家蝇Phormicin A多克隆抗体的制备及效价检测

家蝇Phormicin作为防御素家族的成员,是一类具有广普抗菌活性的抗菌肽.本研究采用原核表达法表达并纯化获得了家蝇PhormicinA蛋白.将家蝇Phormicin A原核表达蛋白与完全佐剂和不完全佐剂乳化混匀,先后免疫新西兰白兔获得其多克隆抗体.通过原核表达蛋白中和吸附实验,以及Western blot实验验证了抗体的特异性.进一步用金黄色葡萄球菌刺激家蝇三龄幼虫样品,进行内源性验证并测定抗体的效价.结果 显示,该多克隆抗体既可以识别家蝇Phormicin A原核表达蛋白,也可以识别金黄色葡萄球菌刺激家蝇三龄幼虫产生的内源性Phormicin A蛋白.本研究为进一步探索Phormicin在家蝇天然免疫和防御中的机制等后续工作打下基础.     

用鸡蛋大量生产治疗龋齿的抗体

晃和显像(dispute)公司与太阳化学公司共同开发从蛋黄中大量生产抑制龋菌的抗体的方法.并打算最近向大型点心制造厂供应.晃和公司开始销售这种食品原料,产品名为"?".利用鸡生产价格低廉的抗体的方法在食品业中接近实用化.这种抗体是用含砂糖的培养基培养龋齿菌Streptococcus mutans给鸡免疫而获得的.抗体有防治龋齿的效果,是、日本大学牙科学部教授大竹繁雄等用小鼠实验确认的.并于7月在     

金黄色葡萄球菌黏附素ClfA等抗体抑制该菌黏附牛乳腺上皮细胞效果的比较

【目的】为从免疫的角度比较和分析黏附素分子细胞外纤维蛋白原结合蛋白(Extracellular fibrinogen-binding protein,EfB)和纤维连接蛋白结合蛋A(Fibronection binding protein,FnBP)对聚集因子A(Clumping factor A,ClfA)抑制牛源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)黏附牛乳腺原代上皮细胞作用的增强效果。【方法】本试验分离培养牛乳腺上皮细胞并鉴定;将真核重组质粒EfB和FnBPA分别与ClfA组合免疫新西兰大白兔,并利用免疫后抗体体外抑制2株SA分离株侵染牛乳腺上皮细胞,采用平板计数法定量检测与比较不同免疫组合诱导抗体对黏附的抑制作用;对SA和乳腺上皮细胞分别进行荧光染色,观察不同免疫组合诱导的抗体对黏附抑制效果的差异。【结果】成功分离培养了牛乳腺原代上皮细胞;证明了构建的ClfA、FnBPA和EfB真核重组表达质粒均可在细胞中表达,且在免疫实验兔后可诱导特异性抗体的产生;细菌平板计数和荧光染色观察的结果表明,黏附素分子单独和组合免疫的抗体对该菌不同菌株(GY278和GY309)的黏附抑制能力不同,ClfA抗体的黏附抑制能力最强,FnBPA分子A区的黏附抑制能力优于D区。FnBPA、EfB分别与ClfA联合免疫抗体对黏附的抑制程度高于黏附素分子单独免疫组,FnBPA分子A区对ClfA黏附抑制的增强作用优于D区,FnBPA-A区与Efb相比对ClfA的黏附抑制增强差异不显著。【结论】FnBPA-A、FnBPA-D和EfB分别与ClfA联合免疫可不同程度地影响ClfA的黏附抑制效果,该结果为以黏附素分子为靶点的牛乳腺炎疫苗的研究提供了实验数据。     

