含P301L突变的Tau转基因小鼠纯合子品系的建立及鉴定

目的:建立含P301L突变的tau转基因小鼠的纯合子品系。方法:雄原核显微注射法获得含P301L突变的tau转基因阳性首建鼠,通过SYBR Green实时荧光定量PCR法和传统育种方式结合鉴定纯合子和杂合子。结果:共选育出95只纯合子,鉴定出的纯合子具有优于杂合子模拟老年痴呆生物学特性改变的优势。结论:外源性基因tau能稳定遗传,采用的SYBR Green实时荧光定量PCR和传统育种方式结合筛选鉴定纯合子和杂合子快速、经济、可靠。     

转人APP基因小鼠视网膜视神经细胞超微结构改变

目的观察转人APP基因AD模型小鼠视网膜各层细胞超微结构的改变。方法实验采用C57BL/6J转人APP基因小鼠6只,采用同背景10个月龄的C57 BL/6J正常小鼠6只做为对照。灌注处死小鼠,完整取出右眼球分离视网膜,制作电镜标本观察视网膜各层细胞超微结构改变。结果与对照组相比,模型组视网膜各层细胞异常明显:膜盘排列结构模糊,局部间隙溶解、甚至消失;外核层细胞体干枯变形,染色质聚集浓缩;内核层可见固缩细胞;神经节细胞胞膜不完整,线粒体水肿,并可见染色质聚集。结论转人APP基因AD模型小鼠视网膜各层神经细胞超微结构存在明显病理改变。     

MPTP致空间学习记忆障碍小鼠脑内NSF表达变化

目的:观察1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致空间学习记忆障碍小鼠脑内N-乙基马来酰亚胺敏感融合蛋白(NSF)表达变化。方法:C57BL/6J小鼠随机分为2组(n=24),包括对照组和MPTP处理组,雌雄各半。MPTP处理组给予C57BL/6J小鼠MPTP(20 mg/0.2 ml/(kg·d),s.c.)连续8 d,每天一次,对照组给予等量的生理盐水用同样方法处理。第9天起采用水迷宫实验,连续4 d检测C57BL/6J小鼠空间学习记忆的改变,水迷宫实验测试结束后,采用免疫组化和Western blot方法检测小鼠脑内NSF表达改变。结果:每组选取小鼠24只进行水迷宫测试,与对照组相比,MPTP处理组小鼠出现空间学习记忆障碍;每组选取小鼠5只进行免疫组化检测,同时每组选取5只小鼠进行Western blot检测,海马CA1区NSF免疫反应活性明显减弱(P0.01),前额叶皮层NSF的免疫反应活性(P0.01)和蛋白表达(P0.05)都明显增高。结论:MPTP致空间学习记忆障碍小鼠脑内NSF表达出现异常,可能参与MPTP致空间学习记忆障碍的发病机制。     

卡介苗对老年性痴呆模型小鼠学习记忆和脑内Aβ的影响

目的通过检测卡介苗对阿尔茨海默症(AD)模型小鼠学习记忆等行为和脑内Aβ的影响,探索卡介苗治疗阿尔茨海默症的可能性。方法 12周龄的C57BL/6小鼠随机分成3组,每组8只,分别为生理盐水对照组(NS)、D-半乳糖和亚硝酸钠AD模型组、卡介苗组(105CFU),对各组小鼠作体征记录并统计小鼠体重的变化情况。水迷宫检测小鼠的学习记忆能力。通过ELISA检测小鼠脑内Aβ蛋白的含量,同时采用免疫荧光染色检测小鼠脑内Aβ斑块的沉积情况。结果与对照组相比,AD模型组体重增幅较小,学习记忆能力下降,脑内可检测到Aβ蛋白和斑块;经过卡介苗处理的AD小鼠,其学习记忆能力的受损得到改善,同时小鼠脑内Aβ含量较AD模型组下降。结论卡介苗能改善AD模型小鼠的学习记忆功能,降低小鼠脑内Aβ沉积,可能在AD疾病的治疗中发挥作用。     

