食蟹猴疟原虫B株感染对斯氏按蚊寿命的影响

本试验比较了食蟹猴疟原虫Ｂ株感染的（感染组）,吸正常猴血的（对照组）及未吸血的斯氏按蚊存活情况。三组总平均寿命分别为２０．７６±９．３５ｄ、２５．５１±９．００ｄ和２２．０４±６．９７ｄ。感染组比对照组总平均寿命缩短４．７５ｄ;对照组比未吸血组平均延长３．４７ｄ;两组均差异非常显著（Ｐ＜０．０１）。结果提示,感染食蟹猴疟原虫的和未吸血的斯氏按蚊寿命均受到影响。     

斯氏按蚊生长发育中唾液腺配子体激活因子的变化

为探讨斯氏按蚊生长发育过程中唾液腺抽提物配子体激活因子的消长,应用体外雄配子体出丝观察方法比较羽化后未吸血及吸血组雌性斯氏按蚊唾液腺抽提物中配子体激活因子对柏氏疟原虫雄配子体出丝诱导活性的动态变化。羽化后未吸血组按蚊唾液腺配子体激活因子活性与按蚊生长、发育呈同步变化。羽化后当日至羽化后第6 d,吸血组按蚊唾液腺抽提物的GAF活性变化与未吸血组相似,吸血后该组GAF活性下降,羽化后14 d恢复到吸血前水平。吸血后斯氏按蚊唾液腺配子体激活因子活性的降低与蚊卵发育可能相关。     

一种丹参高质量总RNA的提取方法

高质量RNA的获得是开展丹参分子生物学研究的基础。采用异硫氰酸胍(Guanidine Thiocyanate,GT)法、尿素法、CTAB法、苯酚法和热硼酸改良法等五种方法．以丹参组织培养的幼苗为材料,进行丹参RNA的分离试验,发现所采用的几种方法获得的RNA都有不同程度的降解。分析可能是由于丹参中含有大量的多糖以及各种次生代谢成分造成的。在分析现有结果的基础上对GT法进行了改良,在第二次沉淀前附加低浓度乙醇(10％～20％)沉淀20min对于高质量总RNA的获得效果较好。琼脂糖凝胶电泳检测改良后的GT法无论对于组织培养中幼嫩的根、茎、叶还是大田两年生的丹参根、茎、叶和种子均具有很好的RNA分离效果。mRNA电泳检测发现所得mRNA集中分布在500b～3kb之间且质量较高,完全可以满足丹参各种RNA相关的分子生物学实验要求,为丹参RT—PCR、Northern杂交等分子生物学实验提供了良好的基础。     

石斛总RNA提取方法的研究

采用TRIZOL法、异硫氰酸胍法、Tris-硼酸法和改良的RNA提取方法提取石斛的总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的品质。研究结果表明:改良的RNA提取方法提取的RNA具有28S rRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解。OD260nm/OD280nm接近2.0,具有较高的纯度。其它三种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象。将改良的RNA提取方法提取的RNA逆转录成cDNA,经RAPD扩增,出现清晰的条带,进一步证明改良的RNA提取方法提取的RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。     

一种提取葡萄芽中总RNA的方法

以葡萄品种‘Perletts‘‘(Vitis vinifera)冬芽为材料,研究了提取葡萄芽总RNA的方法,同时指出提取RNA时的注意事项。该方法具有可靠性高,易于大量制备,所提取的RNA质量高等优点。     

富含多糖草莓果实总RNA提取方法的改进

以草莓果实为模式实验材料,将Chomczynski提出的常规RNA提取方法与Kenneth等提出的改进方法相结合,并做了进一步改进,建立了一种简单实用的从富舍多糖的植物材料中提取总RNA的方法。先利用冷的丙酮去除色素类物质,再利用乙二醇丁醚去除多糖,从而有效克服了从富含色素和多糖娄物质的植物材料中提取RNA的困难;获取的RNA样品在纯度和浓度上都可以满足PCR及Northern杂交等分子生物学实验的要求。     

