猪呼吸道上皮细胞体外分化模型的建立及其应用研究

猪是许多呼吸道病毒感染的天然宿主,其与人类在肺生理学、呼吸道形态学和呼吸道细胞类型以及受体分布都有相似之处。为了解呼吸道病毒感染机制和筛选呼吸系统疾病药物,选择以猪肺组织为原料采用无血清气液界面培养法构建一种猪呼吸道上皮细胞(Porcine airway epithelial cell,PAEC)体外分化模型,然后通过扫描电子显微镜、电生理和免疫组织化学等方法鉴定该模型。采用三质粒共转染法构建重组腺相关病毒rAAV6-GFP(rAAV6-green fluorescent protein,rAAV6-GFP),通过顶端表面感染PAEC模型,探讨AAV6在PAEC模型中基因治疗领域的应用。结果显示分化成熟的PAEC模型为多层上皮结构,顶端表面含有纤毛细胞、黏液分泌细胞和基底细胞。rAAV6-GFP能通过顶端表面感染PAEC,有效地介导外源基因的长期表达。本文建立的猪呼吸道上皮细胞体外分化模型为呼吸道病原体感染和呼吸系统疾病药物筛选和基因疗法等研究奠定了良好的基础。     

加单磷酰类脂A佐剂的呼吸道合胞病毒病毒体疫苗的效力与安全性

<正>在婴儿以及免疫功能低下的成人和老人中,呼吸道合胞病毒感染仍然是一个严重的健康问题,没有有效的可利用的疫苗的原因是由于存在一些障碍:非复制性呼吸道合胞病毒疫苗可引起过度的Th2型应答,增强了疫苗接种者自然感染呼吸道合胞病毒而引起的呼吸系统疾病。作者以前发现含有Toll样受体4配体单磷酰类脂A的重组呼吸道合胞病毒病毒体可加强疫苗诱导的免疫应答,并且使免疫应答倾向于Th1型应答,也就不会引起呼吸系统疾病,由于黏膜免疫接种是诱导呼吸道合胞病毒特     

两种单负链RNA呼吸道病毒——流感病毒和呼吸道合胞病毒感染对粘蛋白1表达调控差异的研究

为进一步了解流感病毒(IFZ)是否像呼吸道合胞病毒(RSV)一样在感染过程中可以上调呼吸道上皮细胞粘蛋白1(MUC1)的表达,进而限制炎症的发展。我们利用qRT-PCR和Western Blot检测两种呼吸道单负链RNA病毒感染人呼吸道上皮细胞系——A549细胞后对MUC1的表达调控。分别利用人喉上皮细胞系——HEp-2细胞系和MDCK细胞系培养并收集RSV和IFZ。相同滴度的两种病毒分别感染A549细胞24h后,分别裂解各组细胞,收集总RNA,应用qRT-PCR检测MUC1mRNA的表达情况;或相同滴度的两种病毒分别感染A549细胞24h和48h后,裂解细胞收集总蛋白,同时收集细胞培养上清,应用Western Blot检测MUC1蛋白的表达情况,应用ELISA检测上清中TNF-α水平。结果显示,虽然两种病毒都能上调TNF-α水平,但只有RSV可以上调呼吸道上皮细胞MUC1表达,并呈剂量效应,而IFZ不能上调呼吸道上皮细胞MUC1的表达。本研究首次探讨两种常见呼吸道单负链RNA病毒感染呼吸道上皮细胞后对MUC1表达调控的差异,初步证实临床上IFZ感染后病情自限性的机制不同于RSV感染,与MUC1的表达上调无关。     

小鼠原代呼吸道上皮细胞分离培养的新方法

现有的呼吸道上皮细胞系大多来源于肿瘤组织或成系时与肿瘤细胞融合,其生物学行为与正常呼吸道上皮细胞差异较大.为更准确反映呼吸道疾病条件下该类细胞的生物学效应,本文对小鼠呼吸道上皮细胞分离的新技术和培养方法进行了探索.利用链霉蛋白酶消化法分离获得小鼠呼吸道上皮细胞,利用特殊的完全培养基和Ⅰ型胶原包被的培养皿进行原代培养.镜...     

