牛胎儿成纤维细胞的分离与体外培养

分别用胶原酶Ⅲ和胰蛋白酶成功地分离了牛胎儿成纤维细胞,并对其进行了体外培养,同时探讨了两种酶消化分离牛胎儿组织的时间对牛胎儿成纤维细胞原代培养的影响。用组织块直接培养也成功得到了牛胎儿成纤维细胞,并探讨了不同组织块大小对牛胎儿成纤维细胞原代培养的影响。通过绘制生长曲线,可以研究牛胎儿成纤维细胞增殖规律;通过制备牛胎儿成纤维细胞的细胞染色体发现,经过传代(12代)、冷冻保存、解冻,牛胎儿成纤维细胞染色体数目不变。     

水牛皮肤成纤维细胞的分离与体外培养

探讨水牛成纤维细胞的分离与传代培养方法。组织块培养法培养的成纤维细胞原代生长较慢,需12天左右方可汇合形成单层,而酶消化法培养的成纤维细胞原代生长相对生长快,仅需8天便可汇合形成单层。两种方法传代细胞的生长速度相似,仅需4-5天就可汇合形成单层。通过体细胞的核型分析发现,成纤维细胞在传代培养过程中的核型变化不大,66．67％～81．67％的细胞具有正常的二倍体核型,各代之间无显著差异。结果表明,水牛成纤维细胞均能稳定地进行传代培养。     

牛成纤维细胞的分离与体外培养

研究了牛胎儿和成年牛皮肤组织成纤维细胞的分离、培养、纯化方法和生长特征。通过组织块贴壁培养和分离单细胞接种培养均能获得原代牛皮肤细胞。用2.5 g/L胰蛋白酶+1mmol/L EDTA和5 g/L胶原酶I联合消化牛皮肤组织较2.5 g/L胰蛋白酶+1 mmol/L EDTA消化,得到更多的单个细胞,两者之间差异极显著(P<0.01),但其死细胞比率却有较大升高;2.5 g/L胰蛋白酶+1 mmol/L EDTA消化牛胎儿组织得到的单细胞数显著高于皮肤组织消化后得到的细胞数(P<0.01),死细胞比率也高于同种酶消化的皮肤组织。分离纯化的胎儿和皮肤成纤维细胞的生长曲线都正常且相似。2.5 g/L胰蛋白酶+1 mmol/L EDTA消化贴壁细胞后死细胞率明显高于用0.5g/L胰蛋白酶+0.53 mmol/L EDTA消化的细胞(P<0.05);培养24 h后细胞贴壁率前者要明显低于后者(P<0.05)。用0.5 g/L胰蛋白酶轻度消化混杂生长的成纤维细胞和上皮样细胞,经过反复贴壁传代2～3代,可得到较纯的成纤维细胞。     

水牛胎儿成纤维细胞体外培养体系的初步建立

为探讨适合水牛胎儿成纤维细胞(BFF)的体外培养体系,采用常规组织块法和胰蛋白酶消化法原代培养BFF均获得了较多的成纤维细胞,但后者所得细胞的活力不如前者高,且死细胞也较多;传代或冻存成纤维细胞时用4℃预冷的胰蛋白酶室温下消化所得的细胞比37℃热消化的细胞更圆、更有光泽;跟踪32代的细胞冷冻复苏率均达70%～80%;染色体分析结果显示,二倍体细胞所占比例始终保持在80%～90%之间,各代细胞(5th、10th、15th)之间差异不显著(P>0.05).结果 表明,组织块法原代培养、4℃预冷胰蛋白酶室温消化传代细胞的培养体系比较适合水牛胎儿成纤维细胞的培养.     

