ARDRA联合RAPD对不动杆菌基因型鉴定的研究

收集多重耐药的不动杆菌10株,以标准参照株作对照,采用扩增核糖体DNA限制性酶切(ARDRA)DNA指纹技术联合随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对其基因亚型进行分析;以非加权组间平均法(UPG-MA)进行聚类分析。该法可以有效地鉴定不动杆菌基因亚型;并从10株不动杆菌中鉴定出1株琼氏不动杆菌及9株鲍曼不动杆菌。ARDRA联合RAPD基因指纹分型技术有良好的互补性,可准确鉴定不动杆菌基因型。     

RAPD方法对甲型溶血性链球菌分型的探讨

甲型溶血性链球菌常居于人类的口腔、＿L呼吸道等部位,为人体的重要条件致病菌。本文应用随机引物PCR或称RAPD法,对甲型溶血性链球菌进行比较,分析该菌RAPD扩增产物的多态性,以判断各菌株间DNA差异和亲缘关系。作者随机设计f17bP和10加的2条引物,用RAPD方法分析了30株甲型溶血性链球菌及5株肺炎链球菌DNAs用17hP引物对30株未卜本地区3所医院临床标本分离的甲型溶血性链球菌DNA进行扩增,共出现了12个DNA片段的条带,分别命名A、B、C……L,各菌株间的主要条带具有较强的相似性。根据A、J2条带分布特征可将30株菌区分为…     

雌雄异株葡萄的性别鉴定研究

通过扫描电镜观察花粉的形态;分析叶片超氧化物歧化酶同工酶(SOD);RAPD分析基因组DNA多态性,来鉴别葡萄的性别。结果表明：葡萄雌雄株的花粉形态存在着较大的差异;在本实验条件下葡萄雌雄株叶片SOD同工酶谱带一致;一些引物的RAPD产物间存在着多态性,在葡萄雌雄株的基因组DNA序列中存在着碱基排列顺序的差异。实验指出,花粉形态和基因组DNA的多态性分析是进行性别鉴定的有效方法。     

谭清苏铁性别相关的RAPD标记研究

以谭清苏铁(Cycas tanqingii D.Y.Wang)雌雄植株半年生羽叶为材料,用优化的CTAB法分别提取其全基因组DNA,进行RAPD单因子梯度实验和正交实验以优化扩增条件。应用160个RAPD随机引物检测基因组DNA,雌雄植株均扩增出1450多条带,其中引物S0465扩增出与谭清苏铁雌株高度相关的RAPD标记,其大小约为500bp,该标记与雄株没有关联。     

仙客来(Cyclamen persicum Mill.)的种质资源RAPD分析

利用RAPD技术对20个现今栽培的名优仙客来品种的分类和亲缘关系进行研究,从100个随机引物中筛选出18个用于PCR反应,共在153个位点上扩增出条带,平均每个引物扩增位点8.5个,多态性位点144个,占总带数的94.1%。这种多肽性可以进行品种的鉴定,聚类分析将各品种材料分为4个类群。提出仙客来除目前的观赏性状分类以外,还应具有更科学的以遗传基础为基准的分类方法。也从分子水平揭示了目前栽培的仙客来品种的遗传基础的狭窄性。对RAPD技术在仙客来育种的进一步应用也作了相应的探讨。     

随机扩增多态性DNA技术对结核分支杆菌菌株鉴别及其耐药相关性分析

用引物G1和L1扩增的16S-23SrDNA间隔区作为模板DNA,再用引物AP50进行随机扩增多态性DNA（Random Amplified PolymorphicDNA,RAPD)分棉线AP50扩增出的各菌株DNA片段,用1.2%的琼脂糖凝胶电泳EB染色,可获得1或2个大小不同的DNA片段（390-1031bp)。各株间差异明显,结果表明,不同菌株有不同的DNA多态性,药物敏感株与耐药株之间多态性差异明显,耐药株中耐药谱相似或相同的菌株间其多态性也相似,RAPD有助于简便,快速,有效地了解菌株间的克隆相关性及耐药性传播。     

仙客来的组织培养与快速繁殖

带香味鲜红颜色的仙客来在中国深受喜爱,尤其是带香味的仙客来变异株很难遇到,针对这一特点进行了仙客来的组培为大量繁殖带香味的仙客来提供了可能。另外嫩叶启动为今后更好地进行仙客来变异株的组培提供了依据。仙客来不仅有香味变异还有重瓣变异及花色变异,本次研究的只是有香味变异的组培技术。介绍了组培方法及管理注意事项。     

