加(P<0.05)。结论:高、低浓度的白藜芦醇对MCF-7细胞分别表现为诱导凋亡和促增殖作用,呈现出植物雌激素对MCF-7细胞典型的双向调节作用。     

miR-449a对人乳腺癌细胞MCF-7增殖及迁移能力的影响

目的：通过敲低微小RNA （microRNA,miRNA）-449a的方法研究miR-449a对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和迁移能力的影响。方法：采用miRNA芯片在乳腺癌细胞MCF-7和人正常乳腺细胞MCF-10A筛选具有表达差异的miRNA;化学合成法制备miR-449a的抑制剂（inhibitor）,转染后经real-time PCR验证表达的变化;细胞增殖CCK-8实验对转染后细胞增殖能力进行检测;划痕实验检测细胞转移能力,transwell小室实验检测细胞侵袭的改变;蛋白免疫印迹法（Western blot）实验对MCF-7细胞增殖和迁移相关的β-catenin和E-cadherin蛋白进行检测;通过生物信息学软件预测miR-449a潜在靶基因为Notch 1,荧光素酶实验检测Notch 1是miR-449a的靶基因。结果：分别收集MCF-7和MCF-10A细胞,芯片结果显示miR-449a在MCF-7细胞的表达水平显著高于MCF-10A;本研究将细胞分为未处理组（Mock组）,阴性对照组（negative control组,NC组）和处理组,通过收集不同组MCF-7细胞进行试验,CCK-8结果显示miR-449a下调后MCF-7细胞增殖能力显著降低;划痕实验结果显示miR-449a表达降低导致MCF-7细胞转移能力降低;transwell实验结果显示MCF-7细胞侵袭受到抑制;Western blot结果发现miR-449a敲低后β-catenin表达降低,E-cadherin表达增加;荧光素酶试验结果显示,miR-449a能够显著降低Notch 1-3'-UTR质粒的荧光素活性（P<0.01）。结论：在乳腺癌细胞MCF-7中敲低miR-449a能够显著抑制癌细胞增殖和迁移,而这一变化可能通过降低Notch 1蛋白表达实现的。     

bFGF对乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖与凋亡的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外培养人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨bFGF作用机制。方法在饥饿培养的MCF-7细胞中加入bFGF和PD98059处理,以MTT法、吖啶橙染色及流式细胞术观察细胞生长与凋亡情况;并用Western blot检测caspase-3蛋白含量。结果对照组细胞形态发生改变：核质固缩、有凋亡小体形成;细胞凋亡率较高;Western blot分析表明,caspase-3蛋白明显表达。bFGF处理后,细胞变饱满,凋亡现象减少;细胞增殖比明显增加;与对照组相比凋亡细胞比例下降,并诱导细胞进入S期;随着bFGF浓度增加,caspase-3蛋白表达水平降低,在一定范围内呈剂量依赖性。加入PD98059可抑制bFGF的这些作用。结论bFGF可以促进细胞增殖,加速人乳腺癌细胞系MCF-7细胞的细胞周期进程,抵抗无血清饥饿诱导的凋亡,其作用部分可能是通过Ras-Raf-ERK1/2途径介导的。     

软骨多糖诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡的实验研究

研究软骨多糖诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡及其作用机理。方法:选用MCF-7人类乳腺癌细胞系体外培养,应用MTT法检测细胞生长抑制率,TUNEL法检测细胞凋亡率,HE染色法观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞周期的变化,免疫荧光方法检测BCL-2BAD及波形蛋白Vimentin的表达率。结果:软骨多糖对MCF-7细胞体外生长具有明显的抑制作用,且呈时间和浓度依赖性;软骨多糖可诱导MCF-7细胞发生凋亡并伴随有凋亡小体出现等形态学变化;软骨多糖促进BCL-2蛋白的表达水平下降,BAD表达水平上升,及Vimentin的降解。结论:软骨多糖能够在体外诱导MCF-7细胞凋亡,是一种新型的抗乳腺癌活性物质。     