体外培养的牛耳成纤维细胞的细胞周期研究

通过细胞体外培养,对牛耳成纤维细胞的周期分布进行了研究。不同代数的细胞在生长至70-85％汇合和血清饥饿72h两种状态的细胞周期分布无显著差异。对于体外培养的第8代细胞,生长至50-60％、70-85％和完全汇合时,细胞周期分布存在显著差异;而培养时间对血清饥饿培养和正常培养至充分汇合时的细胞周期分布无显著影响。结果表明,体外培养代数及培养方法不会明显影响细胞周期的分布,但同代细胞因处于不同生长阶段细胞周期分布会存在显著差异。     

内皮细胞培养中清除成纤维细胞的新方法

在原代细胞培养中很容易混杂成纤维细胞,并且随着传代次数的增加,由于成纤维细胞生长迅速,在培养细胞中所占的比例也日渐增加。本文介绍一种清除成纤维细胞的方法,对各种非成纤维细胞的原代培养有一定参考价值。以往是用0.1％的胶原酶消化法来清除成纤维细胞。但由于胶原酶价格昂贵,故并不     

猪耳皮肤成纤维细胞的培养

本研究以猪耳皮组织为材料,采用胰蛋白酶冷热处理结合法成功地分离和培养了猪耳皮肤成纤维细胞。此方法的细胞存活率相对于胰蛋白酶热处理法较高。传代细胞与原代细胞的形态和生长速度均相似。传代细胞未检测到凋亡现象。细胞已传至15代以上,染色体倍性正常,说明我们所建立的胰蛋白酶冷热处理结合法可以快速有效的分离和培养猪耳皮肤成纤维细胞,并且能稳定的进行传代培养。     

树鼩原代皮肤成纤维细胞的分离培养技术

建立稳定的树鼩(Tupaiabelangeri)皮肤成纤维细胞的体外培养体系,可为有关此类细胞的实验和疾病树鼩细胞模型提供技术支持。取树鼩大腿内侧皮肤用组织块贴壁法和胶原酶Ⅰ消化法分离皮肤细胞,胰蛋白酶差别消化法纯化细胞;用MEM(10%FBS)完全培养基和含低血清生长添加物(LSGS)的培养基培养细胞;免疫荧光和蛋白印迹法鉴定细胞,并测定细胞的生长、冻存和复苏特性。经树鼩皮肤细胞分离效果比较,胶原酶消化法比组织块贴壁法更适合用于树鼩原代皮肤细胞分离;对分离及冻存复苏后细胞生长状况观察比较发现,添加了LSGS的MEM培养基更利于细胞存活、生长;细胞形态观察、免疫荧光和蛋白印迹检测鉴定所分离的细胞为树鼩皮肤成纤维细胞。成功建立了树鼩原代皮肤细胞的分离、纯化方法,并优化了该细胞的培养条件。     

大熊猫皮肤成纤维细胞系的建立和冷冻保存

简要介绍了大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）皮肤成纤维细胞的建系过程和冷冻保存。在研究中,采用200IU／ml的胶原蛋白酶Ⅰ酶在4℃下解离皮肤组织。在DME／Ham’sF12和M199两种培养液中添加100Iu,ml青链霉素、5pg,ml两性霉素B、5pg／ml M-Plasmocin^TM、2mmol／L L-Glu、10μg/ml的胰岛素、40ng/ml EGF和20％（原代）或10％（传代）FBS组成培养液,分别用于细胞的贴壁培养和植块培养,均获得培养成功。用PBS添加0．4％BSA、0．1mol／L蔗糖和10％DMSO组成的冷冻保存液对细胞进行冷冻保存,解冻后获得93．258％的活率,解冻细胞再次培养能正常生长。研究结果表明,大熊猫皮肤成纤维细胞建系和冷冻保存获得成功。     

4℃保存的绵羊皮肤成纤维细胞的培养及冷冻

为了探讨利用死亡珍稀动物皮肤建立成纤维细胞库的方法,本研究采集幼龄绵羊耳廓皮肤,在4℃条件下保存0 h(对照组)、24 h、48 h和72 h后进行原代培养,达到85%汇合后再进行了继代培养或者经冷冻-复苏后继代培养。结果:(1)与对照组相比,各保存组皮肤成纤维细胞经原代培养后达到85%汇合时间滞后(分别为4 d和8d~15 d);(2)各保存组成纤维细胞经4代培养后,与对照组继代培养达到85%汇合时间相同(对照组继代培养第1~4代均为4 d);(3)原代培养成纤维细胞通过冷冻-复苏后经第2代培养,即可在4 d内均达到85%汇合。表明动物死亡后立即采取其耳廓皮肤并在4℃下保存一段时间后,经原代培养和继代培养,或经原代培养、冷冻-复苏和继代培养,可获得具有正常继代能力的成纤维细胞。     

