糖尿病大鼠心肌功能的改变及其机制*

目的:观察钙敏感受体(CaSR)表达变化在2型糖尿病大鼠心功能降低中的作用。方法:Wistar大鼠随机分成3组:对照组、糖尿病4周和8周组。糖尿病组大鼠给予高糖高脂饮食喂养,4周后腹腔注射链脲佐菌素建立2型糖尿病模型。通过HE染色观察心脏形态学变化,通过超声心动仪检测心脏功能的变化,通过Western blot检测心肌组织CaSR和PKC-α蛋白表达的变化。结果:与对照组相比,糖尿病大鼠心脏收缩和舒张功能降低,心肌组织出现不规则收缩带,且随着病程延长逐渐加重,同时心肌组织CaSR和PKC-α蛋白表达减少。结论:糖尿病大鼠心肌CaSR等蛋白的表达降低,从而引起细胞内钙紊乱,导致心功能下降。     

动脉粥样硬化大鼠心肌梗死时钙敏感受体表达的变化及其作用机制

目的:探讨动脉粥样硬化大鼠心肌梗死时钙敏感受体表达的变化及其作用机制。方法:Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组(Control);异丙肾上腺组(ISO);动脉硬化组(AS);动脉硬化+异丙肾上腺素组(AS/ISO)。采用腹腔注射VD3和高脂饮食及大剂量异丙肾上腺素(ISO 200 mg/kg)皮下注射复制大鼠在体动脉粥样硬化心肌梗死模型,应用RT-PCR测定心肌组织中Ca SR、Bax、Bcl-2和caspase-3 m RNA的表达变化;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;光镜观察心肌形态学变化;紫外分光法检测血清肌酸激酶(CK)、电化学免疫发光法检测肌钙蛋白T(c Tn T)水平。结果:与正常组比较,ISO组CK活性、c Tn T水平以及Ca SR、Bax和caspase-3的表达均增加,同时Bcl-2表达减少,心肌细胞损伤严重,AS/ISO的心肌损伤进一步加重。结论:Ca SR的表达增多参与了动脉硬化大鼠心肌梗死的发生,其机制可能与促进心肌细胞凋亡有关。     

黄酒多酚对糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:探究黄酒多酚对糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为空白对照组(Control组)、糖尿病心肌病组(DCM组)、糖尿病心肌病+黄酒多酚组(DCM+YWP组)(n=10)。采用单次腹腔注射65 mg/kg链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病心肌病大鼠模型,对照组采用相同剂量的枸橼酸缓冲液进行单次腹腔注射,DCM+YWP组建模后用18 mg/kg黄酒多酚灌胃。12周后观察大鼠一般情况,用多普勒心超评价心脏结构和功能,用电镜观察心肌组织超微结构,用ELISA法检测心肌组织炎症指标,用氧化应激指标检测试剂盒检测心肌组织氧化应激水平,用Westen blot检测心肌组织凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3(cleaved)的表达水平。结果:与DCM组相比,DCM+YWP组大鼠血糖水平及体重未出现明显变化;心脏超声显示左室舒张末期直径,左室收缩末期直径降低(P0.05),而左室缩短率、左心室射血分数、E/A比值以及Ea/Aa比值均升高(P0.05);心肌组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)以及白介素6(IL-6)水平下降(P0.05);心肌组织氧化应激指标丙二醛(MDA)水平下降、超氧化物歧化酶(SOD)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平上升(P0.05);心肌组织Bax、Caspase-3(cleaved)蛋白的表达水平降低(P0.05),Bcl-2蛋白的表达水平升高(P0.05)。结论:黄酒多酚能改善糖尿病心肌病大鼠的心脏功能,降低心肌组织炎症因子和氧化应激水平,抑制糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡。     