二烯丙基二硫诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及机制的研究

目的:研究二烯丙基二硫(DADS)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其分子机制。方法:AO／EB荧光染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测DADS对caspase-3剪切片断的影响,及对MAPKs通路相关蛋白,包括p-JNK、JNK表达的影响。结果:DADS对乳腺癌细胞株MCF-7生长具有明显的抑制作用,经AO／EB形态变化分析,可见明显的细胞凋亡特征;DADS处理MCF-7细胞6、12、24、48 h,流式细胞仪检测细胞的凋亡率分别为3．74％、9．22％、20.2％、42％,而对照组细胞的凋亡率仅为3．03％(P<0．05);不同浓度的DADS作用于MCF-7细胞24 h后,Western blot法检测发现caspase-3出现断裂片断,并随着浓度的增加断裂更明显。进一步研究发现,DADS处理MCF-7细胞后,JNK磷酸化水平明显升高。结论:DADS能诱导乳腺癌细胞株MCF-7细胞凋亡,JNK信号通路抑制可能是DADS诱导其调亡的分子机制之一。     

FPOA诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用

研究了从红缘拟层孔菌中分离纯化的3-乙酰氧基-8,24-羊毛甾二烯-21酸(FPOA)对人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖的抑制作用及诱导凋亡的作用机理.采用MTT法检测细胞抑制增殖的能力,通过Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,采用蛋白质印迹法分析凋亡相关蛋白的表达情况.结果表明,MCF-7经FPO...     

miR-200c抑制人乳腺癌MCF-7细胞糖代谢

为探讨miR-200c对人乳腺癌MCF-7 (Michigan cancer foundation-7)细胞糖代谢水平的影响,本研究使用miR-200c mimics转染MCF-7细胞,通过定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测各组细胞miR-200c的表达水平;利用细胞计数盒(cell counting kit-8, CCK-8)检测miR-200c mimics转染对MCF-7细胞增殖的影响;通过葡萄糖试剂盒检测各组细胞葡萄糖的消耗,乳酸试剂盒检测各组细胞乳酸的释放量;通过蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组细胞糖代谢相关酶己糖激酶(hexokinase 2, HK2)以及肌肉丙酮酸激酶同工酶2 (pyruvate kinase isozyme type M2, PKM2)蛋白表达水平。与miR-NC组相比,miR-200c mimics转染明显上调MCF-7细胞miR-200c m RNA水平;且miR-NC组和MCF-7组miR-200c mRNA水平没有明显差异;细胞计数盒(cell counting kit-8, CCK-8)检测结果显示,与miR-NC组和MCF-7组相比,miR-200c mimics转染不仅明显降低乳腺癌MCF-7细胞的细胞活力,而且显著减少乳腺癌MCF-7细胞葡萄糖的消耗;此外,Western blotting结果显示,miR-200c显著下调MCF-7细胞糖代谢相关酶HK2和PKM2的表达。综上结果表明,miR-200c会抑制人乳腺癌MCF-7细胞糖代谢。本研究成果为乳腺癌防治提供一定的参考价值。     

RNA干扰NUP88基因对人乳腺癌MCF-7细胞生长及侵袭力的影响

目的： 构建重组慢病毒介导的NUP88-shRNA载体,通过RNAi技术分别观察沉默NUP88后对MCF-7增殖,粘附,侵袭和转移情况的影响,为乳腺癌的临床基因治疗寻找新的靶点。方法： 构建NUP88重组慢病毒表达载体,包装后检测滴度,以最佳复感染指数转染乳腺癌MCF-7细胞,利用RT-PCR和Western blot检测各组MCF-7细胞中mRNA和蛋白的表达效率;MTT法和流式细胞仪检测法,检测NUP88基因被干扰后对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响;细胞侵袭实验检测NUP88基因被干扰后对MCF-7侵袭力的影响。结果 四组病毒及一组阴性对照均构建成功,滴度均为4E+8TU/ml;RT-PCR和Western blot检测,结果表明：经NUP88-shRNA转染的MCF-7细胞组NUP88 mRNA和蛋白质的表达与经阴性转染组和空白MCF-7细胞组相比,差异明显具有统计学意义（P<0.01）;测定NUP88-shRNA1组沉默效率最高,沉默率可达到86%;MTT法结果表明：实验组经NUP88-shRNA1慢病毒转染后细胞增殖程度显著减少,与空白组和对照组相比有显著性差异（P<0.05）。流式细胞仪检测三组MCF-7细胞凋亡结果表明：实验组经慢病毒转染后细胞凋亡率显著增加,与对照组和空白组相比有显著性差异（P<0.05）;细胞侵袭实验表明：在肿瘤细胞常规培养24h后,实验组与空白组和阴性对照组比较,穿膜细胞数量明显减少,具有显著性差异（P<0.05） 结论： NUP88重组慢病毒可以通过RNAi成功抑制MCF-7中NUP88基因的表达,并能显著抑制其增殖及远处的侵袭能力。     

