卵磷脂胆固醇酰基转移酶基因的多态性和突变与动脉粥样硬化关系

卵磷脂胆固醇酰基转移酶(Lecithin cholesterol acyltransferase,LCAT)催化血浆中绝大多数胆固醇的酯化—外周组织胆固醇逆向转运(Reverse cholesterol transportation,RCT)到肝脏进一步分解的关键步骤,同时调节血浆高密度胎蛋白(high density lipoprotein,HDL)等脂蛋白的成熟与代谢。对其基因多态性和突变的研究表明：LCAT在RCT、脂代谢和动脉粥样硬化发生发展中起重要作用,有可能作为预防或治疗动脉粥样硬化的靶基因。     

重组腺相关病毒载体介导的apoA—I和／或LCAT在肌源性细胞中的表达

卵磷脂胆固醇酰基转移酶 (lecithincholesterolacyltransferase,LCAT)是产生血浆中大部分胆固醇酯 (CE)的主要酶 ,并且是胆固醇逆转运 (reversecholesteroltransfer,RCT)中的一个关键因子。将含有人apoA I和 /或LCATcDNA的rAAVAIL/rAAVL表达载体与 pDG质粒经磷酸钙共沉淀法转导入 2 93T细胞中 ,包装为重组腺辅助病毒 (rAAV) ;以Iodixanol密度梯度离心 ,继以肝素亲和层析等方法分离、纯化及浓缩rAAV ;斑点杂交鉴定制备的rAAV颗粒数达 7× 10 14 个 /L(rAAVAIL)和 1× 10 14 个 /L(rAAVL)。以rAAVAIL/rAAVL转染小鼠肌源性细胞C2C12 ,经ELISA、Western印迹和 [3 H] 胆固醇标记底物的放射化学方法结果分别表明 ,apoA I、LCAT在转染细胞中持续 30天表达 ;分化为多核的肌管细胞后 ,仍保持这种表达能力。PCR结果表明 ,目的基因已整合入细胞基因组。以rAAV为载体 ,能有效介导人LCAT、apoA I基因在肌源性细胞中表达 ,并分泌至细胞外     

卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）的基因突变与LCAT缺陷综合征

卵磷脂胆固醇酰基转移酶(1ecithin：cholesterol acyl transferase,LCAT)是体内脂蛋白代谢的关键酶之一,它主要参与HDL的成熟过程和胆固醇逆转运过程。LCAT基因突变导致LCAT缺乏及活性下降,可引起2种疾病：家族性LCAT缺乏征(familiar LCAT deficiency,FLD)和鱼眼病(fish-eyedisease,FED)。目前,对于LCAT的活性及功能已经有了较深入的研究,但对于LCAT的结构(尤其是三维结构)及其基因调控与突变研究的不多,本文除了对人LCAT的结构和功能做基本介绍外,着重阐述LCAT基因表达及其突变方面的研究进展。     

高脂饮食豚鼠高密度脂蛋白代谢的特点

目的研究豚鼠高脂饮食后高密度脂蛋白代谢的特点,并与大鼠进行比较。方法将豚鼠和大鼠分别随机分为正常组（NC）和高脂组（HF）,正常组均给予普通饲料,高脂组给予高脂饲料诱导10周后,测定血清LDL-C、HDL-C水平,HDL3/HDL2比值和LCAT、CETP的表达;采用real-time RT-PCR方法检测肝脏SR-BI表达的变化。结果与正常组相比,豚鼠高脂组血清HDL-C水平显著升高,高密度脂蛋白亚型HDL3/HDL2的比值升高,血清CETP表达均显著增加,血清LCAT表达下降,肝脏SR-BI mRNA表达水平是正常组的2.27倍。而相同高脂饲料条件下,大鼠的上述指标均无明显变化。结论豚鼠摄入高脂饮食后HDL代谢与大鼠有所不同,主要表现为血清HDL-C升高,肝脏SR-BI受体表达增加,高密度脂蛋白亚型组分发生变化,大颗粒HDL2含量相对减少,小颗粒HDL3堆积,其机制与血清CETP、LCAT的变化密切相关。     