2型糖尿病大鼠心肌损伤时心肌组织中硫氧还蛋白系统的变化

本研究旨在观察2型糖尿病大鼠心肌损伤时硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)系统在心肌组织中的活性变化,并探讨其机制。成年Sprague Dawley大鼠随机分为2组:糖尿病组给予高糖、高脂饮食,并且腹腔注射链唑霉素(streptozocin,STZ)造成大鼠2型糖尿病模型;对照组普通饲料喂养,腹腔注射柠檬酸缓冲液。在注射STZ后不同时间点,测定大鼠血糖浓度和血清胰岛素、肌酸激酶同工酶(creatine kinase MB,CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)浓度,测定心肌Trx活性、Trx还原酶(thioredoxin reductase,TR)活性和caspase-3活性,用real time PCR和Western blot测定心肌Trx1、Trx2、TR1、TR2和Trx相关蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)的mRNA和蛋白表达。结果显示,注射STZ后第1周,2型糖尿病大鼠模型建立成功;注射STZ后第2周即可诱发心肌损伤,第4周上调caspase-3活性。糖尿病组大鼠心肌Trx和TR活性在注射STZ后第2周显著降低,并随病程呈进行性下降;糖尿病组大鼠心肌Trx1、Trx2、TR1、TR2的mRNA水平均在注射STZ后第4周显著下降,而在第12周时则明显升高;Western blot结果显示糖尿病组大鼠心肌Trx、TR、TXNIP蛋白表达在注射STZ后第12周时均显著升高。以上结果表明,2型糖尿病大鼠心肌损伤时Trx和TR活性受抑,而Trx、TR的mRNA表达受到抑制后,代偿性增多,TXNIP的表达明显上调,Trx系统蛋白表达均明显上调,提示Trx系统活性下降的主要原因可能是抑制性蛋白表达升高和化学修饰。     

硫化氢对大鼠糖尿病心肌病氧化应激及内质网应激的影响

目的:观察外源性给予硫化氢(H2S)供体硫氢化钠(Na HS)对大鼠糖尿病心肌病氧化应激作用以及内质网应激相关因子表达的影响。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组和治疗组(n=10)。采用腹腔注射链脲佐菌素的方法制备大鼠糖尿病模型,治疗组采用腹腔注射给予Na HS干预治疗。12周后,利用离体心脏灌流装置测定心室动力学指标;透射电镜观察心肌细胞超微结构变化;测定心肌组织脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;RT-PCR检测C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和半胱天冬蛋白酶12(Caspase 12)基因表达。结果:与对照组比较,糖尿病组心功能明显降低、心肌超微结构损伤明显,心肌组织MDA含量增加、SOD和GSH-Px的活性明显降低,CHOP、GRP78和Caspase 12 mRNA表达明显增加。与糖尿病组比较,治疗组心功能和心肌超微结构损伤明显改善,心肌组织MDA含量下降,SOD和GSH-Px的活性明显升高,CHOP、GRP78和Caspase 12 mRNA表达明显下降。结论:外源性补充H2S对糖尿病大鼠心肌病具有保护作用,机制可能与减轻氧化应激损伤和抑制内质网应激引发的凋亡作用有关。     

他莫昔芬对糖尿病大鼠心肌CD147糖基化与MMPs的影响

目的:阐明糖尿病性心肌病的形成机制。方法:将40只大鼠分为对照组和对照+他莫昔芬组(n=8)、糖尿病组与糖尿病+他莫昔芬组(n=12)。采用链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型,观测心肌CD147表达与糖基化程度的变化,以及对基质金属蛋白酶(MMPs)表达与活性的影响,同时观测他莫昔芬(tamoxifen)的作用。结果:在成功建立糖尿病大鼠模型基础上,观测到分布于心肌细胞膜的CD147,在糖尿病大鼠心肌表达与糖基化程度明显增高。糖尿病大鼠心肌MMP-2蛋白表达增加,MMP-2与MMP-9活性均明显增加。他莫昔芬对糖尿病大鼠心肌CD147的表达与糖基化均有抑制作用,且对糖基化的抑制明显强于对表达的作用。心肌CD147糖基化程度与MMPs的活性呈正相关。他莫昔芬对对照组与糖尿病大鼠心肌MMP-2与MMP-9的活性均具有抑制作用。结论:糖尿病大鼠心肌CD147表达特别是糖基化程度增加,导致MMPs活性增加,加速心肌病理性重塑而诱发心肌病。而他莫昔芬通过抑制心肌CD147糖基化的增加,进而抑制MMPs活性,减缓心肌的病理性重塑,对糖尿病心肌产生保护作用。     