香菇空间诱变突变体的分子生物学鉴定研究

香菇Cr04菌株经空间诱变后从中筛选出了农艺性状明显改善的突变菌株Cr04DZ。本研究用RAPD和AFLP技术对Cr04DZ与其地面对照菌株Cr04进行了DNA指纹分析,找出了它们之间的DNA多态性,从而从分子水平上证实了香菇经空间诱变后遗传物质发生了变化。此外,还比较了AFLP与RAPD检测香菇DNA多态性的效率,优化了对食用菌进行RAPD与AFLP分析的反应条件。通过对Cr04DZ及其对照株Cr04的RAPD及AFLP分析,筛选出了突变体的3个RAPD及29个AFLP多态性产物,已完成了3个AFLP产物的克隆。     

香菇空间诱变突变体的分子生物学鉴定研究*

香菇Cr04菌株经空间诱变后从中筛选出了农艺性状明显改善的突变菌株Cr04DZ。本研究用RAPD和AFLP技术对Cr04DZ与其地面对照菌株Cr04进行了DNA指纹分析,找出了它们之间的DNA多态性,从而从分子水平上证实了香菇经空间诱变后遗传物质发生了变化。此外,还比较了AFLP与RAPD检测香菇DNA多态性的效率,优化了对食用菌进行RAPD与AFLP分析的反应条件。通过对Cr04DZ及其对照株Cr04的RAPD及AFLP分析,筛选出了突变体的3个RAPD及29个AFLP多态性产物,已完成了3个AFLP产物的克隆。     

大麻性别的RAPD和SCAR分子标记

利用随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术获得与大麻性别连锁的分子标记,将10株雄性大麻或10株雌性麻的单个DNA样品等量混合分别组成雄性或雌性DNA池（DNApool),以提供具有相同遗传背景的雄,雄性DNA样品。每个随机引物分别用三个不同的循环程序进行PCR扩增,在30个随机引物中,用引物S401扩增得到一条约2．5kb雄性多态性片段,对该片段进行了克隆和序列分析 ,并根据序列分析结果将上述RAPD分子标记转化为重复性和特异性更好的SCAR（Sequence characterized amplified regions)分子标记。     

应用RAPD技术鉴别微生态菌种

目的：建立应用RAPD技术鉴别微生态菌种的方法,提高菌种鉴别水平。方法：应用RAPD（随机扩增多态性）方法,选用5条随机引物,利用PCR方法,对3株长双歧杆菌,3株嗜酸乳杆菌,3株粪肠球菌进行基因组DNA指纹图谱分析。结果：发现不同菌株扩增的DNA片段的大小、数量是有差异的。结论：此方法具有可重复性,方便、快速和准确的优势,可用于微生态制剂生产用菌株的鉴别。     

采用RAPD分析臭鼻克雷伯菌临床菌株的基因型

臭鼻克雷伯菌是重要的条件致病菌 ,常引起老人及婴幼儿重症护理病房的交叉感染及爆发流行 ,对其进行流行病学监测有重要的医学意义。用随机引物聚合酶链式反应 (RAPD)对 37株臭鼻克雷伯菌临床菌株基因组DNA进行分型 ,分析扩增产物的指纹图谱。实验结果表明 ,37株臭鼻克雷伯菌RAPD后可出现不同的指纹图谱 ,根据特异泳带C ,J ,F ,Q的有无 ,可将其分 7型 (I～VII)。RAPD可用于检测臭鼻克雷伯菌基因组DNA的异质性 ,是医院内感染分子流行病学研究的好方法。     

缢蛏基因组DNA的提取及其效果分析

应用酚/氯仿抽提法提取缢蛏基因组DNA,并以所提取的基因组DNA为材料进行酶切反应及RAPD分析。结果显示,用酚/仿提取法提取的缢蛏基因组DNA质量高、稳定性好,酶切效果明显,RAPD扩增条带清晰,能满足DNA的酶切、PCR和RAPD等分子生物学实验对于模板DNA质量高的要求。     

大麻性别的RAPD和SCAR分子标记

利用随机扩增多态性DNA(randomamplifiedpolymorphicDNA,RAPD)技术获得与大麻性别连锁的分子标记.将10株雄性大麻或10株雌性大麻的单个DNA样品等量混合分别组成雄性或雌性DNA池(DNApool),以提供具有相同遗传背景的雌、雄性DNA样品.每个随机引物分别用三个不同的循环程序进行PCR扩增.在30个随机引物中,用引物401扩增得到一条约2.5kb雄性多态性片段.对该片段进行了克隆和序列分析,并根据序列分析结果将上述RAPD分子标记转化为重复性和特异性更好的SCAR(sequencecharacterizedamplifiedregions)分子标记.     