北京鸭血清HDL及apo AⅠ在胆固醇代谢中的作用

对纯化的北京鸭脂蛋白进行了电镜观察、梯度凝胶电泳、总胆固醇及卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)活力分布测定等研究,对鸭apo AⅠ的氨基酸组成、序列、亲-疏水性同人及其他动物进行了比较并初步进行了二级结构预测.实验结果进一步证实北京鸭血清胆固醇是由高密度脂蛋白(HDL)携带运输,鸭apo AⅠ在胆固醇代谢中起着重要作用.     

高密度脂蛋白亚组份及其代谢

HDL 亚组份间的代谢转化受许多酶和 Apo 的调节控制。血浆 LPL 活性与 HDL_2的水平呈正相关。LCAT 促进 HDL 对 Ch 的摄取,与 HDL_2特别是Apo E-HDL 的形成有关。Apo E-HDL 对外周组织细胞 Ch 水平的调节有重要作用。     

吖啶酯发光法分析测定组织型纤溶酶原激活剂的研究

本文建立了灵敏度高、能定量测活且成本低廉的吖啶酯(AE)发光分析组织型纤维溶酶原激活剂(t-PA)的方法。该法灵敏度达0.125 IU/ml;在t-PA 0.125～8.0IU/ml范围内,t-PA活力单位对数与其发光计数呈良好的线性关系(r=0.997);批内变异系数为8％(n=8);回收率为86～122％。本法用于测定人黑色素瘤细胞mt-PA、CHO细胞表达的rt-PA,获得与纤维蛋白琼脂板测定法(FAPA)相一致的结果;测定健康人静脉闭塞前后血浆中t-PA活性的变化,显示出明显差别,静脉闭塞后血浆中t-PA活性约为静脉闭塞前的2～3倍。该法对肺癌患者血浆t-PA活性测定结果明显高于正常人,因而具有临床诊断价值。     

遗传性LCAT缺陷症与动脉粥样硬化

卵磷脂：胆固醇酰基转移酶（lecithin：cholesterol acyltransferase,LCAT）参与胆固醇酯的合成并在高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL）的代谢中起重要作用。遗传性LCAT缺陷症是一种以低HDL-胆固醇（HDL-C）为特点的罕见遗传疾病。近年来,LCAT在HDL-C代谢中以及在动脉粥样硬化发生和发展中的作用逐渐被本领域研究者所关注。本文就LCAT缺陷症的遗传学和生化学特点做一综述,重点阐述为何尽管HDL-C水平明显减低,LCAT突变携带者却并未发生早期动脉粥样硬化。     

亚洲玉米螟血淋巴中酚氧化酶的研究

酚氧化酶(Phenoloxidase,简称PO)大量存在于亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)幼虫的血浆中,血细胞中甚少.该酶的活力与幼虫的发育期相关,在蜕皮和化蛹前后活力达高峰.PO可以粘附在酵母菌细胞表面,但未发现具有调理作用.以Sephadex G-200层析,对PO进行了部分纯化,比活力可提高56倍.试虫感染酵母菌后,活体内血浆PO活力即刻下降;体外证明,感染血浆可抑制正常血浆PO活力,以胰蛋白酶和昆布多糖测试以及行耐温实验,表明该抑制物为蛋白质性质.对PO的防卫作用进行了简要的讨论.     