牛视网膜微血管内皮细胞的培养和鉴定

牛视网膜微血管内皮细胞的培养和鉴定ＣＵＬＴＵＲＥＡＮＤＣＨＡＲＡＣＴＥＲＩＺＡＴＩＯＮＯＦＢＯＶＩＮＥＲＥＴＩＮＡＬＣＡＰＩＬＬＡＲＹＥＮＤＯＴＨＥＬＩＡＬＣＥＬＬ关键词内皮细胞微血管视网膜体外培养牛ＫｅｙｗｏｒｄｓＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ,...     

成纤维细胞对体外培养的骨胳肌细胞早期发育的影响

用无血清、无胚胎提取液的培养液培养由鸡胚腿肌制成的细胞悬液,在排除神经因素的条件下,研究成纤维细胞对体外培养的骨胳肌细胞早期发育的影响。实验组的培养液由2份培养过成纤维细胞的 Eagle's(MEM)液(条件培养液)和1份 Eagle's 液组成。对照组的培养液为 Eagle's 液。细胞悬液被稀释成7种密度(1×10~6—1×10~4细胞/ml)。所得结果如下;(1)成纤维细胞作为支架,肌母细胞在其上面分裂和融合。成纤维细胞的条件培养液维持肌细胞的存活,并促进其发育;(2)肌母细胞的融合与细胞密度有关。实验组肌母细胞融合所需的最低细胞密度是3×10~4细胞/ml,即30个细胞/mm~2,而对照组为3×10~5细胞/ml,即300个细胞/mm~2。实验结果提示,肌细胞早期发育可不依赖于神经因素,它能被胚眙肌肉中的成纤维细胞所促进。     

CHARACTERIZATION OF FORCED SUSPENSION CULTURE OF SPONTANEOUSLY TRANSFORMED MOUSE FIBROBLASTS (B-6)

Mouse fibroblasts (B-6) were cultured on agar-coated dishes. After cells grew for 2–3 generations relatively rapidly in suspension, they began to grow very slowly (stationary phase). Electron microscopic studies showed that cells in a stationary phase developed intracellular organella: membranous structures (endoplasmic reticulum and Golgi apparatus) became manifest and the number of mitochondria increased. The specific activities of succinic-cytochrome c reductase and 5′-nucleotidase were three and five times higher, respectively, than those of cells on the dish.     

IN VITRO CULTURE OF EAR SHOOTS OF ZEA MAYS AND THE EFFECT OF KINETIN ON SEX EXPRESSION

Immature ear primordia of maize when cultured on a defined liquid medium grew and differentiated in response to two variables: 1) size of initial explants and 2) concentration of kinetin in the medium. Overall growth of primordia, less than 15 mm at explanting, reached an optimum fresh weight and ear length when kinetin was 10^–6m. Ears less than 10 mm, in the presence of kinetin, produced many male spikelets with well-developed stamens in both upper and lower flowers. Ears greater than 15 mm, at explanting, produced only female flowers regardless of the kinetin concentration. Different proportions of male and female and bisexual flowers were produced depending upon the initial size of inflorescences and the concentration of kinetin.     

不同培养基对牛体外受精胚发育率及抗冻性的影响

采用M199、SOFaa(aa:Amino Acid)和SOF对牛体外受精卵进行发育培养,比较了三种培养条件下的囊胚发育率、孵化率以及这三种条件下培养出来的囊胚的抗冻能力。在M199和SOFaa处理组,囊胚发育率分别为22.6％和29.0％,孵化率分别为 11.3％和8.1％,两者间无显著差异,但均极显著高于SOF处理组(13.6％,0,P<0.01)。三个处理组的囊胚经冷冻解冻后的存活率分别为78.5％、46.4％和17.3％,孵化率分别为41.9％、23.2％和0,三者间存在极显著差异(P < 0.01)。结果表明,不同的培养液不但影响胚胎发育率,同时也影响胚胎的抗冻能力,M199的培养效果优于SOF,氨基酸能明显提高胚胎发育率及抗冻能力。