应用RAPD技术鉴定地霉的实验研究

目的探讨RAPD技术在快速鉴定地霉中应用。方法用E.Z.N.A.yeastDNAkit提取地霉菌基因组DNA,采用随机引物AP3(5'-TCGTAGCCAA-3')、ATG(5'-ATGGATCGGC-3')、RP2(5'-AAGGATCAGA-3')、OPA-10(5'-GTGATCGCAG-3')对临床上致病性白地霉、林生地霉皮损株和血液株的基因组DNA进行扩增,对各病原菌的DNA指纹的特征进行分析。结果成功提取了地霉的基因组DNA,其纯度和浓度均能满足PCR反应的要求。利用4种引物对基因组DNA进行扩增,不同种真菌的DNA显示不同的DNA带型,分离自不同感染部位的同种不同株真菌的DNA显示的主要DNA带型基本一致。结论采用E.Z.N.A.yeastDNAkit提取的地霉基因组DNA可以用于PCR反应。RAPD法鉴定地霉菌简单、快速、特异,可用于临床诊断。     

鲍曼不动杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型的研究

目的 利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对鲍曼不动杆菌进行基因分型建立DNA指纹图谱,调查该菌在各临床科室的流行情况,并将其与药敏谱进行比较.方法 随机收集中南大学湘雅二医院2007年9月到2008年9月分离出的86株鲍曼不动杆菌,采用WHO推荐的K-B法对鲍曼不动杆菌进行药物敏感试验,建立药敏谱,同时利用随机扩增多态性DNA法(RAPD)技术进行基因分型,建立DNA指纹图谱,对二者进行比较,然后结合药敏谱和指纹图谱分析各临床科室鲍曼不动杆菌的感染情况.结果 药物敏感试验将86株鲍曼不动杆菌分为47型,RAPD技术将其分为14型,其中A、F、D、B和L型为5种优势型,其菌株数分别为22、15、11、9和7株.本院ICU,老年病科,神经内科,呼吸内科,神经外科鲍曼不动杆菌检出率较高.结论 RAPD分型方法优于药敏分型,其在流行病学研究上更能证实菌株的相关性,在早期发现和预防感染暴发流行中起重要作用.     

随机扩增多态性DNA分析院内感染的铜绿假单胞菌

目的 运用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型技术监测铜绿假单胞菌(PA)的医院感染情况,了解耐药表型与RAPD基因型关系,为确定院内交叉感染发生及院感控制提供依据.方法 对10例ICU患者连续多次采样分离出的48株PA进行RAPD基因分型和药物敏感性试验.结果 48株PA共分出9个基因型.6例患者为单一RAPD型PA菌株感染,4例患者检出2种RAPD 型,有3组患者分别检出同型RAPD.耐药性最高的是环丙沙星(75%),其次是左氧氟沙星(73%),耐药性最低的为美洛培南(31%).结论 耐药表型与RAPD基因型之间不存在相关性;RAPD分型快速简单,对于流行病学调查确定院内交叉感染或流行具有重要意义.     

小麦农家品种红麦(京2747)主效抗条锈病基因的RAPD标记

小麦农家品种红麦(京2747)可抗中国小麦条锈菌多个生理小种。遗传分析表明,该品种对于小麦条锈菌条中19号生理小种的抗性由1对显性基因控制。本研究采用铭贤169×红麦的F2分离群体建立抗、感DNA池,用RAPD方法进行DNA多态性分析。共筛选236个10碱基随机引物,其中引物S1167所扩增出的1条约245 bp的多态性DNA片段只出现在抗病DNA池和红麦中,而不出现在感病DNA池和感病品种铭贤169中。经用201株杂交F2植株对多态性DNA片段S1167245与目的基因的遗传连锁性进行分析,在164株抗病单株中有156株可稳定扩增出该特异DNA片段,而在37株感病单株中则有34株不能扩增出该特异DNA片段,经统计共有11株发生了交换,标记S1167245与目的抗病基因间的遗传距离为6.1cM。本研究得到的RAPD标记S1167245表现稳定、重复性强,可用于小麦抗锈育种中的标记辅助选择,促进红麦的抗条锈基因的利用。     

玉米弯孢叶斑病菌的形态学分类与RAPD分析

对16个供试弯孢分离株根据其分生孢子的形态进行分类,其中12个为新月弯孢(Curvularia luna-ta),其余4个是画眉草弯孢(C.eragrostidis)。对这些分离株基因组DNA进行RAPD分析发现,一些分属于两种不同弯孢菌的分离株间比同种弯孢的分离株间具有更近的遗传距离,即具有更近的亲缘关系。因此,根据弯孢菌的形态分类和利用RAPD标记的分类结果存在不一致现象。     

番木瓜两性基因的RAPD标记

应用混合分离群体分析法,在205个10碱基随机引物中,寻找番木瓜两性基因（M2）的RAPD标记,发现两个多态性RAPD条带：OPQ－07 1800和OPE－06 1050。它们仅能在两性DNA池中扩增到,而不能在雌性DNA池中扩增到,用上述两引物检测了210株番木瓜单株DNA,结果表明,OPQ－07 1800和OPE－061050与M2基因紧密连锁,它们位于M2基因的两侧,其遗传距离分别为4．5和1．9cM。