不同免疫方案制备家蚕抗菌肽多抗血清的比较

目的:以His-CecropinXJ融合蛋白、pcDNA3.0-cecropinXJ重组质粒为免疫原,分别采用蛋白皮下免疫、DNA肌肉免疫及使用活体基因导入仪肌肉免疫BALB/c小鼠,制备新疆家蚕抗菌肽的多克隆抗血清,并评价不同免疫方案对抗原免疫原性的影响。方法:采用间接ELISA测定免疫血清中抗新疆家蚕抗菌肽IgG抗体的滴度及亚型分类。用Western blot检测各免疫方案制备的抗血清,与新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ抗原结合的特异性。结果:不同免疫方案均可诱导产生针对新疆家蚕抗菌肽不同滴度的多克隆抗血清。使用活体基因导入仪免疫后,可诱导高滴度的抗体产生。结论:以His-CecropinXJ蛋白免疫BALB/c小鼠后,可诱导高滴度的IgG1抗体产生;以pcDNA3.0-cecropinXJ质粒免疫后,可诱导针对IgG2a的抗体产生。     

用“鸡蛋抗体”治疗家畜腹泻

岐阜免疫研究所从免疫的鸡生出的蛋中获得抗体IgG的"鸡蛋抗体",可用来开发猪和牛的腹泻治疗药.正在建厂的生产规模是每天生产按kg计算的粗IgG类,计划1991年利用这种制剂先用猪进行野外试验.作为新的抗体生产手段,鸡有了新的用途.King酿造公司这月已销售了用鸡蛋制造的抗体.太阳化学公司接受新技术开发事业团的委托也     

家犬用狂犬病口服基因工程疫苗的研究初探

中国的狂犬病主要由农村家犬通过咬伤传染所致,为了研制高效实用的家犬用狂犬病口服基因工程疫苗,本研究把狂犬病病毒G蛋白基因插入真核表达质粒pIRESneo,构建重组表达质粒pIRESneo-G,转化入鼠伤寒减毒沙门氏菌SL3261,构建重组口服疫苗SL3261-pIRESneo-G。通过口服免疫小鼠,检测免疫血清中和抗体水平及其病毒保护效果。结果显示,经小鼠口服免疫接种一次后第三周能产生高水平的中和抗体水平,达到WHO要求的0.5 IU/mL;免疫小鼠经肌肉注射100 LD50/0.03 m L的野毒株GX074后获56%保护效果。     

应用人型单克隆抗体治疗感染疾病

<正> 接受免疫仰制剂治疗癌症、重度烧伤等免疫功能低下的患者,常招致严重的绿脓杆菌(P、aeruginosa)感染。此外,可对现有抗生素很快产生抗药性,用化学疗法很难治疗。 Millican等(1958年)首次报道抗绿脓杆菌免疫血清抗体疗法有实用价值。以后,许多作者对抗绿脓杆菌各种成分的抗体进行了深入研究,结果发现脂多糖(LPS,存在于菌体外膜)抗体,可借助吞噬细胞的免疫吞噬作用而感染。用鼠型单克隆抗体(McAp)试验也有同样的结果,并发现抗外膜蛋白McAp的防御感染作用比抗LPSMcAp效果差。 最近,制备抗绿脓杆菌脂多糖的人型McAp已获成功,产生人型McAp的细胞是采用Epstein-Barr病毒(EBV)转化法或杂交细胞瘤法。作者对健康人未梢血淋巴细胞的病毒转化细胞产生的抗绿脓杆菌人型     