灰树花多糖对乳腺癌细胞MCF-7的凋亡作用

采用MTT法测定不同给药浓度的灰树花多糖(PGF) (1、10、20、50、100和200 μg/mL)在24、48和72 h对乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的抑制率,并采用Hoechst染色与流式细胞技术观察20、50和100 μg/mL PGF给药24 h后MCF-7的凋亡情况,同时采用Western blotting对20、50、100 μg/mL PGF给药24 h后MCF-7细胞中Bax、Bcl-2、Pro-Caspase-3以及Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平进行检测。研究发现PGF给药24、48和72 h后对MCF-7的增殖均有显著的抑制作用。随着PGF给药浓度增加,MCF-7细胞核裂解增多,细胞凋亡数量增多。PGF 20、50和100 μg/mL给药对MCF-7细胞Bax、Bcl-2、Pro-Caspase-3以及Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平可见显著性差异。     

RNA甲基化酶WTAP对乳腺癌MCF-7和耐阿霉素MCF-7/ADR细胞迁移的影响

为了深入探讨乳腺癌治疗耐药的发生机制并寻找乳腺癌治疗耐药的潜在治疗手段,我们以乳腺癌MCF-7和耐阿霉素MCF-7/ADR细胞为研究对象,研究RNA甲基化酶WTAP对其迁移的影响。MTT试验发现阿霉素对MCF-7细胞活力的抑制作用大于对MCF-7/ADR细胞的抑制作用。qPCR和western-blot试验发现WTAP在耐阿霉素细胞MCF-7/ADR中高表达,同时transwell试验发现在MCF-7细胞中增加WTAP的表达对MCF-7细胞的迁移没有影响,而在MCF-7/ADR细胞中敲低WTAP的表达会抑制MCF-7/ADR细胞的迁移。western-blot试验进一步证明了这一作用是通过抑制上皮间质转化(EMT)来发挥的。这一发现有助于为乳腺癌的临床治疗提供新的理论依据并为乳腺癌的治疗提供新的策略。     

Exploring the Potential Mechanism of Costunolide-Induced MCF-7 Cells Apoptosis by Multi-Spectroscopy,Molecular Docking and Cell Experiments

Breast cancer is one of the most common cancer with high morbidity and mortality in women. This study aimed to explore the potential mechanism of costunolide inducing MCF-7 cells apoptosis by multi-spectroscopy, molecular docking, and cell experiments. The results manifested that costunolide interacted with calf thymus DNA (ct-DNA) in a spontaneous manner, and the minor groove as the preferential binding mode. Furthermore, costunolide inhibited cell proliferation and colony formation. Hoechst 33258 staining showed that cell apoptosis induced by costunolide might be related to DNA damage. The apoptosis mechanism relied on regulating the protein expression of Bax, Bcl-2, p53, Caspase-3 and the activation of p38MAPK and nuclear factor κB (NF-κB) pathways. This study will provide some experimental basis and potential therapeutic strategy for breast cancer treatment.     