钙蛋白酶介导模拟失重大鼠心肌肌钙蛋白抑制亚基的降解

本文旨在观察尾部悬吊模拟失重大鼠心肌钙蛋白酶(calpain)与钙蛋白酶抑素(calpastatin)表达的变化,以探讨心肌肌钙蛋白抑制亚基(cardiac troponin I,cTnI)降解的可能机制。采用尾部悬吊模拟失重大鼠模型,Western blotting技术观测心肌calpain-1、calpain-2与calpastatin的表达;PD150606抑制calpain活性,分析cTnI降解程度的变化。结果显示:与同步对照组相比,悬吊2周与4周组大鼠心肌calpastatin表达呈显著性降低(P0.05),calpain-1表达未改变,calpain-2表达略有降低;但是,心肌calpain-1/calpastatin及calpain-2/calpastatin的比值在悬吊2周与4周组明显增高(P0.05,P0.01)。悬吊4周组cTnI降解显著高于对照组(P0.01);然而,用calpain非特异性抑制剂PD150606处理后,对照组及悬吊组cTnI的降解均被显著抑制(P0.01)。这些结果提示模拟失重大鼠心肌calpain活性增高可能增加cTnI的降解。     

血糖波动对2 型糖尿病大鼠心肌组织形态的影响及机制研究

目的:观察血糖波动对2型糖尿病大鼠心肌组织形态的影响并探讨其可能机制。方法:选取45只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,按随机数字法分成正常对照组(CON组)和糖尿病组(DM组)。DM组给予4周高糖高脂饲料喂养后,予小剂量链脲佐菌素35 mg/Kg腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。将成模大鼠按随机数字法分成糖尿病对照组(CDM组)和波动血糖组(FDM组)。FDM组大鼠每天定时皮下注射短效胰岛素并错时给予葡萄糖,建立糖尿病血糖波动模型,CON组、CDM组予等量生理盐水皮下注射。每周测血糖值2天,4次/天,动态观测各组大鼠外形、进食量、饮水量等变化。造模成功12周后取腹主动脉血测定糖化血红蛋白(Hb Alc),取大鼠心脏组织行Masson染色观察心肌纤维化水平,免疫印记法分别检测心肌组织AKT、p-AKT蛋白的表达,免疫组织化学法分析各组大鼠心肌细胞中Caspase-3蛋白的表达。结果:(1)与CON组相比,FDM组、CDM组大鼠Hb A1c、血糖变异系数(CV)水平升高,差异具有统计学意义(P0.05);与CDM组相比,FDM组Hb A1c水平差异无统计学意义(P0.05),CV值进一步升高,差异具有统计学意义(P0.05)。(2)与CON组相比,CDM组、FDM组大鼠心肌组织形心肌纤维化水平升高,差异具有统计学意义(P0.05);与CDM组相比,FDM组心肌组织心肌纤维化水平进一步升高,差异具有统计学意义(P0.05)。(3)与CON组相比,FDM组、CDM组大鼠心肌p-AKT蛋白表达水平均减少,差异具有统计学意义(P0.05);与CDM组相比,FDM组p-AKT蛋白表达水平均进一步减少,差异具有统计学意义(P0.05)。而三组大鼠心肌组织AKT蛋白表达水平差异无统计学意义(P0.05)。(4)与CON组相比,FDM组、CDM组大鼠心肌Caspase-3蛋白表达水平均升高,差异具有统计学意义(P0.05);与CDM组相比,FDM组Caspase-3蛋白表达水平进一步升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:血糖波动可加重2型糖尿病大鼠的心肌纤维化,其机制可能与抑制AKT活化有关。     