G145R突变后乙型肝炎病毒表面抗原在酵母系统的表达及其免疫学特性分析

为了研究乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗原(HBsAg)发生G145R突变后的免疫学特性改变情况,首先利用Pichia pastoris酵母表达系统分泌表达G145R突变后的HBsAg的preS2 S(中蛋白),用重组表达产物免疫小鼠,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot实验等研究其抗原性和免疫原性与野毒型HBsAg的异同。从150个阳性表达克隆中筛选出一株表达量最高的克隆株MC23,Western blot检测显示,表达的HBsAg中蛋白单体主带分子量在34kD、37kD左右,表达量约为200μg／L。用不同的HBsAg检测试剂检测其抗原性发现,G145R突变后的HBsAg,用绝大多数试剂都不能很好地检出,检出能力只有野毒型HBsAg的50％或更低,但用美国雅培公司的试剂检出能力可达野毒的98％。G145R突变后的HBsAg中蛋白免疫小鼠后,血清中可检测到1：1600的特异性表面抗体,该抗体与G145R突变后的HBsAg“a”决定簇合成肽P2—145R也能发生交叉反应,反应滴度为1：80。但该抗体和野毒型HBsAg蛋白以及野毒“a”决定簇合成肽P1-wt均不反应。上述结果表明,G145R突变后的HBsAg中蛋白在Pichia pastoris酵母系统得到了分泌表达,表达产物仍具有较好的免疫原性,但和野毒HBsAg相比,其抗原性和免疫原性发生了明显改变。     

抗鹅免疫球蛋白轻链单克隆抗体的鉴定及其应用（英文）

免疫球蛋白是机体固有免疫系统的组成部分,是机体防御的第一道防线。本研究对抗鹅免疫球蛋白轻链单克隆抗体进行了特征分析并将其应用到不同免疫试验中用以检测鹅免疫球蛋白。用此单克隆抗体制备的免疫亲和层析柱用以分离血清中的鹅免疫球蛋白;偶联辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)后的单克隆抗体用作第二抗体来检测鹅特异性抗体。此外,该单克隆抗体可以识别和定位外周血淋巴细胞中的SIg+淋巴细胞。研究表明,该单克隆抗体可在多种条件下检测或分离鹅免疫球蛋白并作为研究鹅体液免疫的有力工具。     

抗鹅免疫球蛋白轻链单克隆抗体的鉴定及其应用

免疫球蛋白是机体固有免疫系统的组成部分,是机体防御的第一道防线。本研究对抗鹅免疫球蛋白轻链单克隆抗体进行了特征分析并将其应用到不同免疫试验中用以检测鹅免疫球蛋白。用此单克隆抗体制备的免疫亲和层析柱用以分离血清中的鹅免疫球蛋白;偶联辣根过氧化物酶 (Horseradish peroxidase,HRP) 后的单克隆抗体用作第二抗体来检测鹅特异性抗体。此外,该单克隆抗体可以识别和定位外周血淋巴细胞中的SIg+淋巴细胞。研究表明,该单克隆抗体可在多种条件下检测或分离鹅免疫球蛋白并作为研究鹅体液免疫的有力工具。     

生产人抗体用小鼠开发合同延期

日本eisai公司与美国GenPlarm International公司(加利福尼亚州Mountain View)公司更新利用重组小鼠(HuMab小鼠)继续开发人抗体的合同。 HuMab小鼠是用一种剔除实验技术破坏小鼠抗体基因而导人人抗体基因的重组小鼠。一旦给这种小鼠注射抗原,就可激活小鼠的免疫系统,产生与抗原结合的特异性抗体。但是与普通小鼠不同,用HuMab小鼠诱导的抗体是人化抗体分子。利用HuMab小鼠有可能开发出用普通免疫法不能得到的与人抗原结合的     

乙肝病毒RNA复制子疫苗与DNA疫苗对小鼠免疫效率的比较

为建立并获取更有效的乙肝疫苗,本实验通过将所构建的HBV RNA复制子疫苗和DNA疫苗分别免疫小鼠,检测细胞免疫与体液免疫的效果.结果表明,以pSFV为基础构建的疫苗载体免疫小鼠后采集的血清中抗体效价不随免疫剂量的增加而提高,在较低剂量免疫的时候,RNA复制子疫苗所产生的抗体效价优于DNA疫苗.并且RNA复制子疫苗在以较低剂量免疫后脾细胞CTL活性高于DNA疫苗.本研究证明HBV RNA疫苗比DNA疫苗表达效果更好,安全性更高,更具有应用前景.     