Toxicity Evaluation of Geniposide on MCF-7 Cancer Cells

As one of the adjuvant treatments for cancer treatment, traditional Chinese medicine treatment has a wide range of cancer treatments, such as preventingmetastasis and relapse, improving the efficacy of radiotherapy and chemotherapy,reducing the side effects of chemotherapy, improving body function, extendinglife and improving the life quality. Geniposide (GEN) is a bioactive substanceextracted from the fruit of gardenia. In recent years, it has attracted attentiondue to its anti-tumor effect. In this study, we aimed to investigate whetherGEN could inhibit the proliferation of human breast cancer cells (MCF-7) andpromote its apoptosis. The half-inhibitory concentration (IC50) values of GENwere firstly determined as 16.06, 14.85 and 13.14 mg/mL by the CCK-8 experiment after cells treated for 24 h, 48 h, and 72 h, respectively. The inhibitory effectof GEN on MCF-7 cells was in concentration- and time-dependent manners fromthe results of CCK-8 experiment and Live/Dead staining. AO/EB staining resulthas shown that GEN has induced MCF-7 cell apoptosis.     

三棱黄酮体外诱导A549及MCF-7细胞S/G2周期停滞的研究

为了研究三棱黄酮(Rhizoma Sparganii flavonoids,RSF)对雌激素受体阳性(estrogen receptor positive,ER+)恶性肿瘤细胞株A549与MCF-7的细胞毒作用和机制,本次试验制备含188、375、750μg/mL RSF的DMEM培养基(RSFD-188、RSFD-375、RSFD-750),与贴壁后的A549及MCF-7细胞共培养3 d,含1%甲醇的DMEM培养基为对照,使用MTT法、免疫荧光技术、流式细胞术比较组间细胞的增殖活性、形态(anti-a-tublin)、凋亡率以及细胞周期的差异。试验结果显示,RSF可呈剂量性抑制A549与MCF-7细胞的增殖活性、增加凋亡小体比率、诱导细胞骨架形态异常改变;与RSFD-375、RSFD-750共培养的A549与MCF-7细胞表现为明显的S/G2细胞周期停滞。所得实验结果表明,RSF对A549及MCF-7细胞具有明确的细胞毒理作用,其抑制细胞增殖活性的机制与诱导细胞的S/G2细胞周期停滞相关。     

KDR靶向RNA干扰对MCF一7细胞凋亡的影响

目的：研究KDR靶向RNA干扰对MCF-7细胞凋亡的影响,探讨其可能的机制。方法：采用阳离子脂质体Lipofecta．mine2000TM作为转染试剂将人KDR基因的siRNA转染人类乳腺细胞株MCF-7,诱RNAi,采用Hoechst33258染色和半定量RT—PCR检测Caspase-3、survivin的mRNA表达及细胞凋亡变化;比色法检测Caspase．3的活性;利用免疫组织化学方法检测survivin的表达,并用图像分析仪分析蛋白表达强度。结果：靶向KDR的siRNA转染MCF-7后,Caspase-3的mRNA表达上调,survivin基因mRNA及蛋白表达水平下调（P〈0．05）。结论：KDRsiRNA通过减少乳腺癌细胞survivin的表达,增加Caspase．3表达来促进肿瘤细胞凋亡,发挥其抗肿瘤作用。     

巨噬细胞集落刺激因子经PI3K/AKT信号途径影响人乳腺癌MCF-7细胞糖代谢

本文探讨巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）对人乳腺癌MCF-7细胞糖代谢的影响及其机制. 构建胞质稳定转染 M-CSF的MCF-7细胞（MCF-7-M）;ATP检测试剂盒检测MCF-7和MCF-7-M细胞的ATP生成;葡萄糖测定试剂盒、乳酸测试盒检测MCF-7和MCF-7-M细胞的葡萄糖摄取和乳酸分泌情况;蛋白质印迹法检测在糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖（2-DG）和氧化磷酸化抑制剂OLIG处理后,M-CSF对MCF-7细胞的糖酵解关键酶：己糖激酶2（HK2）、丙酮酸激酶M2（PKM2）及葡萄糖转运体1（GLUT-1）表达的影响;MTT法检测在ATP消耗剂3-溴丙酮酸（3-BrPA）处理后,MCF-7和MCF-7-M细胞对5-FU敏感性的变化. 结果发现：MCF-7-M细胞的ATP水平显著高于MCF-7细胞（P<0.05）;2-DG降低了MCF-7和MCF-7-M细胞的ATP水平,并且降低MCF-7-M细胞ATP的效果更明显（P<0.01）;MCF-7-M细胞的糖摄取能力和乳酸分泌量显著高于MCF-7细胞（P<0.01）,经API-2处理后,MCF-7和MCF-7-M细胞葡萄糖消耗和乳酸分泌量均显著减少（P<0.01）;MCF-7-M细胞GLUT-1、HK2和PKM2的表达显著高于MCF-7细胞（P<0.01）;LY294002和API-2均可抑制MCF-7-M细胞GLUT-1的表达（P<0.05）;用3-BrPA处理后,MCF-7-M和MCF-7细胞对5-FU的药物敏感性显著增强（P<0.01). 综上,得出结论： 胞质M-CSF通过诱导GLUT-1、HK2和PKM2的表达,活化MCF-7细胞糖酵解途径;PI3K/AKT信号通路参与胞质M-CSF活化MCF-7细胞的糖酵解途径.     