微量法与试管比色法检测ALT的比较

经实验建立了一种用于检测血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量的微量测定法,并与比色法（传统赖氏法)进行了比较。用两种方法检测定值血清、室内质控及样品并比较标准曲线后,结果无显著性差异,同时微量法重复性较好,结果表明微量法测定ALT酶活力可以替代比色法测定血浆中ALT含量,适合大批量血浆ALT含量的快速检测。     

高蛋氨酸饮食对大鼠血管内皮细胞分泌功能的影响

目的:探讨高蛋氨酸饮食对大鼠血管内皮细胞分泌功能的影响。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常饮食对照组(对照组)和高蛋氨酸饮食组(高蛋氨酸组)。对照组喂饲普通饲料,高蛋氨酸组大鼠喂饲含3%蛋氨酸的饲料,共8周。采用高效液相色谱法测定大鼠血浆同型半胱氨酸含量,以MDA、SOD、NO/ET和t-PA/PAI平衡等指标建立研究平台和内皮功能评价体系,同时以扫描电镜观察主动脉弓血管内皮细胞形态。结果:与对照组相比,高蛋氨酸组血浆Hcy含量显著高于对照组,是对照组的2倍以上;血浆MDA和SOD活力显著升高(P<0.05),t-PA/PAI-1和NO/ET比值均显著降低(P<0.05)。扫描电镜显示高蛋氨酸组大鼠内皮细胞呈典型虫蛀样损害,伴有附壁血栓形成和脂质沉积。结论:高蛋氨酸饮食可诱发大鼠高半胱氨酸血症,Hcy可通过氧化应激机制损伤血管内细胞分泌功能,血浆NO/ET和t-PA/PAI-1系统失衡。     

组织型纤溶酶原激活剂的发光分析法及其应用

 本文建立了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)活力的发光固相测定方法。用氨基乙基丁基异鲁米诺(ABEI)标记纤维蛋白原(Fg),在一定条件下,t-PA作用于固相(包被ABEI-Fg),产生纤维蛋白的降解产物。测定可溶性降解产物的发光强度,即能计算t-PA活性。该方法的标准曲线范围对t-PA为0.156IU/mL～40IU/mL。灵敏度可达0.156IU/mL。回收率为98.6％(n=27)。批内批间变异系数分别为6.6％及10.3％。该方法曾用于检测细胞培养液中提取t-PA样品及t-PA基因表达时培养液中t-PA的活性。也曾用于检测从组织中纯化t-PA样品及血浆中t-PA活性的测定。文中讨论了该方法与其它方法优缺点的比较。     

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中的野黄芩苷含量

目的:建立LC-MS/MS的分析方法测定大鼠血浆中的野黄芩苷,研究灯盏生脉胶囊中野黄芩苷在大鼠体内的药动学行为。方法:以噻氯匹定为内标,血浆样品经1%甲酸乙腈沉淀蛋白处理后,用LC-MS/MS法测定血浆中的野黄芩苷浓度。结果:野黄芩苷线性范围为1.31～670.00 ng·mL-1(γ0.999),最低定量浓度为1.31 ng·mL-1,回收率、日内、日间考察均符合生物样品分析要求。实验结果显示,野黄芩苷在大鼠体内出现多峰现象。结论:建立的LC-MS/MS定量分析方法灵敏、准确,可用于大鼠血浆中野黄芩苷的测定及其药代动力学研究。     

缩胆囊素受体拮抗剂对血浆缩胆囊素生物测定的影响

利用生物法测定了102例正常人空腹及进食二个油煎鸡蛋30min后血浆CCK浓度,结果分别为1.4±0.1pmol/L和4.9±0.4pmol/L(X±SE)。血浆CCK浓度不随性别和年龄而变化。本文研究了三种不同类型的CCK受体拮抗剂对CCK生物测定的影响。一组将L364,718(5.0nmol/L),丙谷胺(1.0mmol/L)或Bt_2-cGMP(0.1mmol/L)分别加入含8pmol/LCCK-8的人血浆,用SEP-PAK提取,另一组先提取血浆,于测定前向血浆提取物内加入上述拮抗剂,两组同时测定。结果显示,在有L364,718存在时仍可利用生物法测定血浆CCK浓度,如血中含有丙谷胺或Bt_2-cGMP则无法准确测定。     