Wistar大鼠皮内免疫Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗的免疫持久性及加强免疫效果研究

脊髓灰质炎野毒株消灭后,口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(Oral polio vaccine,OPV)将被停止使用,脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivated poliovirus vaccine,IPV)将全面替代OPV,但IPV成本过高,难以满足全球需要。皮内免疫可以降低Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivated poliovirus vaccine derived from Sabin strain,sIPV)的免疫剂量,本研究将观察sIPV疫苗皮内免疫大鼠后的免疫持久性及加强免疫效果。本研究采用sIPV,设皮内免疫组、全剂量肌肉免疫组和皮内免疫阴性对照组,接种Wistar大鼠,于3剂基础免疫程序完成后第1个月、12个月采血;第12个月采血后加强免疫1剂,并于加强免疫1个月后采血。中和试验检测各血清抗脊灰病毒中和抗体效价,评价皮内免疫sIPV的免疫持久性及加强免疫效果。Wistar大鼠3剂基础免疫后1个月,1/5、1/3剂量皮内免疫组与全剂量肌肉免疫组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体阳转率均达到了100%,各型别中和抗体几何平均滴度(Geometric mean titer,GMT)均远高于1∶8保护水平。基础免疫后12个月,sIPV全剂量组各型阳转率均维持在80%以上,1/10剂量皮内免疫组在50%以上,1/5剂量皮内免疫组维持在70%以上,1/3剂量皮内免疫组维持在80%以上,除1/10剂量组Ⅱ型外其余各组各型别GMT均维持在1∶8以上。加强免疫后1个月,1/5剂量皮内免疫组、1/3剂量皮内免疫组及全剂量组的Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型各组中和抗体阳转率均达到100%,并能够诱导产生远高于1∶8的抗体水平。本研究结果显示sIPV疫苗皮内免疫具有良好的免疫持久性及加强免疫效果。     

牛乳源金黄色葡萄球菌EsxA蛋白的表达及免疫原性分析

为分析牛乳源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)EsxA蛋白的免疫原性,构建EsxA-p ET-28a重组表达质粒,重组质粒经诱导表达后进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。用纯化后重组EsxA蛋白免疫小鼠,用间接ELISA检测免疫小鼠血清中的IgG、IgG1和IgG2a水平;免疫小鼠经S.aureus菌株攻击后,检测小鼠肝、脾、肾组织荷菌数和免疫保护率,观察S.aureus菌株攻击后小鼠肝、脾、肾病理组织学变化。结果表明,成功诱导表达了EsxA重组蛋白,该重组蛋白免疫小鼠后血清抗体效价可达1∶900,与对照相比,重组蛋白免疫后可减少小鼠肝、脾、肾组织的荷菌数,减轻这些脏器的病理损伤,对免疫小鼠保护率达75%。上述结果表明,该重组Esx A蛋白具有良好的免疫原性。     

用鸡蛋抗体抑制蛀牙

鸡蛋抗体的质量管理简单对日本大学、太阳化学等公司确认以突变链球菌菌体为抗原制成的鸡蛋抗体有抑制蛀牙的效果已有报道.因此,阪大、钟纺小组强调了使用精制特定CA—GTase(分子量15,6万)的抗原的优点.用精制特定的抗原,制造的鸡蛋抗体的品质管理是容易的,而且也易解析抑制蛀牙效果的机制.还报道了对突变链球菌的表层抗原的抗体在体内引起自     

表达轮状病毒G2和G3型vp7基因重组腺病毒的免疫效果

为探索以非复制型腺病毒为表达载体的多价轮病毒(Rotavirus,RV)基因工程疫苗的可行性,在前期工作的基础上,对表达我国G2和G3型毒株νp7基因的重组腺病毒的免疫效果进行了研究.分别用表达G2和G3型的νp7基因的重组腺病毒rvAdG2vp7、rvAdG3VP7经滴鼻和灌胃两种途径免疫Balb/c小鼠,对免疫后小鼠的血清抗体、黏膜抗体和相关的细胞因子水平进行了检测和比较。结果表明,用表达G2和G3型νp7基因的管理费用腺病毒经滴鼻和灌胃两种途径免疫小鼠后,可诱导机体产生较强的RV特异性免疫反应,名手体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫,并能产生中的抗体.但免疫反应以Th1类反应也占有相当的比例.本研究为新型RV基因工程疫苗的深入研究奠定了基础.     