低氧对小鼠学习记忆力及脑中tau蛋白磷酸化的影响

目的：研究不同低氧暴露对小鼠学习记忆及脑中tau蛋白磷酸化的影响。方法：雄性昆明小鼠40只,随机分为4组（n=10）：对照组（control）、8h低氧暴露组（8h）、7d低氧暴露组（7d）和28d低氧暴露组（28d）。将低氧暴露模型组置于模拟高原海拔5500m的低压氧舱,每天低氧暴露8h,避暗和旷场实验检测其活动能力及学习记忆能力：免疫印迹技术检测小鼠海马和皮层中tau蛋白磷酸化水平。结果：随着低氧时间的增加,小鼠短期学习记忆力及活动能力下降程度增大,28d低氧暴露后其下降程度最大;海马中tau蛋白多个位点的磷酸化水平呈现升高趋势,28d时tau蛋白磷酸化程度最高（P〈0．05）;皮层中的磷酸化水平在低氧暴露7d时达到最高,低氧暴露28d时略有降低,但与control组相比仍有明显差异（P〈0．05）。结论：慢性间歇性低氧可导致小鼠学习记忆能力下降,其机制可能与tau蛋白过度磷酸化相关。     

小鼠脑内NO/NOS-cGMP信号系统与吗啡依赖形成的机制

本文观察了吗啡依赖小鼠脑组织ｃＧＭＰ含量,钙依赖性及非钙依赖性ＮＯＳ活性的变化,蛋白激酶Ａ对ＮＯＳ活性的磷酸化调节以及一氧化氮合酶（ＮＯＳ）抑制剂对吗啡依赖形成的影响。结果发现：（１）小脑,纹状体,海马及大脑皮质ｃＧＭＰ含量明显下降;（２）纹状体及大脑皮质钙依赖性ＮＯＳ活性明显升高,而ＩＰ２０（ＰＫＡ抑制剂）可抑制比变化,小脑及海马依赖性ＮＯＳ活性及以上各脑区非钙依赖性ＮＯＳ活性无明显变化;（３）     

脑内ATF4对学习记忆的调节作用

转录激活因子4(ATF4)属于碱性亮氨酸拉链结构域蛋白中的ATF/CREB转录因子家族,ATF4在脑内广泛表达,在应激、痛觉、突触可塑性和神经退行性变等中发挥重要作用。学习与记忆是脑的高级功能之一,学习是获取新信息的过程,记忆是将信息进行编码、储存及提取的过程,二者被认为是认知活动的基础。突触可塑性是突触在形态、结构和功能上的可变性和可修饰性,与神经系统的发育和学习记忆等脑的高级功能密切相关。突触可塑性的长时程增强和长时程抑制是学习和记忆形成的基础。近年来研究发现, ATF4与突触可塑性和学习记忆密切相关,其在神经退行性变、脑损伤和药物成瘾等疾病中扮演重要角色,有必要深入理解ATF4在学习记忆障碍相关疾病中发挥的作用,为相关疾病的治疗提供新靶点。     

学习记忆对脑内c-fos基因表达的影响

学习记忆是人和动物重要的脑功能，大量事实表明，学习记忆过程与脑内ｃ－ｆｏｓ基因的表达密切相关。由学习记忆所诱导的ｃ－ｆｏｓ基因表达在脑内广泛分布，以皮层、海马和边缘系统为多，依学习记忆训练模型的不同，其表达时程有所差异，但一般于训练后立即或３０分钟左右出现，１～２小时左右达峰值。被动和主动回避训练、光辨别训练及味觉厌恶性条件反射训练等多种学习记忆模型均可诱导脑内ｃ－ｆｏｓ基因的表达。其他影响学习记     

酸柏栀油软胶囊对去势大鼠学习记忆及脑内NO、Ach的影响

目的:观察酸柏栀油软胶囊对去势大鼠促学习记忆作用并初步探讨其机制。方法:采用Morris水迷宫法观察酸柏栀油软胶囊对去势大鼠学习记忆的影响,测定大鼠血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)及脑内一氧化氮合酶(NOS)、乙酰胆碱转移酶(ChAE)、胆碱酯酶(AChE)含量。结果:酸柏栀油软胶囊能缩短去势大鼠登台潜伏期,且随训练次数增加而逐渐缩短;增加穿越原平台次数;能增加血清E2,降低FSH、LH;能增加脑内NOS、ChAE活性,降低AChE活性。结论:酸柏栀油软胶囊对去势大鼠有促学习记忆作用,该作用可能与其影响雌激素、富含不饱和脂肪酸,增加脑内一氧化氮(NO)、乙酰胆碱(Ach)含量有关。     

慢性疲劳综合征小鼠的空间学习和记忆功能降低

目的对比分析慢性疲劳综合征小鼠与正常小鼠之间空间学习记忆功能存在的差异性。方法采用复合刺激法复制慢性疲劳综合征(CFS)小鼠模型,随后采用Morris水迷宫检测CFS小鼠与正常组小鼠之间空间学习记忆功能存在的差异。结果模型组小鼠寻找隐藏平台的潜伏期、总路程、平均游泳速度及目标象限滞留时间占总时间的百分比均显著低于正常组(P0.05),正常组小鼠寻找隐藏平台主要采用空间搜索策略,而CFS小鼠主要采用重复环绕搜索策略。结论 CFS小鼠的空间学习和记忆功能降低。     