木聚糖酶活力测定条件研究

用DNS法测木聚糖酶活力,分析测定条件对测定结果的影响。结果表明,在不同的条件下测定酶活力会得到不同的木聚糖酶活力测定值。其中,酶液用量、酶解反应的时间对测定结果的影响较大,酶液稀释度、DNS显色时间、DNS的用量,对测定结果也有一定的髟响。测定木聚糖酶活力的适宜条件为：酶液量/1％木聚糖液量1/9(V／V);酶解反应时间：10min;DNS用量2—2．5ml;DNS显色时间2—5min。     

次声作用对大鼠血浆SOD、MDA、NO 水平的影响*

目的:通过观察16 Hz/130 dB次声作用大鼠不同时间其血浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平的变化,揭示次声作用对大鼠氧化应激损伤的特点。方法:80只SD大鼠随机分为次声作用1、7、14、21和28 d组及对应的假暴露组,每组8只大鼠。次声暴露组每日定时在次声舱内接受16 Hz/130 dB次声作用2h,连续1、7、14、21和28 d,假暴露组除不施加次声作用外,其在次声舱中放置的时间、次数、采样时间点均和次声暴露组相同。次声暴露后即刻测定大鼠血浆SOD、MDA、NO水平,测得的结果与假暴露组进行比较。结果:与假暴露组相比,大鼠血浆SOD活力在次声作用后显著降低(P<0.05),且随次声作用时间延长,SOD活力逐渐降低;大鼠血浆MDA含量在次声作用后显著升高(P<0.05),且随次声作用时间延长,MDA含量逐渐升高;大鼠血浆NO含量在次声作用7、14 d时显著降低(P<0.05),1、21和28 d时无统计学差异(P>0.05)。结论:次声作用可引起大鼠氧化应激损伤,损伤的程度与次声暴露时间有关。     

S／D处理血浆过程中的脂包膜病毒灭活试验观察

通过有机溶剂/去污剂对血浆中指示病毒VSV灭活的观察评估有机溶剂/去污剂对脂包膜病毒死活的效果。血浆样品与VSV病毒按9:1混合,然后用1％TNBP/1％ Triton X-100在30℃处理4h,测定开始样品中的病毒总量和S/D处理后不同时间取样内的病毒总量。实验中样品内加入1％TNBP/1％ Triton X-10015min后VSV病毒已全部灭活,灭活效果≥6.0log。按所述S/D处理方法可以完全灭活血浆内所有的脂包膜病毒而没有主要血浆蛋白的损失。     

载脂蛋白AI结构与功能研究进展

载脂蛋白AI（apoAI)是高密度脂蛋白（HDL）中主要的蛋白质,它是细胞胆固醇逆向转运（RCT）的特殊重要因素,ApoAI能与磷脂,多种血浆因子及细胞膜受体结合,可以激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）,起着促进细胞内胆固醇的移出,酯化,转移,以及调节HDL代谢的作用。ApoAI在各种HDL亚类中其空间结构有较大差异。这与HDL成熟过程及运载胆固醇等生理功能密切相关。     

五种α─淀粉酶测活方法的比较研究

对常用的五种α─淀粉酶活力测定方法进行了比较。研究了酶的稀释倍数和反应时间等因素对α─淀粉酶活力测定的影响,确定了α─淀粉酶活力测定的最佳条件。通过比较研究,认为Ｙｏｏ改良法是α─淀粉酶活力测定的最佳方法,并确定了各方法不同活力单位之间的相互换算关系。     

高压液相荧光检测法检测血浆同型半胱氨酸

目的:建立高压液相荧光检测法测定血浆中同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)的方法.方法:应用Symmetry ShieldTMRP18色谱柱,0.08 mol/L醋酸钠1%甲醇为流动相,与巯基特异结合的荧光物质SBD-F衍生巯基来检测血浆中的同型半胱氨酸浓度.结果:该法的平均回收率为95.8～100.8%,相对标准差为1.2～2.0%.结论:本检测法方法准确,可用于实验室样品的测定.