MDM2反义寡核苷酸联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞株的作用

目的:探讨靶向MDM2反义寡核苷酸(ASON)联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞株的影响。方法:合成一段与MDM2 mRNA特异性结合的反义寡核苷酸和与反义寡核苷酸有4个碱基不同的的错义寡核苷酸(MON),脂质体2000介导不同浓度的MDM2ASON转染MCF-7乳腺癌细胞系,转染的乳腺癌细胞通过1μmol/L紫杉醇药物处理后,采用RT-PCR和Western Blot方法检测MDM2 ASON联合紫杉醇的协同作用及对乳腺癌MCF-7细胞株的抑制效率,MTT观察给药后MCF-7细胞的增殖能力和药物敏感性。结果:MDM2反义寡核苷酸联合紫杉醇明显下调MDM2 mRNA及MDM2蛋白表达水平,抑制MCF-7细胞的生长,随着MDM2 ASON浓度的增加,MDM2表达越来越低,协同作用越来越强,呈剂量依赖关系,A500联合紫杉醇的协同作用最明显,MTT显示紫杉醇处理的转染MCF-7细胞增殖抑制率明显增高,A500抑制增殖作用最明显,抑制率达(13.0±0.84)%。结论:不同浓度MDM2 ASON转染后的乳腺癌MCF-7细胞,等浓度紫杉醇处理后,乳腺癌MCF-7细胞MDM2表达明显降低,细胞凋亡增加,,MDM2 ASON联合紫杉醇对MCF-7细胞有协同作用,提高了乳腺癌MCF-7细胞对紫杉醇的药物敏感性。     

Oligonucleosomal DNA Fragmentation in MCF-7 Cells Undergoing Palmitate-Induced Apoptosis

Oligonucleosomal fragmentation of nuclear DNA is the late-stage apoptosis hallmark. In apoptotic mammalian cells the fragmentation is catalyzed by DFF40/CAD DNase primarily activated by caspase 3 through the site-specific proteolytic cleavage of DFF45/ICAD. A deletion in the casp3 gene of human breast adenocarcinoma MCF-7 results in lack of procaspase 3 in these cells. The absence of caspase 3 in MCF-7 leads to disability to activate oligonucleosomal DNA fragmentation in TNF-alpha induced cell death. In this study, sodium palmitate was used as an apoptotic stimulus for MCF-7. It has been shown that palmitate but not TNF-alpha induces both apoptotic changes in nuclei and oligonucleosomal DNA fragmentation in casp3-mutated MCF-7. Activation and accumulation of 40-50 kD DFF40-like DNases in nuclei of palmitate-treated apoptotic MCF-7 were detected by SDS-DNA-PAGE assay. Microsomal fraction of apoptotic MCF-7 does not contain any detectable DNases, but activates 40-50 kD nucleases when incubated with human placental chromatin. Furthermore, microsomes of apoptotic MCF-7 induce oligonucleosomal fragmentation of chromatin in a cell-free system. Both the activation of DNases and chromatin fragmentation are suppressed in the presence of the caspase 3/7 inhibitor Ac-DEVD-CHO. Microsome-associated caspase 7 is suggested to play an essential role in the induction of oligonucleosomal DNA fragmentation in casp3-deficient MCF-7 cells.