一种快速的胚胎组织总RNA的提取方法

简要介绍一种改进的提取人体器官组织总RNA的方法,该方法具有费用低,快速简便,重复性好的优点,提取的RNA无DNA等污染物,完全能满足基因表达研究的需要。     

福尔马林保存的动物标本基因组DNA的提取方法

从在福尔马林长期保存的动物标本中提取基因组DNA用于分子生物学研究一直是一个未得到彻底解决的难题。本文提出了一种从浸泡在福尔马林的大仓鼠肝脏和日本鳗鲡肌肉标本中提取基因组DNA的新方法。取浸泡于福尔马林中的大仓鼠肝脏或日本鳗2鲡肌肉适量,用PBS溶液冲洗,放在灭菌的吸水纸上将其揩干,于超净工作台内用无菌剪刀将材料剪成50mg的小块,放入PBS液浸泡12－24h;然后转入70％的乙醇中处理12－24h。依次换入下列梯度酒精中处理：80％乙醇,2h,重复一次;90％乙醇,2h,重复一次;95％乙醇,2h,重复一次;100％乙醇,1h,重复一次。然后将材料放入1／2倍的PBS液中浸泡12h。其间更换一次溶液。提取方法参考Sambroock等人（1989）,加蛋白K瓣量按标准量（100μg/mlL),在50－56℃温浴3－6h处理过程中,不断轻摇混匀,视消化效果可以重复加入标准量的1／2倍蛋白酶K进行消化,直至将材料完全消化为止;酚氯仿抽提最后一次的上清液移入透析袋中透析;沉淀DNA时,在－20℃下20min效果为宜。该方法主要特点在于对标本进行预处理,在保证不使DNA进一步了解的前提下,首先去除标本中所含的福尔马林溶液的成分,然后利用改进的酚氯仿抽提法提取该类标本的基因组DNA,再进一步用透析法纯化DNA。研究结果表明,采用该方法提取和纯化被试标本基因组DNA能较好地应用于RAPD,微卫星位点的PCR扩增、Suthern和斑点杂交。     

斯氏按蚊肽聚糖识别蛋白基因PGRP-LC1的克隆及功能分析

天生免疫系统是昆虫抵御外界病原入侵的主要方式。目前研究发现, Imd信号通路与按蚊感染柏氏疟原虫Plasmodium berghei的强度密切相关, 而PGRP-LC1是Imd信号通路最上游的受体之一。为了研究斯氏按蚊Anopheles stephensi肽聚糖识别蛋白PGRP-LC1, 采用RT-PCR并结合RACE技术克隆斯氏按蚊PGRP-LC1基因, 通过序列比较分析, 得到两条cDNA序列, 其开放阅读框分别为1 365 bp和1 290 bp, 3′非编码区为320 bp, 5′非编码区为240 bp。将两条cDNA分别命名为AsPGRP-LC1a（GenBank注册号 GU214232）和AsPGRP-LC1b（GenBank注册号GU214233）。AsPGRP-LC1a编码454个氨基酸, 分子量约为49.07 kDa;AsPGRP-LC1b编码429个氨基酸, 分子量约为46.3 kDa。AsPGRP-LC1b比AsPGRP-LC1a少一个长度为75 bp的外显子, 该外显子在冈比亚按蚊Anopheles gambiae PGRP-LC1基因的某些可变剪切形式中也有发现。分别将两个斯氏按蚊PGRP-LC1基因在冈比亚按蚊细胞系L3-5和斯氏按蚊细胞系MSQ43中过量表达, 通过双荧光素酶检测系统检测抗菌肽的表达情况, 结果显示克隆得到的PGRP-LC1基因在两种细胞系中均能够启动Imd信号通路, 为进一步研究斯氏按蚊的Imd信号通路提供了依据。     