呼吸道病毒感染核酸检测技术及其应用进展

急性呼吸道感染是全球范围内人类疾病和死亡的主要原因之一,其绝大部分是由呼吸道病毒所引起的。建立切实有效的实验室诊断技术,对于呼吸道病毒的防御和控制至关重要。以核酸为检测目的的分子诊断法,因其快速、简便、高通量、高灵敏度及高特异性,成为新一代呼吸道病毒检测的金标准。简要综述了呼吸道病毒感染核酸检测技术及其应用进展。     

流感疫苗呼吸道黏膜免疫效应的研究进展

流感病毒通过感染呼吸道黏膜上皮细胞而入侵机体,呼吸道黏膜是机体最先接触大量病毒、细菌等吸入抗原的部位。呼吸道黏膜既可以在黏膜局部又可以引起全身对病原体感染的保护性免疫应答。近年来,随着呼吸道黏膜免疫疫苗的发展,诱导呼吸道黏膜的防御机制得到进一步深入研究。黏膜免疫分子、细胞在其中的作用逐步明确,又为黏膜免疫疫苗的发展奠定了基础。本文将从呼吸道黏膜免疫角度论述流感病毒呼吸道免疫防御机制及其滴鼻疫苗的应用。     

人类偏肺病毒的研究进展

人类偏肺病毒是近几年新发现的一种呼吸道病毒,属副粘病毒科,是引起婴幼儿呼吸道疾病的病毒之一。本文从病毒生物学性状、发病机制、临床意义及其诊断、治疗等方面进行综述．以引起对泫病毒的关注。     

呼吸道合胞病毒——静脉用免疫球蛋白对高危婴儿呼吸道…

呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）是引起婴儿和儿童呼吸道疾病的最常见的病原体之一。尤其在早产婴儿、性心性心脏病患儿以及免疫缺陷的婴儿和儿童中易发生严重怀ＲＳＶ感染。近年来的研究发现,呼吸道合胞病毒－－静脉用免疫球蛋白（ＲＳＶ－ＩＧＩＶ）的使用对ＲＳＶ感染有一定的预防、治疗作用。本文介绍有关这方面的研究进展。     

吸烟对人体呼吸道厌氧菌的影响

目的探究吸烟对人体内的呼吸道微生态的影响。方法采用细菌鉴定及药敏分析系统鉴定健康吸烟者与非吸烟者,患下呼吸道感染吸烟与非吸烟者咽后壁分泌物的细菌密度、细菌数量及种类的改变。结果在健康吸烟者与患有下呼吸道感染患者的呼吸道中,厌氧菌明显升高,其中以韦荣菌和消化链球菌为主。结论吸烟可使人体的呼吸道微生态中细菌密度,细菌数量及种类的改变,易患呼吸系统疾病。     

中药抗病毒性呼吸道感染的研究进展

综述中药在治疗病毒性呼吸道疾病的研究进展,认为中药在治疗病毒性呼吸道疾病的机理是除直接作用于病毒外,调节机体免疫功能是重要的机制。     

胞外ATP在呼吸道中的作用

ATP不但是各种细胞的能量来源,而且更是一种自分泌或旁分泌的胞外信使,参与细胞一系列的生物学效应。ATP从呼吸道上皮细胞中释放,在调节呼吸道表面液体量的平衡、黏膜纤毛清除能力和呼吸道防御功能方面起重要作用,并参与呼吸道疾病及炎症的发生。本文对ATP从呼吸道上皮释放的途径,ATP调节呼吸道上皮离子转运的机制,ATP对呼吸道平滑肌的双重调节作用,以及ATP参与呼吸道疾病和炎症的发生机制等方面予以综述。     

