满族新生儿血红蛋白F中G_γ／A_γ比值测定及其异常者γ－珠蛋白基因图谱分析

以聚丙烯酰胺凝胶电泳方法测定了３３１例辽宁满族新生儿脐带血血红蛋白Ｆ中Ｇγ／Ａγ比值。结果显示：高Ｇγ（＞８０％）者４例,占１．２１％,其基因频率（ｆ）为０．００６０４,低Ｇγ（３０－４８％）者６例,占１．８１％,其基因频率为０．００９０６,其余正常,Ｇγ平均值为６５．２３±６．３８％。未发现ＡγＴ链。对其中八例异常者（４例高Ｇγ值,４例低Ｇγ值）的染色体ＤＮＡ进行了基因图谱分析,确定４例高Ｇγ值者基因型有两种：Ｇγ－Ｇγ／Ｇγ－Ａγ二例,Ｇγ－ＡＧγ－Ａγ／Ｇγ－Ａγ二例;４例低Ｇγ值者基因型有二种,分别为：Ａγ－Ａγ／Ｇγ－Ａγ二例和－ＧＡγ／Ｇγ－Ａγ二例。其中Ａγ－Ａγ基因型在中国人群中未见报道过。     

壮族新生儿胎儿血红蛋白中G_γ与A_γ比值测定及其异常者基因图谱分析

本文叙述聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定449例广西壮族新生儿脐带血中Gγ/Aγ比值,其中部分采用HPLC方法进行比较分析。结果显示低Gγ值(20—48％)和高Gγ值(81—85％)比例相同,占2.45％。对其中两例低Gγ值和两例高Gγ值者的杂色体DNA进行基因图谱分析,确定其基因型分别为-GAγ-/-Gγ-Aγ-,-Gγ-AGγ-Aγ-/-Gγ-Aγ-。     

新疆汉、回、维吾尔、哈萨克族新生儿HbF中~Gγ／~Aγ、~Aγ~I／~Aγ~T比值测定及两例异常者的γ基因图谱分析

作者用高效液相层析（ＨＰＬＣ）法测定了汉、回、维吾尔（维）、哈萨克（哈）族新生儿胎儿血红蛋白（ＨｂＦ）中~Ｇγ／~Ａγ、~Ａγ~Ｉ／~Ａγ~Ｔ比值,共３７２例,其中汉族和回族各１０２例、维族９９例、哈族６９例。％~Ｇγ（~Ｇγ／~Ａγ）均值：汉、回、维、哈族分别为６６．８３％、６８．３３％、７０．４４％和６９．７０％。低~Ｇγ者（＜５０％）４例：其中回族３例、哈族１例。高~Ｇγ者（＞８０％）２５例：汉和哈族各５例、回族４例,维族１１例。发现~Ａγ~Ｔ杂合子９９例分别为：汉２１例、回２３例、维２６例、哈族２９例。４个民族各发现１例~Ａγ~Ｔ纯合子。％~Ａγ~Ｉ（~Ａγ~Ｉ／~Ａγ~Ｔ）均值：汉５６．８３％、回５５．５８％、维５０．９４％、哈５４．６８％。~Ａγ~Ｔ基因频率依次为０．１１３、０．１２３、０．１４１及０．２２５。两例比值异常者（１例维族高~Ｇγ８５．４２％、~Ａγ~Ｔ杂合体。１例回族低~Ｇγ４３．４％,~Ａγ~Ｉ纯合体）经γ基因图谱分析,确定高~Ｇγ值者γ珠蛋白基因型为－~Ｇγ－~（ＡＧ）γ－~Ａγ~Ｔ（~Ａγ~Ｉ）－／－~Ｇγ－~Ａγ~Ｉ,（~Ａγ~Ｔ）－;低~Ｇγ值者为－~（ＧＡ）γ~Ｉ－／－~Ｇγ－~Ａγ~Ｉ－。     