外源性精胺抑制高尔基体应激减轻高糖诱导的心肌损伤*

目的:观察糖尿病心肌病(DCM)是否有高尔基体应激(GAS)参与及外源性精胺心肌保护作用是否与调控GAS有关。方法:60只Wistar大鼠随机分为正常对照组(Control),糖尿病组(T1D,STZ 60 mg/kg一次性腹腔注射)和精胺组(T1D+Sp,精胺5 mg/(kg·d)腹腔注射),饲养12周。H9C2系大鼠心肌细胞随机分为正常对照组(Control,10%的FBS-DMEM培养)、高糖组(HG,10% FBS-DMEM+40 mmol/L葡萄糖)和精胺组(HG +Sp,10% FBS-DMEM+40 mmol/L葡萄糖+5 μmol/L精胺)。ELISA检测大鼠血清心肌肌酸激酶同工酶 (CK-MB)、心肌肌钙蛋白T (cTnT);Western blot测定高尔基体蛋白GOLPH3,GM130以及Cleaved Caspase3蛋白表达;免疫荧光检测GOLPH3细胞定位。结果:动物模型中,与正常组相比,糖尿病组大鼠血糖,血清心肌酶CK-MB和cTnT显著升高明显升高;体重,射血分数(EF)显著降低;心肌超微结构损伤明显(肌丝断裂,润盘消失等);同时GOLPH3和Cleaved Caspase3表达上调,GM130表达下调。细胞模型与大体结果一致,免疫荧光显示高尔基体出现应激性碎片化。外源性精胺处理可显著干预上述改变。结论:给予外源性精胺对糖尿病,诱导的心肌损伤具有干预作用,其机制与减轻高尔基体应激有关。     

黄芪注射液对缺血性心肌病大鼠心肌自噬及心肌重塑的影响*

目的: 研究黄芪注射液对缺血性心肌病大鼠心肌重塑、网腔钙结合蛋白(calumenin)及自噬影响。方法: 36只雄性SD大鼠分为正常对照组(n=12)、缺血性心肌病组(n=12)、黄芪注射液组(n=12),3组大鼠术前行心电图及心脏彩超检查后,正常对照组不做任何处理,而缺血性心肌病组和黄芪注射液组大鼠开胸结扎冠状动脉20 min后,解开结扎线行再灌注后关闭胸腔建立心肌缺血模型,黄芪注射液组术后每次注射黄芪注射液10 g/kg体重,每周注射1次,共注射4次。3组大鼠术后4周行心脏彩超检查后处死大鼠取心脏行HE染色、VG染色,观察心肌病理改变,用Western blot技术检测各组大鼠心肌细胞calumenin、LC3-I、LC3-II表达变化及LC3-I /LC3-II比值变化。结果: 与缺血性心肌病组比较,黄芪注射液组大鼠心脏彩超及心肌病理得到明显改善;同时,calumenin表达增加LC3-I /LC3-II比值表达降低(P＜0.01)。结论: 黄芪注射液对缺血性心肌病大鼠心室重塑及心肌细胞自噬有明显抑制作用,该作用可能是通过calumenin所介导的。     

糖尿病大鼠心肌纤维化与心肌AGEs/RAGE水平的变化

目的通过构建Ⅱ型糖尿病大鼠模型,研究该模型心肌纤维化和心肌AGEs/RAGE水平的变化情况。方法雄性SD大鼠高脂饲料饲喂6周后,过夜空腹12 h,腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ,30 mg/kg)。注射3、7 d后检测大鼠随机血糖浓度,两次随机血糖≥16.7 mmol/L为Ⅱ型糖尿病大鼠建模成功。在建模成功后第4、8和12周,检测大鼠血FBG、insulin和左心室AGEs、Hyp含量及Masson染色、RAGE表达的变化。结果造模成功后第4、8和12周,糖尿病对照组(4D,8D,12D)血FBG水平均较同周次正常对照组(4C,8C,12C)显著升高,体重显著下降;造模成功后第12周时,糖尿病对照组(12D)大鼠Insulin显著高于同周次正常对照组(12C)和4周时糖尿病对照组(4D);从造模成功后第8周开始,糖尿病对照组(8D,12D)心肌Hyp、CVF、AGEs和RAGE与正常对照组(8C,12C)相比均显著升高;2型糖尿病大鼠心肌AGEs/RAGE水平与CVF呈显著正相关。结论高脂饮食饲喂加腹腔注射小剂量STZ,能够成功复制Ⅱ型糖尿病大鼠模型。随着病程的延长,心肌纤维化和心肌AGEs含量、RAGE蛋白表达均呈逐渐上升趋势,且Ⅱ型糖尿病大鼠心肌AGEs/RAGE水平与心肌纤维化存在有正相关关系。     