导入小鼠L细胞的人α干扰素基因的调控转录

用无性繁殖的人染色体干扰素-α_1基因转化小鼠细胞,此基因同疱疹胸苷激酶基因连接作为筛选标记。13~*个细胞系中的8个含有人干扰素基因。用新城病毒侵染来刺激人干扰素mRNA的合成--此合成过程与内源的小鼠干扰素基因合成mRNA同时进行。     

转IE2基因荷瘤小鼠中ATF5功能影响的研究

利用转IE2基因小鼠荷瘤的方法,对肿瘤组织中ATF5转录激活因子进行定性和定量的检测,从而探究巨细胞病毒(HCMV)即刻早期蛋白IE86对ATF5功能的影响。通过鼠胶质瘤细胞GL261对转基因鼠进行荷瘤,采用RT-PCR和Western blot的方法,对荷瘤鼠的肿瘤组织中转录因子ATF5的表达量进行检测。采用RT-PCR和Western blot的方法检测荷瘤鼠肿瘤组织中转录因子ATF5的表达,结果显示,转IE2基因小鼠体内ATF5表达量较正常小鼠ATF5表达量高。ATF5在转IE2基因荷瘤鼠中呈现高表达状态,ATF5是一个与凋亡密切相关的转录因子,在凋亡、分化及发育等生理过程中发挥着重要作用。     

百草枯对小鼠神经行为发育及学习记忆功能的影响

目的观察百草枯(PQ)对发育期C57BL/6J小鼠神经发育的毒性作用,并探讨百草枯对小鼠学习记忆的影响。方法 80只出生21日龄的仔鼠分为对照组(生理盐水)、1.25、2.5、5、10 mg/(kg·d)五组,灌胃染毒百草枯,每天一次,连续30 d。观察小鼠的一般生理和神经行为发育情况,并在染毒结束后进行Morris水迷宫实验和避暗实验,测试小鼠的学习记忆功能。神经行为学测试结束后取小鼠大脑,称重并进行病理检查,同时利用透射电镜观察各组小鼠中脑黑质部超微结构。结果染毒期间小鼠一般状况没有明显变化,染毒结束后各组体重没有统计学差异;在Morris水迷宫测试中,各组差异没有统计学意义,而避暗实验中与对照组相比,高剂量组的避暗潜伏期延长,差异有显著性(P<0.05);在病理切片和透射电镜观察中,在高剂量组分别观察到黑质细胞减少和神经元细胞凋亡。结论百草枯暴露对发育期小鼠成年后神经行为有影响,同时会使小鼠成年后出现脑组织的病理变化,发生器质性的病变。     

鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆与P基因的表达鉴定

将鹅源新城疫病毒的NP、P和L基因通过RT-PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM—T easy载体,再分别亚克隆到真核表达载体pCI—neo上,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。利用P基因开放性阅读框(ORF)上靠近终止密码上游的AgeI位点,将报告基因绿色荧光蛋白(GFP)基因克隆进P基因真核表达重组质粒,分别转染COS-1细胞和CEF细胞,在倒置荧光显微镜下可见到绿色荧光,表明GFP基因已得到表达,由此证明P基因也已得到表达。鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆成功,为即将进行的鹅源新城疫病毒的反向遗传操作以及功能基因组研究打下基础。     

脑心肌炎病毒VPl蛋白100位氨基酸的突变导致其对小鼠致病性的改变

作为脑心肌炎病毒（EMCV）的天然宿主,感染小鼠能引发多种疾病,其中包括脑炎、心肌炎及糖尿病．本研究利用之前构建完成的EMCV分离毒株BJC3的野生型感染性克隆,采用定点突变方法构建了4个VPl第100位氨基酸突变的突变株感染性克隆（VPt第100位氨基酸分别突变为丝氨酸、丙氨酸、异亮氨酸和脯氨酸）并获得了拯救病毒．虽然各突变病毒及野生型亲本拯救病毒在BHK-21细胞上形成的噬斑大小有所不同,但各病毒在BHK-21细胞上的复制水平未见差异．通过对突变病毒致病性进行系统分析,探究了VPl第100位氨基酸在病毒致病性及感染后疾病表型中所起的重要作用．结果表明,异亮氨酸和脯氨酸突变病毒对小鼠的致死率降低,脑中病毒载量减少且脑组织损伤轻微,而丝氨酸和丙氨酸突变病毒表现了与野生型亲本病毒相似的高致病性．结果证实,EMCVVPl第100位苏氨酸在病毒的体内复制中起重要作用,其突变会导致病毒对小鼠致病性的改变．     

