肿瘤与正常细胞表面糖链结构的流式细胞术分析

为了比较正常与肿瘤细胞表面的糖链结构差异,凝集素用荧光素标记后作为研究细胞膜糖链结构的探针,采用流式细胞技术在分子水平上分析。结果显示正常与肿瘤肝细胞与同一浓度的凝集素探针结合量有明显的不同。与凝集素ConA-FITC结合后,正常肝细胞的荧光峰较肿瘤肝细胞的荧光峰明显右移;与凝集素WGA-FITC、PHA-FITC结合后,正常肝细胞的荧光峰较肿瘤肝细胞的荧光峰明显左移。由于凝集素可识别特定糖链结构,该方法说明肿瘤肝细胞的糖链结构与正常肝细胞相比具有特征变化,即平分型糖链和唾液酸含量丰富,可能出现偏二天线以及天线数的增加。     

芝麻凝集素的纯化及其性质

凝集素作为研究细胞表面糖蛋白的结构和功能的探针,日益引起人们的兴趣。各种来源的凝集素可以有不同的糖结合专一性,这就为研究含糖高分子中糖部分的结构提供了一个有效的手段。我们在从各科植物种子中筛选凝集素时发现,芝麻抽提液含有能与多糖结合的蛋白     

七种二糖拟糖蛋白的制备及其在肝内源性凝集素组织定位中的应用

各种已知结构的糖蛋白是复合糖和糖结合蛋白研究中必需的工具。由于天然糖蛋白中糖链结构的复杂性和不均一性,不适宜作为研究的工具。人工合成拟糖蛋白(neoglycoproteins)为糖的结构和功能的研究及凝集素和其它糖结合蛋白的研究提供了重要工具,同时为内源性凝集素(endogenous lectin,EL)介导的糖蛋白——药物靶向治疗进一步临床使用提供了物质基础。本文报道以牛血清白蛋白(BSA)和     

半乳糖凝集素的结构和功能

半乳糖凝集素的结构和功能关键词半乳糖凝集素凝集素是能与特定糖结构结合的蛋白质,能够识别广泛分布于动物组织中的糖复合物。动物凝集素可分为４类：Ｃ类凝集素（包括选择蛋白,Ｓｅｌｅｃｔｉｎ）、Ｐ类凝集素、正五聚蛋白（Ｐｅｎｔｒａｘｉｎｓ）和半乳糖凝集素（暂...     

豆科凝集素研究进展

豆科凝集素是植物凝集素中最丰富,也是研究最多的一类凝集素。在生理条件下豆科凝集素大多是以二聚体或四聚体的形式存在,这种低聚物的形式给予豆科凝集素较强的糖专一性和大分子结构的稳定性。豆科凝集素除作为植物储存物质的作用外,还具有识别糖蛋白、糖肽及生物膜中碳水化合物和作为植物与微生物的共生介质等生理功能。现对豆科凝集素的结构、功能及其在生物学、农业和医学方面的应用进行了综述。     

凝集素芯片技术检测糖蛋白方法的建立及初步应用

建立了凝集素芯片技术检测糖蛋白的方法,对实验条件进行了优化,应用凝集素芯片初步检测分析了Chang?蒺s liver正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白糖链构成．将凝集素ConA、GNA固定于环氧化修饰的玻片表面,用Cy3标记标准糖蛋白RNaseB,利用凝集素识别特异糖链的原理建立凝集素芯片检测糖蛋白的方法．摸索出最佳封闭剂是含1% BSA的磷酸缓冲液,最佳孵育时间及温度为3 h和室温,最佳孵育缓冲液为含1% BSA和0.05% Tween-20的磷酸缓冲液,并用甘露糖抑制实验验证了凝集素芯片结合的特异性．用包含10种凝集素的芯片,成功解析了标准糖蛋白RNaseB、Fetuin的糖链构成,证实了凝集素芯片检测糖蛋白糖链的可行性．最后用凝集素芯片初步检测分析了Chang?蒺s liver正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白糖链构成,发现 Chang's liver正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白可能有多价 Sia或GlcNAc、terminalα-1,3 mannose、GalNAc、Galβ-1,4GlcNAc这些糖链结构的存在．蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰,它在微生物感染、细胞分化、肿瘤转移、细胞癌变等生命活动中起着重要作用,因此近年来蛋白质的糖基化研究受到广泛的重视,但由于缺乏一种简便、快速、高通量的检测手段,蛋白质糖基化修饰的研究发展缓慢．凝集素芯片技术的出现实现了对糖蛋白的快速、准确、高通量的检测 分析．     