心力衰竭大鼠心肌SERCA2a和miR-25-3p/5p表达的改变及泻肺利水方药的干预作用

目的：观察心力衰竭大鼠肌浆网钙ATP酶（SERCA2a） mRNA和miR-25-3p/5p表达水平的变化及中药泻肺利水方药的干预作用。方法：SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、卡托普利组和地高辛组（n=10）,阿霉素腹腔注射（总剂量15 ml/kg,2周内分6次注射）建立心力衰竭大鼠模型,5周后分别以蒸馏水（10 ml/（kg·d））、泻肺利水中药（22 g/（kg·d））、卡托普利（19 mg/（kg·d））和地高辛（32μg/（kg·d））连续灌胃35 d,观察大鼠心肌SERCA2amRNA、miR-25-3p/5p的表达水平和SERCA2a活性、血浆脑钠肽水平、心输出量和射血分数。结果：模型组大鼠心输出量和射血分数显著降低,心肌SERCA2a mRNA表达水平和活性降低,miR-25-3p和miR-25-5p的表达水平、血浆脑钠肽水平显著升高;泻肺利水中药能提高心肌SERCA2a mRNA表达水平和活性,降低miR-25-3p和miR-25-5p的表达水平,降低血浆脑钠肽水平,提高心输出量和射血分数;卡托普利能提高心肌SERCA2a mRNA表达水平,降低miR-25-3p和miR-25-5p的表达水平,降低血浆脑钠肽水平,提高心输出量;地高辛能提高心肌SERCA2a mRNA表达水平,降低血清脑钠肽水平,提高心输出量。结论：心力衰竭大鼠心肌SERCA2a mRNA的表达下调,miR-25-3p和miR-25-5p的表达上调;泻肺利水方药可以上调SERCA2a mRNA的表达,下调心肌miR-25-3p和miR-25-5p的表达,改善心功能。     

凝血酶1和转化生长因子β在糖尿病大鼠心肌细胞高表达的研究(简报)

糖尿病心肌病是极度危险的糖尿病并发症之一.它的发病机制目前尚未明确.本研究采用30只Sprague-Dawley大鼠随机分为2组:糖尿病大鼠组(15只),尾静脉注射链脲佐茵素造模,正常组大鼠(15只),尾静脉注射生理盐水,成模4周后采用苏木精-伊红染色及透射电子显微镜观察两组大鼠心肌细胞纤维显微结构和超微结构的病理改变,同时免疫组织化学SABC法对糖尿病大鼠与正常大鼠心肌细胞中凝血酶1(TSP-1)和转化生长因子β(TGF-β)的表达进行观察.糖尿病大鼠成模前,两组动物的体重、血糖和尿糖检测结果间无显著差异(P>0.05).成模四周后,糖尿病大鼠与正常大鼠体重、血糖和尿糖检测结果有显著性差异(P<0.01).光镜和电子显微镜观察显示糖尿病大鼠心肌组织结构有明显改变.糖尿病大鼠心肌细胞内TSP-1和TGF-β的表达显著增强(P<0.01).本研究结果表明TSP-1和TGF-β在糖尿痛大鼠的表达增加可能是糖尿病心肌病发病的一个重要因素.     