从荞麦中提取总RNA的有效方法

介绍了一种简单快速的从荞麦中提取总RNA的方法。经SDS、KAc和异丙醇等常规试剂提取高纯度的荞麦RNA,对产物进行琼脂糖凝胶电泳分析表明,其28S RNA与18S RNA的比值约为2：1,紫外吸收值A260/A290为1.91-2.06,产率为69.2-87.5μg RNA/g植物材料。用该法提取的总RNA可满足RT-PCR和cDNA文库构建等的需要,是一种高效的荞麦RNA提取法。     

斯氏按蚊泛素羧端水解酶对约氏疟原虫感染应答性表达增高(英文)

分离和研究疟疾感染蚊的差异表达基因 ,对阐明媒介与疟原虫之间相互作用及其分子机制尤为重要。利用已建立的斯氏按蚊感染约氏疟原虫的差减cDNA库的进行表达筛选 ,发现表达增高基因中有一个编码与黑腹果蝇泛素羧端水解酶高度同源蛋白的序列。相似性比较显示该编码序列在氨基酸水平与已知的冈比亚按蚊EST序列对应部位的同源性为 89% ,与果蝇和人类的同源性均为 63%。模拟Northern印迹的表达动态分析提示 ,感染后至少 1～ 7天内该基因在蚊体内的表达显著增高 ,与疟原虫发育动合子穿越蚊中肠壁和子孢子从卵囊向蚊眼涎腺移行等关键阶段相一致。目前对有关蚊天然免疫系统激活的泛素途径所知甚少 ,现有结果提示该基因与疟原虫感染相关 ,它的克隆和表达分析有可能推测其在疟原虫感染中所起的作用     

家蝇总RNA的提了方法及其改进

本文采取异硫氰酸胍：氯仿一步法,成功地从富含RNase的家蝇腹部提取出完整的总RNA,并针对家蝇腹部富含蛋白酶的特点,对一步法的某些细节做了适当的改进,检测结果表明,用这种方法提取的RNA质量高,可以用于地进一步的分子生物学实验。     

从生物材料对细胞总RNA量的影响初探其分子生物相容性

目的:从细胞总RNA量的变化观察生物材料有无毒性。方法:将生物材料浸提液作用于成纤维细胞,用异硫氰酸胍一步法抽提细胞总RNA,经RNA电泳和检测和计算其RNA浓度,观察细胞总RNA量的变化。结果:不同的生物材料可引起细胞总RNA量的变化,尤其某种有毒的硅橡胶使细胞总RNA量被严重抑制。结论:观测细胞总RNA量并结合细胞毒性试验及其他分子生物学试验可作为综合评价生物材料分子生物相容性的参考。     

几种濒危植物及其近缘类群总DNA的提取与鉴定

用低ｐＨ 介质,高盐沉淀蛋白质方法成功地从银杉（Ｃａｔｈａｙａ ａｒｇｙｒｏｐｈｙｌｌａ Ｃｈｕｎ ｅｔＫｕａｎｇ）、矮牡丹（Ｐａｅｏｎｉａ ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａ ｖａｒ． ｓｐｏｎｔａｎｅａ）、南川升麻（Ｃｉｍ ｉｃｉｆｕｇａ ｎａｎｃｈｕａｎｅｎｓｉｓＨｓｉａｏ）、裂叶沙参（Ａｄｅｎｏｐｈｏｒａ ｌｏｂｏｐｈｙｌｌａ）的同属种泡沙参（Ａ． ｐｏｔａｎｉｎｉｉ）等植物中提取和部分纯化了细胞总ＤＮＡ,并对其产率、质量和纯度作了鉴定。此方法的关键是用了一个低ｐＨ提取介质,它能有效防止组织破碎及沉淀大量材料时的电离化作用及酚化合物的进一步氧化。所得ＤＮＡ 不需经氯化铯梯度离心或柱层析,直接可用于限制性片断长度多态性（ＲＦＬＰ）及随机扩增的ＤＮＡ多态性（ＲＡＰＤ）等分子水平的遗传标记。为检测濒危植物的遗传多样性提供了一套迅速、简便和可靠的技术方案     