流行性乙型脑炎病毒减毒株免疫仔猪血清学反应和流行病学保护

1. 用乙脑病毒的减毒株C株和强毒株P,株免疫仔猪,接种P,株后48和72小时从仔猪血液中可检出病毒,用C株免疫的动物,检查病毒血症全属阴性。 2. 免疫前后检查和比较血清抗体的结果是：用P3株免疫的两只仔猪,免疫后抗体比免疫前明显增长;用C株疫苗10毫升和1.0毫升各免疫6只的两组动物中,免疫后分别有5只和2只抗体明显增长;接受灭活疫苗的6只动物,抗体全未增长。 3. 比较各组动物免疫前后血清抗体水平(见表2)还发现,对照组和灭活疫苗组内各有两只、C株疫苗10毫升免疫组内有一只动物,免疫后较免疫前的抗体水平反而有所降低。此种降低显然是母体被动抗体水平随年龄增大而下降的表现。 4. 在乙脑流行季节,从各组动物体内连续采取血管末梢血液,分离自然界散布的野生乙脑病毒,以观察流行病学保护效果。从对照组动物10只中有5只、灭活疫苗组6只中的2只分离到了野生乙脑病毒;而在用c株免疫的两组共12只,用P|株免疫的2只中,没有得到乙脑病毒。这些数据可以说明,C株病毒可用于免疫仔猪以防止自然界乙脑病毒造成的病毒血症,使用剂量小到1．0毫升仍有效。     

异体自噬的操控:病原微生物对宿主翻译后修饰的调节作用

自噬是一种广泛存在于真核细胞中的溶酶体依赖性分解代谢途径,涉及细胞分化、饥饿耐受和免疫防御等生物学功能.其中,异体自噬被定义为真核细胞特异性识别并清除胞内病原微生物的过程,是免疫细胞行使宿主防御的重要方式.然而,许多病原微生物已经"开发"了特殊的毒力因子(包括效应蛋白质和表面蛋白质等),衍生出多种逃避或劫持自噬作用的策...     

日本首次引进巨噬抗体技术

在日本企业中,三菱化学公司最先从英同Cambridge Antibody Technology公司引进在巨噬粒子表面表达人抗体的抗原结合部位、与抗原不产生免疫反应,筛选出抗体的技术即噬菌抗体技术。因此三菱化学公司打算开发与免疫有关的医药。该公司于1993年就从美国IDEC Pharmaceuticals公司引进了抗B7灵长类化抗体(免疫抑制剂),结合这次技术引进,在迅速发展的抗体医药开发方面采取了与双重构造对应的战略。     

牙鲆甲状腺激素受体TRαA的原核表达和多克隆抗体的制备及应用

为研究牙鲆甲状腺激素受体TRαA在牙鲆变态发育过程中的调控作用,将TRαA基因克隆插入融合表达栽体pET30a,并在大肠杆菌Escherichia coli DE3(BL21)中进行诱导表达.表达菌株经1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导4 h后,重组蛋白TRaA表达并形成包涵体.SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定表达产物.包涵体经变性后在His-Bind树脂进行亲和层析纯化,柱上复性法对重组蛋白复性,获得纯度较高的目的蛋白,蛋白复性的效果良好.用纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔制备多克隆抗体.Dot blotting检测抗体效价达1:200 000,检测证明抗体特异性良好.此外,通过染色质免疫沉淀技术鉴定了在活体细胞中多克隆抗体与TRαA的特异性结合.表明了甲状腺激素通过其受体在体内参与碱性磷酸酶(ALP)基因的转录调控.