精胺对高糖引起的大鼠心肌纤维化的影响及其机制

目的: 观察精胺对糖尿病心肌病(DCM)及高糖处理的心肌成纤维细胞(CFs)的保护作用并探讨其机制。方法: ①动物实验:24 只雄性Wistar大鼠随机分为正常组(Control),糖尿病组(T1D)和精胺组(T1D+Sp),每组8只。采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg)复制 1 型糖尿病大鼠模型,精胺组在 STZ 注射前两周每天腹腔注射精胺(Sp,5 mg/(kg·d)),随后隔天注射,饲养至 12 周。检测各组大鼠血糖、胰岛素水平、射血分数(EF)和缩短分数(FS),并对大鼠心脏组织进行 Masson 染色和 Sirius red 染色。②细胞实验:出生1～3 d的大鼠心脏提取原代 CFs,随机分为正常组(Control),高糖组(HG)和精胺组(HG+Sp,每组 n=6)。高糖(HG,40 mmol/L)处理 CFs 复制细胞模型,精胺组在高糖处理前给予Sp(5 μmol/L)预处理30 min。CCK8检测细胞活性,ELISA法检测培养基中胶原含量,Western blot 测定细胞周期相关蛋白(PCNA、CyclinD1 及 P27)的表达。结果: 与 Control 组相比,T1D 大鼠血糖显著上升,胰岛素水平和心脏功能降低;染色结果显示心肌胶原含量增加。同时,HG 组细胞活力与培养基中胶原含量明显增加,PCNA、CyclinD1 表达上调,而 P27 表达下调。精胺能减轻上述变化,表现为改善心脏功能,调节细胞周期蛋白表达和减轻心肌纤维化水平。结论: 精胺可减轻糖尿病心肌病心肌纤维化的发生,其机制可能与调节细胞周期有关。     

肌浆网钙ATP酶过表达对心房颤动兔心房及L型钙通道a1c蛋白表达的影响

目的探讨心肌肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)基因过表达,对兔急性心房颤动(AF)的心房肌L型电压依赖钙通道蛋白alc亚单位(LVDCCalc)表达的影响。方法 48只成年新西兰兔,随机分成为房颤组(AF组,n=12)、9-型腺相关病毒+增强型绿色荧光蛋白组+房颤组(rAAV9+EGFP+AF组,n=12)、9-型腺相关病毒+肌浆网钙ATP酶2a+增强型绿色荧光蛋白组+房颤组(rAAV9+SERCA2a+EGFP+AF组,n=12),并设假手术组作为对照(Control组,n=12)。rAAV9+EGFP+AF组和rAAV9+SERCA2a+EGFP+AF组起搏前30 d开胸心包腔内注射包含报告基因的rAAV9-EGFP和包含靶基因的rAAV9-SERCA2a-EGFP各500μL(1×1012v.g/μL)。转染30 d后,AF组、rAAV9+EGFP+AF组和rAAV9+SERCA2a+EGFP+AF组,以600 BPM刺激频率,持续起搏兔右心房24h制作AF模型。处死各组动物,倒置荧光显微镜下观察右心房肌组织EGFP表达情况,行HE染色对右心房组织形态检查,应用免疫组化技述检测SERCA2a蛋白及LVDCCalc蛋白在心房肌中的表达情况。结果 rAAV9+EGFP+SERCA2a+AF组SERCA2a蛋白及LVDCCalc蛋白表达量显著高于AF组和rAAV9+EGFP+AF组(P<0.05),但与对照组比较差异无显著性。结论心房肌转SERCA2a基因,显著减少了急性房颤心房肌的LVDCCa1c蛋白表达的降低,有逆转急性AF电重构的作用。     