快速提取、纯化叶绿体4.5SrRNA的方法

我们采用植物叶与热缓冲液、苯酚直接混合(约65℃)匀浆,离心抽提和乙醇沉淀后,得到植物叶总RNA。经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、纯化,即可得到叶绿体4.5S rRNA,此法不仅操作简单,而且得率高。 同时,经过对同一植物的不同组织或不同细胞组分,如根、细胞质、叶绿体和叶绿体核糖体小分子RNA的提取与鉴定,以简便的方法证明了4.5S rRNA是叶绿体核糖体成份,也证明了我们所采用的提取、纯化4.5SrRNA方法的可靠性。     

白榆生活精细胞分离和保存的研究

研究了白榆（ＵｌｍｕｓｐｕｍｉｌａＬ．）精细胞分离和生活力保存的方法。将吸湿后的白榆花粉撒播于蔗糖琼脂培养基上萌发。采用低渗法从花粉管中分离出精细胞。通过蔗糖密度梯度离心纯化和收集精细胞。收集后的精细胞密度为２．０×１０６个／ｍＬ,比较了牛血清白蛋白（ＢＳＡ）和聚乙烯吡咯酮（ＰＶＰ）两种保护剂对生活精细胞分离和保存的影响。在加入ＢＳＡ的蔗糖溶液中,精细胞的生活力在室温条件下可保存５４ｈ以上,而在０～４℃条件下则可保存１２ｄ以上。ＰＶＰ不利于生活精细胞的分离和保存。     

担子菌多糖及羊脾RNA对肿瘤的抑制与有关组织中cAMP含量关系的探讨

本文讨论了对带瘤小鼠注射香菇多糖、松口蘑多糖和羊脾RNA后,活体内有关组织中cAMP含量与抑瘤率之间的关系。 结果表明,上述活性物质不仅增强了机体免疫活性,同时亦促使机体内脾、瘤等组织的cAMP增高,此种增高,与抑瘤率成正相关。     

样本对小麦遗传距离与杂种优势关系的影响

本文以10个小麦品种和按双列杂交配制的45个组合为材料,研究了样本容量和样本的数据结构对遗传距离与杂种优势关系的影响．结果表明：（1）当样本容量较小时,遗传距离与产量杂种优势的关系为不相关;随着样本容量的增加,遗传距离与产量杂种优势的关系有由不相关,到Y=axe～bx(a＞0,b＜0）,Y=ax～be～cx（a、b＞0,c＜0）相关的变化趋势．（2）当样本的数据结构较差时,需较大样本容量,才能真实反映遗传距离与产量杂种优势的关系．     

大肠杆菌RNA聚合酶σ亚基基因的表达及表达产物的分离纯化

将2种表达质拉pEGMD（含rpoD基因）和pETF（含rpoS基因）转化到BL21（DE3）菌株中,培养菌体。破碎细胞,用盐酸抓溶解包含体,经DEAE－纤维素柱层析,SDS－PAGE检测可得纯化σ的蛋白。通过紫外分光光度法测定蛋白浓度,实验表明σ38蛋白的得率为菌体温重的0．27％,σ70蛋白的得率为菌体湿重的0．06％。     

斜面法与橡皮塞法保藏丝状真菌的效果

对利用斜面法和橡皮塞法保藏某些丝状真菌的效果进行了试验,共保藏丝状真菌29属,69种,128株。保藏时间2-17a,通过斜面转接,其存活率达89.8％。存活的菌株仍维持其原有特性。试验结果表明:利用斜面法与橡皮塞法保藏某些丝状真菌是简便可行的。