新疆蒙古族、锡伯族新生儿HbF中~Gγ/~Aγ、~Aγ~I/~Aγ~T比值测定及基因图谱分析

用HPLC法测定新疆蒙古族78例、锡伯族60例新生儿胎儿血红蛋白（HbF）中Gγ／Aγ以及AγI／AγI比值。％Gγ均值为：蒙古族73.99％,锡伯族74.59％。％GγI均值分别为蒙古族56.04％和锡伯族64.33％。在蒙古族中发现AγT纯合体4例、杂合作12例;锡伯族中发现AγT杂合体6例。蒙古族中AγT基因频率（ρAγT）为0.128,锡伯族为0.05     

牛γ-干扰素在重组杆状病毒中的表达及其抗病毒活性的测定

研究利用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建含有牛γ-干扰素(Bovine interferon-γ,BoIFN-γ)完整开放阅读框的供体质粒pFastBacTM1-BoIFN-γ,转化DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭质粒rBacmid-BoIFN-γ,转染sf9昆虫细胞救获表达BoIFN-γ的重组杆状病毒rBac-BoIFN-γ。采用抗BoIFN-γ单克隆抗体作为一抗进行间接免疫荧光(IFA)及间接ELISA检测,表明BoIFN-γ在重组杆状病毒rBac-BoIFN-γ感染的sf9昆虫细胞中获得正确表达。利用VSV*GFP-MDBK细胞系统测定rBoIFN-γ抗病毒活性,重组杆状病毒表达重组BoIFN-γ(rBoIFN-γ)能有效抑制水疱性口炎病毒(VSV)在牛肾细胞(MDBK)上的复制,rBac-BoIFN-γ感染sf9昆虫细胞上清抗病毒活性为2×105IU/mL,而且其抗病毒活性可以被鼠抗原核表达重组BoIFN-γ免疫血清阻断。结果表明:rBoIFN-γ在重组杆状病毒rBac-BoIFN-γ感染的sf9昆虫细胞中获得良好表达,并具有高效抗病毒活性。     

猪γ-干扰素在重组杆状病毒中的表达及其抗病毒活性的测定

研究利用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建含有猪γ-干扰素(porcine interferon-γ,PoIFN-γ)完整开放阅读框的供体质粒pFastBacTM1-PoIFN-γ,转化DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭质粒rBacmid-PoIFN-γ,转染sf9昆虫细胞救获表达PoIFN-γ的重组杆状病毒rBac-PoIFN-γ。以抗PoIFN-γ单克隆抗体为一抗进行Western blot、间接免疫荧光(IFA)及间接ELISA检测,结果表明PoIFN-γ在重组杆状病毒rBac-PoIFN-γ感染的昆虫细胞中获得正确表达。抗病毒活性试验显示,重组杆状病毒表达rPoIFN-γ能有效抑制水疱性口炎病毒(VSV)在猪肾细胞系(PK-15)的复制,rBac-PoIFN-γ感染昆虫细胞培养上清抗病毒活性为2×104抑制单位(IU)/mL,其抗病毒活性可以被鼠抗原核表达重组PoIFN-γ免疫血清有效阻断。结果表明rPoIFN-γ在重组杆状病毒rBac-PoIFN-γ在感染昆虫细胞获得有效表达,并具有高效抗病毒活性。     

微生物来源的γ内酰胺酶研究进展

γ-内酰胺酶属于酰胺酶,其中的(+)γ-内酰胺酶能够高效率的动力学拆分外消旋体γ-内酰胺,获得光学纯的(-)γ-内酰胺。光学纯的(-)γ-内酰胺是制备抗病毒药物碳环核苷化合物的重要手性中间体。目前报道共有7个来源于微生物的γ-内酰胺酶,其中来源于Aureoacterium sp.的(-)γ-内酰胺酶的晶体结构获得了解析。根据晶体结构推测的(-)γ-内酰胺酶的催化机理与α/β水解酶超家族的催化机理是类似的。但是,目前还没有(+)γ-内酰胺酶的晶体结构模型的数据及机理的描述。γ-内酰胺酶的研究方向主要包括γ-内酰胺酶的蛋白质工程改造,对不同对映体选择性的γ-内酰胺酶的催化机理的阐述,以及γ-内酰胺酶在生物体内的功能研究。     