一种新型家蝇蛹凝集素结构的初步探讨*

初步分析了分离出的一种分子量为55kDa,具有免疫活性的新型家蝇蛹D-半乳糖结合凝集素的结构,为深入研究其结构与功能之间的关系提供大量的信息。首先通过凝胶电泳染色确定此新型家蝇蛹凝集素具有糖链结构,借助蛋白质测序仪、分光光度计比色、β-消除反应、红外光谱以及原子力显微镜技术对其结构进行初步分析。此种家蝇蛹凝集素是一种蛋白和糖含量分别为97.36% 和2.1% 的球状单体,直径为75nm左右。肽链与糖链的连接方式为O-糖苷键型,肽链的N-末端封闭,糖环为吡喃型,为进一步分析其结构提供了可靠的依据。     

蓖麻蚕血淋巴中的凝集素

凝集素是一类蛋白质(或糖蛋白),它们具有凝集细胞的活性,并能够与某种(或某些)糖类专一结合。凝集素现已被广泛地用作研究细胞表面糖蛋白、糖脂的糖链结构以及研究伴随细胞生长和恶性转化时,细胞表面含糖物质变化的探针。另外,凝集素在生物体内的生理意义,也正在引起人们日益广泛的兴趣。     

蓖麻蚕血淋巴中的凝集素

凝集素是一类蛋白质(或糖蛋白),它们具有凝集细胞的活性,并能够与某种(或某些)糖类专一结合。凝集素现已被广泛地用作研究细胞表面糖蛋白、糖脂的糖链结构以及研究伴随细胞生长和恶性转化时,细胞表面含糖物质变化的探针。另外,凝集素在生物体内的生理意义,也正在引起人们日益广泛的兴趣。     

多天线糖链对运铁蛋白与受体结合及内吞的研究

应用系列凝集素柱层析法（伴刀豆球蛋白,小扁豆凝集素,欧曼陀罗凝集素）分别从正常人血清及孕妇血清中提纯含有二天线无核心岩藻糖复杂型糖链的运铁蛋白及含有多天线无核心岩藻糖复杂型糖链的运铁蛋白。与正常的含有二天线糖链的运铁蛋白相比,含有多天线糖链的运铁蛋白与ＳＭＭＣ－７７２１细胞膜表面的运铁蛋白受体的亲和力下降,但最大结合量不变,此外,其在内吞过程中于细胞膜上的停留时间延长。结果表明糖链结构改变对运铁蛋白的功能有影响。     

基于凝集素芯片的不同转移潜能肝癌细胞膜蛋白糖谱比较

评估采用凝集素芯片技术寻找肝癌细胞表面侵袭和转移相关特征性糖谱的适用性．首先选取一对模式细胞株(中华仓鼠卵巢细胞CHO和其N-乙酰葡萄糖胺转移酶Ⅰ缺陷株Lec1)验证凝集素芯片系统的可靠性．然后通过凝集素芯片比较正常肝细胞L02、非转移肝癌细胞Hep3B、高转移肝癌细胞HCCLM3的细胞表面糖谱,同时采用细胞凝集素组织化学的方法验证芯片结果．细胞Hep3B和L02相比,对凝集素PHA-L、ConA、AAL、MPL的亲和作用增强而对凝集素WGA的亲和作用减弱,提示在肝癌细胞表面可能出现了增多的复杂寡糖分支、高甘露糖、末端岩藻糖、黏蛋白T抗原和减少的N-乙酰葡萄糖胺和/或多价唾液酸结构．细胞HCCLM3和Hep3B相比,对凝集素LCA、MAL-Ⅰ、MAL-Ⅱ、WGA、PHA-E的亲和作用增强而对凝集素RCA-I的亲和作用减弱,提示在高转移肝癌细胞HCCLM3的表面可能出现了增多的核心岩藻糖、唾液酸(主要是α2-3链接方式)、N-乙酰葡萄糖胺、平分型GlcNAc结构以及减少的末端β1-4链接半乳糖结构．细胞凝集素组织化学的结果支持芯片结果．研究证明,凝集素芯片技术是解析生物学进程中糖谱改变的适用工具．     

黄瓜苋科凝集素基因的表达分析与逆境调控

凝集素是一类具有特异性糖结合活性的蛋白质,通常具有1个或多个非催化的糖结合结构域。凝集素在植物对病原菌的防御反应中发挥重要作用。由于其抗细菌、真菌、病毒和昆虫等的活性,凝集素在农业和生物医药领域都具有很大的应用潜力。作为最小的凝集素家族之一,苋科凝集素的研究较少。该文通过对重要经济作物黄瓜(Cucumis sativu...     