缺血性心肌病大鼠心肌细胞自噬在心肌重塑中的作用*

目的:研究缺血性心肌病大鼠心肌细胞自噬在心肌重塑中的作用。方法:36 只雄性SD大鼠分为正常对照组、假手术组、缺血性心肌病组( n=12),3组大鼠术前行心脏彩超检查,正常对照组大鼠不进行处理;假手术组大鼠开胸后不结扎冠状动脉,关闭胸腔;缺血性心肌病组大鼠开胸结扎冠状动脉20 min后,解开结扎线行再灌注后关闭胸腔,3组大鼠术后4周行心脏彩超检查后处死大鼠取心脏行HE染色、masson染色,观察心肌病理改变,用Western blot技术检测各组大鼠心肌细胞GRP78、LC3-I、LC3-II、Beclin-I表达及LC3-II/LC3-I比值的变化。结果:与正常组及假手术组比较,缺血性心肌病大鼠心室扩大,EF值降低;心肌排列紊乱,心肌纤维化增加;线粒体空泡化严重;内质网应激关键蛋白GRP78上调;自噬相关蛋白LC3-I、LC3-II、Beclin-I及LC3-II/LC3-I比值增加。结论:缺血性心肌病大鼠心肌细胞中内质网应激和自噬可能在心肌重塑中具有重要作用。     

BML-111 对糖尿病大鼠心肌炎症反应及细胞凋亡的影响

目的:探讨BML-111治疗对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及炎症反应的影响。方法:33只雄性Wistar大鼠随机分为对照(Control)组、糖尿病(DM)组和BML-111组,每组各11只。Control组喂以普通饲料,而其它两组大鼠喂以高糖高脂饲料。饲养6周后,DM组及BML-111组大鼠分别腹腔注射链尿佐菌素30 mg/kg,并于1周后建立糖尿病模型。模型制备完成后12周,BML-111组大鼠每日腹腔注射BML-111 0.5 mg/kg,其它两组大鼠腹腔注射相同容量生理盐水。12周后,测定体重、甘油三酯(TC)、总胆固醇(TG)水平、空腹血糖,采用TUNEL法测定心肌细胞凋亡指数(AI),Western blot法测定IL-6、TNF-α蛋白表达水平,并使用试剂盒测定心肌SOD活性和MDA含量。结果:与Control组比较,DM组大鼠体重显著下降,TC、TG、空腹血糖水平明显升高(P0.05);与DM组比较,BML-111组大鼠体重增加,甘油三酯、总胆固醇、空腹血糖水平下降(P0.05)。与Control组比较,DM组大鼠心肌凋亡指数显著增加(P0.05);而与DM组比较,BML-111组大鼠心肌凋亡指数显著降低(P0.05)。与Control组比较,DM组大鼠心肌IL-6、TNF-α、p-NF-κB、p-p38MAPK蛋白表达水平及MDA含量明显增高(P0.05),而SOD活性降低(P0.05);与DM组比较,BML-111组大鼠心肌IL-6、TNF-α、p-NF-κB、p-p38MAPK蛋白表达水平及MDA含量较低(P0.05),而SOD活性增加(P0.05)。结论:BML-111可减轻糖尿病大鼠心肌炎症反应及细胞凋亡。     

ADAMTS-1在酒精性心肌病大鼠心室重构中的作用研究

目的:观察含凝血酶敏感蛋白序列的解整合素-金属蛋白酶-1(ADAMTS-1)在酒精性心肌病(ACM)大鼠心室肌中的表达变化及其与心室重构的关系。方法:将50只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=20)和ACM组(n=30)。ACM组大鼠第1周每天给予10%酒精随意饮用,60%酒精灌胃1次(5 mL/kg);第2周每天给予10%酒精随意饮用,60%酒精灌胃2次(10 mL/kg);第3周~16周每天给予20%酒精随意饮用,60%酒精灌胃2次(15 mL/kg),第17周~6个月每天给予30%酒精随意饮用,60%酒精灌胃2次(15 mL/kg)。对照组大鼠采用普通水随意饮用,以同样方式给予普通水灌胃。实验开始前及6个月时超声心动图检测左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期直径(LVEDD)和短轴缩短率(FS)。6个月后处死动物,光镜下观察心肌病理组织学改变;Masson染色检测心肌胶原分布及胶原容积分数(CVF);TUNEL法检测心肌细胞凋亡。免疫组化法测定心室肌中ADAMTS-1及其底物多配体蛋白聚糖-4(Syndecan-4)的蛋白含量。结果:与对照组相比,ACM组大鼠LVEF(P0.01)及FS(P0.05)明显降低,而LVEDD显著增加(P0.05);心肌细胞肥大,排列紊乱,部分心肌细胞脂肪变性;心肌纤维断裂、溶解;心肌间质血管扩张充血,胞外间隙明显增宽,纤维组织增生,炎性细胞浸润;CVF及凋亡指数显著增加(P0.01);ADAMTS-1及Syndecan-4蛋白表达显著上调(P0.05)。结论:ADAMTS-1在ACM心肌中表达明显增多,可能通过水解释放Syndecan-4,促进ECM重塑、心肌纤维化及细胞凋亡,参与ACM心室重构过程。     