虹鳟Fc受体FcγR的α和γ亚基基因的克隆及表达分析

Fc受体(FcR)是一种表达在免疫细胞表面的受体分子, 由多亚基构成, 通过与免疫球蛋白(Ig)的Fc段结合引起包括炎症因子释放和吞噬作用等体液和细胞免疫反应。研究采用RACE技术首次克隆得到了虹鳟FcγR的α亚基基因(FcγRα)和γ亚基基因(FcRγ)的cDNA序列, 采用生物信息学软件对FcγRα和FcRγ的序列进行了特征分析, 实时荧光定量PCR检测了其在不同组织和细胞亚群中以及在Poly (I鲶C)和LPS刺激后头肾中的表达。结果显示:FcγRα的cDNA全长1677 bp, 开放阅读框为954 bp, 编码317个氨基酸; FcγRα由信号肽和2个Ig样结构域构成, 但没有跨膜区和胞内区。FcRγ亚基存在2种形式, 分别命名为FcRγ1和FcRγ2(包含FcRγ2a和FcRγ2b两个剪接异构体), 它们均由信号肽、跨膜区和胞内的免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)构成。氨基酸序列相似性分析表明虹鳟FcγRα与斑点叉尾鮰FcRI相同率最高(30%), 虹鳟FcRγ1和FcRγ2a/2b与哺乳动物FcRγ相同率最高可达40%。组织表达显示FcγRα、FcRγ1和FcRγ2a/2b在头肾、脾脏和血液中表达较高; 细胞亚群表达显示FcγRα、FcRγ1和FcRγ2a/2b在髓样细胞群中表达最高; LPS和Poly (I鲶C)刺激后,FcγRα、FcRγ1和FcRγ2a/2b在头肾中的表达显著上调, 这表明FcγR在机体抗细菌和抗病毒免疫中可能发挥重要作用。     

新疆蒙古族、锡伯族新生儿HbF中Gγ/Aγ、AγI/AγT比值测定及基因图谱分析

用HPLC法测定新疆蒙古族78例、锡伯族60例新生儿胎儿血红蛋白(HbF)中Gγ/Aγ以及AγI/AγT比值。%Gγ均值为:蒙古族73.99% ,锡伯族74.59%。%AγI均值分别为蒙古族56.04%和锡伯族64.33%。在蒙古族中发现AγT纯合体4例、杂合体12例;锡伯族中发现AγT杂合体6例。蒙古族中AγT基因频率(fAγT)为0.128,锡伯族为0.05。 Abstract: Gγ/Aγ、AγI/Aγ Ratios of fetal hemoglobin(HbF) in 138 cases of newborns of Megnol (n=78)and Sibo(n=60)ethnic groups in Urumuqi,Xinjiang were determined by HPLC.The means of % Gγ of Mongol and sibo ethnic groups were 73.99% and 7459% respectively.12 Aγ/T cases of heterozygotes in Mongol,6 in Sibo and 4 cases of AγT homozygotes in Mongol were found.The frequencies of AγT gene were 0.128 in Mongol and 0.05 in Sibo respectively.The means of AγT of Mongol and Sibo ethnic groups were 56.04% and 64.33% respectively.     

磷脂酶C-γ2在鼠成纤维细胞株克隆形成中的作用

通过对敲除磷脂酶C-γ1基因的细胞株及其转染磷脂酶C-γ2基因后克隆形成能力的统计学分析揭示出磷脂酶C-γ2有显著的促克隆形成作用,磷脂酶C-γ1作用微小,但与磷脂酶C-γ2有协同作用,提示磷脂酶C-γ2与γ1在功能上有一定的交互性、冗余性,但不可相互取代.