植物糖苷水解酶的研究

糖苷水解酶和外源凝集素是研究复合糖类结构和功能常用的两种工具。它们都广泛存在于植物界。我们曾检测和分离了几种植物来源的外源凝集素。本文则对这些材料中几种糖苷水解酶的存在情况作了初步测定,并对糖苷水解酶的相对活性和外源凝集素的糖结合专一性之间是否存在相关性进行了探讨。     

转铁蛋白糖链结构对其受体亲和性的影响

用伴刀豆凝集素,小扁豆凝集素和欧曼陀罗凝集素亲和层析法,分别从正常人血清转铁蛋白和孕妇血清Ｔｆ中获得二天线糖链Ｔｆ和多天线糖链的Ｔｆ,用于研究其对胎盘中纯化得到的转铁蛋白受体和亲和性。经Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图结果发现,表明含多天线糖链的Ｔｆ对受体的亲和性比二天线糖链的Ｔｆ降低１倍,而ＴｆＲ的结合位点数不变。     

应用凝集素芯片检测肝癌细胞膜表面糖链变化

利用凝集素糖链特异亲和原理构建对细胞膜表面糖链进行即时检测的凝集素芯片体系,检测肝癌发生过程中细胞膜糖链的变化.从H22细胞系、正常小鼠和肝癌模型鼠肝组织中提取细胞进行荧光标记,激光扫描仪检测凝集素位点捕获的细胞,根据凝集素特异亲和性确定细胞膜表面糖表达谱,显微镜下观察捕获细胞的形态.对凝集素芯片捕获细胞的最佳条件进行探讨,用甘露糖抑制试验、流式细胞仪和不同血型红细胞验证了凝集素捕获细胞的特异性.结果显示:正常和肝癌小鼠肝细胞膜表面糖链存在较大差异,正常组只有PSA、DSL、STL、NPL凝集素位点捕获到细胞,实验组只有LTL和DBA位点没有捕获到细胞,提示小鼠肝癌组织细胞膜表面糖链显著增加,细胞膜上唾液酸、乙酰葡萄糖、乙酰半乳糖、甘露糖和半乳糖糖链表达增加,这些糖链及其相关糖蛋白可能在肝癌的发生和发展中起一定作用.该凝集素芯片有较好的稳定性和特异性,可以对细胞膜表面糖链进行动态、即时、通量的检测,为研究细胞膜表面聚糖在细胞发育和癌变等过程中的变化提供了一个技术平台.     

酪氨酸的不同化学修饰对黄精凝集素生物学活性的影响

凝集素作为一类非免疫原的糖结合蛋白,在与细胞的识别和结合中介导了一系列事件的发生,如促淋巴细胞有丝分裂、对肿瘤细胞的特异凝集、抑制病原微生物的生长等[1].凝集素的特性主要归因于其特异的糖结合活性,而特殊氨基酸对它保持这种结合活性是必需的.故确定这些特异的氨基酸是研究凝集素结构与功能关系的基础.化学修饰可以鉴别哪些氨基酸位于功能区[2].黄精凝集素(Polyg-onatumcyrtonemaHua.lectin,PCL)是具有多种生物学活性的糖蛋白,二硫键、巯基、色氨酸、金属离子并不影响其兔红细胞凝集活性[3].本文报道用不同试剂修饰酪氨酸,以研究…     

内源凝集素与细胞分化和细胞恶化

动物细胞中的凝集素叫内源凝集素,介导蛋白和糖的相互作用,是细胞-细胞识别、细胞粘附和细胞分化中的重要因素。在胚胎形成和器官发育过程中内源凝集素有发育调节作用。近年来又发现内源凝集素和细胞恶化、肿瘤恶性程度以及肿瘤转移都有关,是个值得研究的问题。     

哺乳类C型凝集素超级家族

C型凝集素超级家族根据其糖识别域(CRD)的一级结构分为蛋白聚糖、Ⅱ型跨膜受体、胶原凝素、选凝素、自然杀伤细胞受体及多CRDⅠ型跨膜受体等6个家族. 每一家族的成员具有同源的氨基酸序列、相同的总体分子结构及类似的生物学功能.从CRD的一级结构至三级结构水平确定了C型凝集素选择性糖识别的分子基础.     

蛇毒C-型凝集素研究进展

蛇毒中含有丰富的非酶活性C－型凝集素蛋白,根据其结构及功能的差异,该类蛋白可分为Ca^2 依赖的有糖基识别活性的C－型真凝集素及无糖基识别活性的C－型凝集素样蛋白。C－型真凝集素的结构相似度高,而功能却较为单一,具有特异性糖结合活性;C－型凝集样蛋白的结构变异度大,活性亦具有多样性。后者能通过特异性的蛋白质－蛋白质相互作用而作用于血液凝固系统及血小板,从而发挥抗凝或促凝的生理功能。     

植物凝集素的超级家族

凝集素是一类专一、可逆地和糖类结合的蛋白质,迄今已经分离纯化并测定了氨基酸序列的凝集素已有不少,一些凝集素以及它们与配体糖相互结合的复合物的高级结构也已经给出,许多工作已深入到基因水平．就目前已有的知识,说明植物凝集素是一个庞大的蛋白质家族．