280例呼吸道感染儿童呼吸道病毒病原学检出情况及流行规律分析

目的:了解呼吸道感染儿童呼吸道病毒病原学检出情况及其流行规律,为儿童呼吸道感染的预防、诊断及治疗提供病原学依据。方法:选取2016年1月-2017年12月期间中国人民解放军中部战区总医院收治的280例呼吸道感染患儿为研究对象,分析患儿呼吸道分泌物中呼吸道病毒的检出情况,并分析呼吸道感染儿童呼吸道病毒感染与年龄、季节、疾病类型的关系。结果:280例呼吸道感染患儿中共检出98份阳性标本,阳性率为35.00%,其中有2份标本中检出2种病毒感染,混合感染阳性率为0.71%;在所有病毒类型中,呼吸道合胞病毒(RSV)病毒感染阳性率最高。1岁患儿的病毒感染阳性率最高,与其他年龄段病毒感染阳性率比较差异有统计学意义(P0.05)。呼吸道感染患儿春季、冬季的病毒感染阳性率明显高于夏季、秋季(P0.05)。不同呼吸道感染疾病类型患儿病毒感染阳性率比较差异有统计学意义(P0.05),以喘息性肺炎、毛细支气管炎、肺炎患儿病毒感染阳性率较高。结论:RSV是呼吸道感染儿童呼吸道病毒感染的主要致病病原体,1岁的婴幼儿较易感染,春季、冬季为其高发季节,且以肺炎、毛细支气管炎、喘息性肺炎患儿的病毒感染阳性率较高。     

九项呼吸道感染病原体IgM检测结果分析

目的 探讨新乡市第一人民医院呼吸系统感染患者9种呼吸道病毒的分布情况.方法 回顾性分析该院门诊和住院的呼吸系统感染者中接受病毒抗体检测330例患者的检测结果.结果 入选病例共330例,检测出抗体阳性者193例,阳性检出率为58.48％,其中肺炎支原体(MP) 131例(39.70％),嗜肺军团菌(LP) 89例(26.97％),肺炎衣原体(CPn) 17例(5.15％),Q热立克次体(COX)15例(4.55％),副流感病毒(PIVs)7例(2.12％),呼吸道合胞病毒(RSV)6例(1.82％),甲型流感病毒(INFA)5例(1.52％),乙型流感病毒(INFB)3例(0.91％),腺病毒(ADV)2例(0.61％).结论 MP、LP、CPn分居呼吸道病毒感染的前三位;除CPn以秋季感染明显高于春冬夏季节;其余病毒感染无明显季节、年龄、性别差异.     

婴幼儿呼吸道微生物群演替研究进展

婴幼儿从出生开始正常呼吸道微生物就无时不刻地进行着演替,最终呼吸系统微生物形成动态平衡。婴幼儿时期是呼吸道微生物群演替的重要时期,也是免疫发育的关键时期,容易受外界因素的影响,这些影响因素包括分娩方式、喂养方式、抗生素、季节、疫苗接种等。研究表明婴幼儿时期的呼吸道微生物的组成和发育会影响微生物群的稳定性,从而影响呼吸道感染和过敏性疾病的发生。现对婴幼儿呼吸道微生物群演替及其影响因素,如分娩方式、喂养方式、抗生素使用、季节、疫苗接种等进行综述。     

呼吸道合胞病毒感染的动物模型

正人呼吸道合胞病毒(hRSV)是引起世界范围内婴儿呼吸系统疾病以及住院治疗的主要原因,并导致了成年人中的高发病率和老年群体的额外死亡。当前尚无获批疫苗或者有效的治疗药物。人呼吸道合胞病毒疫苗候选物正在被源源不断地开发出来,它们面向不同人群,防范人呼吸道合胞病毒感染的风险。人呼吸道合胞病毒的动物模型在人呼吸道合胞病毒疫苗候选物的临床前试验中扮演了重要角色,尽管有很多候选物在临床前研究中显示出了效     

潘生相治疗呼吸道合病毒肺炎机制的探讨

ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠５５只，经鼻滴入呼吸道合胞病毒悬液１００μｌ引起小鼠肺炎。用潘生相于不同时间和不同剂量灌胃，共３天。通过病理学和组织化学方法鼠肺和脾脏，发生感染后１天给药级肺泡炎最轻，上皮细胞内病毒颗粒少，浆细胞数量多，脾动脉周围淋巴鞘Ｔ淋巴细胞增殖最轻。     