双侧杏仁核注射降钙素基因相关肽对小鼠学习记忆的作用

本研究旨在探讨外源性给予杏仁核中央核区不同浓度的降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)对小鼠认知和学习记忆的影响。将30日龄C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组、手术对照组、200 ng CGRP组、400 ng CGRP组和800 ng CGRP组,每组10只。外源性给予双侧杏仁核中央核区不同浓度的CGRP后,用旷场实验检测各组小鼠认知功能,用新物体认知实验和Morris水迷宫实验检测各组小鼠学习记忆能力。旷场实验结果显示,与空白对照组相比,800 ng CGRP组小鼠的水平运动得分显著增加。新物体认知实验结果显示,与空白对照组相比,400 ng CGRP组的认知指数显著提高。Morris水迷宫实验结果显示,与空白对照组比较,400和800 ng CGRP组小鼠的潜伏期均显著缩短,穿越平台的次数显著增加;与200 ng CGRP组比较,400和800 ng CGRP组小鼠寻找平台的潜伏期均明显缩短。以上结果提示,双侧杏仁核注射CGRP可剂量依赖性促进小鼠非空间和空间学习记忆功能。     

脑心肌炎病毒VP1蛋白100位氨基酸的突变导致其对小鼠致病性的改变

作为脑心肌炎病毒(EMCV)的天然宿主,感染小鼠能引发多种疾病,其中包括脑炎、心肌炎及糖尿病.本研究利用之前构建完成的EMCV分离毒株BJC3的野生型感染性克隆,采用定点突变方法构建了4个VP1第100位氨基酸突变的突变株感染性克隆(VP1第100位氨基酸分别突变为丝氨酸、丙氨酸、异亮氨酸和脯氨酸)并获得了拯救病毒.虽然各突变病毒及野生型亲本拯救病毒在BHK-21细胞上形成的噬斑大小有所不同,但各病毒在BHK-21细胞上的复制水平未见差异.通过对突变病毒致病性进行系统分析,探究了VP1第100位氨基酸在病毒致病性及感染后疾病表型中所起的重要作用.结果表明,异亮氨酸和脯氨酸突变病毒对小鼠的致死率降低,脑中病毒载量减少且脑组织损伤轻微,而丝氨酸和丙氨酸突变病毒表现了与野生型亲本病毒相似的高致病性.结果证实,EMCVVP1第100位苏氨酸在病毒的体内复制中起重要作用,其突变会导致病毒对小鼠致病性的改变.     

转Bt基因稻谷对小鼠生理与生殖的影响

目的:通过对小鼠饲以Bt转基因稻谷,观察Bt转基因稻谷对小鼠的生理与生殖能力的影响,为评价Bt转基因稻谷的安全性提供科学依据.方法:将雌、雄昆明小鼠48只分开饲养,各按体重随机分为转基因稻谷组和非转基因稻谷组,饲以对应的稻谷进行90天喂养试验,检测相关生理与生殖指标.结果:与非转基因稻谷组相比,饲以Bt转基因稻谷组小鼠...     

灵芝对小鼠空间分辨学习与记忆的影响

本文用Y-型迷宫法测试小鼠空间分辨行为。实验结果表明,每日ig灵芝2.58/kg共7d,有明显促进学习的作用。每日ig灵芝2.5g/kg共7d或ig灵芝5g/kg共7d都能显著地拮坑东莨菪碱所致学习障碍的作用。此外,学习训练后立即ig灵芝2.5g/kg或ig灵芝5g/kg也有明显地改善东莨菪碱损害记忆巩固的作用。     

四逆散对疲劳大鼠学习记忆及脑内GABA_B1表达的影响

目的：探讨四逆散对疲劳大鼠学习记忆及脑内GABA_B1受体的影响。方法：应用游泳训练和睡眠剥夺方法复制疲劳动物模型,运用Y-迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力,采用免疫组化方法检测大鼠脑内GABA_B1受体阳性反应物的变化。结果：模型组与正常组相比,大鼠Y-迷宫正确反应率明显下降,错误反应率明显升高,大鼠脑内GABA_B1的阳性反应物数目明显增多;中药治疗组与模型组相比,正确反应率明显升高,错误反应次数明显下降,脑内GABA_B1受体的阳性反应物数目明显减少。结论：四逆散对疲劳大鼠学习记忆能力的下降具有改善作用。