CCL4在病毒性心肌炎中的作用及其机制研究

目的:观察巨噬细胞炎性蛋白-1β(MIP-1β/CCL4)在病毒性心肌炎小鼠血清以及心肌组织中的变化,初步探讨CCL4在病毒性心肌炎中发挥的作用。方法:雄性Balb/c小鼠随机分成对照组15只和病毒性心肌炎组25只,病毒性心肌炎组腹腔注射病毒液,对照组腹腔注射Eagle's培养液。15 d处死小鼠,通过HE染色观察小鼠心肌病理的变化;RT-PCR观察CCL4以及促炎因子的m RNA水平,Western blotting观察CCL4蛋白水平的变化。结果:与正常对照组比,病毒性心肌炎组小鼠生存质量降低,生存率也显著降低;病毒性心肌炎组小鼠心肌炎性浸润严重,心肌组织中的CCL4、IL-1β、TNF-α mRNA水平显著增高,CCL4蛋白水平也明显增高,并且CCL4的浓度和蛋白表达水平与心肌病变积分呈正相关。结论:病毒性心肌炎CCL4的表达显著增加,并且与心肌病变程度相关。     

黄芪注射液对缺血性心肌病大鼠心肌的保护作用*

目的: 探究黄芪注射液对缺血性心肌病大鼠心肌保护作用及其机制。方法: 将36只雄性鼠随机分成:对照组(12只)、缺血性心肌病组(12只)及黄芪注射液组(12只);缺血性心肌病组和黄芪注射液组的大鼠开胸结扎冠状动脉,建立缺血心肌病大鼠模型;建立心肌缺血模型后,黄芪注射液组术后注射黄芪注射液(每周一次,剂量:10 g/kg体重),共注射4次,其他两组腹腔均注射相同剂量的生理盐水;4周后给予3组大鼠麻醉后行心电图及心脏彩超后,处死大鼠取心肌标本行电镜检查,观察其心肌病理超微结构的变化,检测大鼠心肌细胞线粒体Ca²⁺浓度和心肌细胞线粒体融合蛋白mitofusin 1(Mfn1)及凋亡因子C/EBP 同源蛋白(chop)表达,以及黄芪注射液对大鼠心肌细胞ATP敏感钾通道电流的作用。结果: 与对照组比较,缺血性心肌病组中大鼠出现心律失常现象;心室扩大,EF值降低;心肌排列紊乱,线粒体空泡化严重;线粒体Ca²⁺浓度增加(P＜0.01);Mfn1表达减低(P＜0.05),chop表达增加(P＜0.01); 与缺血性心肌病组比较,黄芪注射液组中大鼠心律失常发生率明显减少,心肌细胞动作电位时程缩短,心脏彩超及心肌病理明显改善并存在大量线粒体融合,心肌线粒体Ca²⁺浓度和chop表达明显减少(P＜0.01),而Mfn1表达明显增加(P＜0.01),心肌细胞ATP敏感钾电流明显增加(P＜0.01),该作用可被ATP敏感钾通道特异性阻断剂格列本脲阻断。结论: 黄芪注射液明显减少缺血性心肌病大鼠心律失常的发生率,继而改善缺血性心肌病大鼠心脏功能、减轻心肌病理损伤,其作用机制可能通过心肌细胞ATP敏感钾通道所介导。