维生素D缺乏与儿童反复呼吸道感染的关系及机制

呼吸道感染是常见的儿科疾病,有着显著的发病率和死亡率,反复呼吸道感染会严重影响儿童的生活质量和身体健康。维生素D具有一系列与人体健康有关的作用,包括与呼吸道的感染有关。为了分析维生素D与儿童反复呼吸道感染的关系,探讨维生素D影响呼吸道感染的机制,本研究通过临床分析了维生素D缺乏与儿童反复呼吸道发生之间的相关性,通过构建炎症模型,观察了外源维生素D对人气道上皮细胞增殖分化的影响,运用ELISA检测了维生素D对人气道上皮细胞和中性粒细胞释放炎症因子(IL-1β,IL-6和TNF-α)的影响。本结果表明,维生素D缺乏与儿童反复呼吸道感染相关,并且维生素D能促进人气道上皮细胞的增殖分化,但对人气道上皮细胞和中性粒细胞炎症因子的产生无显著影响。     

裸鼠呼吸道合胞病毒感染的动物模型

呼吸道合胞病毒(RSV)是全世界婴幼儿下呼吸道感染的首位病毒病原体,免疫缺陷个体容易发生严重感染,目前尚无理想RSV感染动物模型用于研究。我们用细胞免疫缺陷裸鼠感染RSV,旨在建立理想的动物模型,为RSV感染的防治研究奠定基础。裸鼠滴鼻感染RSV后肺组织分离到病毒,直接免疫荧光检测到支气管肺泡灌洗液RSV抗原阳性,空斑形成实验检测肺组织病毒滴度在感染后第3天达高峰,并持续到第9天仍能检测到病毒。免疫组化检测RSV抗原主要分布在细支气管、毛细支气管和肺泡上皮细胞胞浆内。肺组织病理学显示RSV感染导致裸鼠淋巴细胞浸润为主的肺间质性炎症,电镜分析超微结构可见到细胞内病毒颗粒和气血屏障的破坏。支气管肺泡灌洗液白细胞计数显示裸鼠RSV感染炎症高峰在感染后第9天。裸鼠RSV感染的病毒复制和病理改变特点与人相似,病毒持续高水平复制,是客观而实用的评价抗RSV制剂效果的小鼠模型。     

629例住院儿童临床七种常见呼吸道病毒分布特征

目的了解本地区七种常见呼吸道病毒临床分布特征,旨在为呼吸道病毒的预防、治疗提供帮助。方法随机选取2 001例呼吸科住院患者样本,采用直接免疫荧光法进行呼吸道病毒抗原检测。结果 2 001例患者样本中,共检测出629例阳性病毒,阳性率为31.43%,阳性率前三位的病毒依次为甲型流感病毒(FluA)、呼吸道合胞病毒(RSV)、乙型流感病毒,分别为12.14%、9.90%和3.80%,而副流感病毒II型检出率最低,为0.50%。冬、春季节为呼吸道病毒高发季节,其中一月和二月的检出率高达56.91%和43.15%;而夏、秋季节检出率相对较低,六月的检出率仅为7.00%;1岁年龄组病毒阳性检出率最高,且随年龄增大,阳性检出率明显降低。结论冬、春季节是呼吸道病毒的高发季节;FluA和RSV是呼吸道感染中最常见的病毒;1岁年龄组病毒阳性检出率最高。     

七重呼吸道病毒液相芯片核酸检测技术的初步建立

由呼吸道病毒引起的疾病严重威胁着人类的生命健康，为了建立一种快速高通量的呼吸道病毒核酸检测方法，本研究将多重PCR技术同液相芯片技术结合起来，针对呼吸道合胞病毒A型和B型、乙型流感病毒Victoria系和Yamagata系、甲型流感病毒H1型和H3型以及新冠病毒等常见的七种呼吸道病毒，初步建立了七重呼吸道病毒液相芯片核酸检测技术，评价了方法的特异性、敏感性和重复性，并使用来自安徽省疾控的25份临床急性期样本核酸对方法进行验证。结果显示，建立起的基于液相芯片多重核酸检测方法可特异性识别七种目标呼吸道病毒的靶基因序列，与包括副流感病毒在内的9种非目标呼吸道病毒无交叉反应。对七种病毒核酸进行十倍稀释液相检测，其中H3、BV、RSVB可以检出10²拷贝/μL,BY、RSVA和SARS-CoV-2可以检出10³拷贝/μL，对H1的检测限为10⁴拷贝/μL。25份样本核酸检测结果与实际相符。结果表明，本研究建立的七重呼吸道病毒液相芯片核酸检测技术具有特异性强、敏感性高、稳定性好等特点，可用于临床样本的快速检测，为呼吸道类传染病的液相...