小麦叶面固氮菌的筛选及应用研究

七十年代初,中国科学院植物研究所在玉米、棉花、水稻、甘薯、高梁、甘蔗上分离到叶面圃氮菌,此后同河北省微生物研究所协作,对棉花、玉米叶面固氮菌的增产效果和作用机制等作了进一步研究。但至今国内尚未见到有关小麦叶面固氮菌的报道,为此我们进行了分离筛选和应用试验。现将初步结果报道如下:     

玉米根系联合固氮菌分离鉴定与应用效果

从河北省农田采集玉米根系样品,经表面消毒后,分离得到固氮酶活性较高(2780—48 80 nmol C2H4·g-1鲜菌体·h-1)的4株细菌m-111、m-112、m-230、m-254。经细胞形态、培养特征、生理生化特性．DNA中G+C克分子含量测定等方面研究认为,这4株菌应归属于克雷伯氏菌属土生克雷伯氏菌(Klebsiella terrigena)。将这四株菌分别培养制成液体菌剂,回接玉米,结果表现出不同程度地促进玉米生长发育,提高单位面积产量,其中m-111、m-230菌株亩增产51．9kg和63．8kg,增产率分别为11．7％和14.4％。经生物学统计,不仅与不接菌玉米相比,而且在接不同菌株间产量的差异也达到极显著标准,是很有应用价值的菌株。     

作物喷施叶面固氮菌剂增产原因分析

喷施叶面固氮菌剂对玉米、棉花等农作物具有相当明显的增产效果。几年来,通过大量试验表明,这种增产作用是稳定的。但从一些现象和初步的测试中看到,其增产原因是不能仅凭固氮作用解释清楚的。因此,我们进一步从生长刺激素、抗菌作用及固氮作用几方面进行了测试分析。结果表明,叶面固氮菌的增产效应,可能是由于这几个因素综合作用的结果。现分述如下。     

谷子根系联合固氮菌分离鉴定及其初步应用

从河北省石家庄地区农田采集谷子根系样品,经表面消毒后,分离得到固氮酶活性较高(1502．9—2893．5 nmoiC2H4/g鲜菌体/h)的四株细菌M-II-1222、M-II-931、M-I-1021、M-I-941。经细胞形态、培养特征,生理生化特性、DNA中G+C克分子含量测定等方面研究,前三株菌应归属克雷伯氏菌属士生克雷伯氏杆菌(Klebsiella serrigena)。将这四株菌分别培制成液体菌剂,回接谷子,结果表明均能促进谷子生长发育,提高单位面积产量5.4-11.4％,经生物学统计差异达到极显著标准。     

沙竹中内生固氮菌的分离及鉴定

沙竹中内生固氮菌的分离及鉴定李久蒂孙捷匡柏健陈仲新（中国科学院植物研究所,北京１０００９３）ＩＳＯＬＡＴＩＯＮＡＮＤＣＨＡＲＡＣＴＥＲＩＺＡＴＩＯＮＯＦＥＮＤＯＰＨＹＴＩＣＤＩＡＺＯＴＲＯＰＨＳＩＮＰＳＡＭＭＯＣＨＬＯＡＭＯＮＧＯＬＩＣＡＬｉＪｉｕ－...     

生物固氮与固氮菌的质粒以及大质粒的分离

将化石资源大量地用于生产肥料,这对它们今后的继续存在是有危险的。生物圈的维持是靠由生物进行的元素循环。由生物进行的固氮量相当大,但它只在一部分植物中起着积极的作用。固氮菌几乎均为原核生物,将其与肠道细菌相比,有关的基础知识还不多,直到最近还不知道有巨大质粒的存在。现在已经知道,在豆科根瘤菌的质粒     

固氮菌菌剂的应用

我们从1972年开始进行花生、大豆根瘤菌剂的应用试验,取得了较好的效果,现分别介绍如下: (一) 花生根瘤菌剂的试验 花生根瘤菌菌剂是用湖北省油料研究所提供的007、009两个菌株,试制了草炭制品13袋,应用15亩。因受旱欠收,但从验收的春胜大队九小队一块试验田的实收产量看,拌菌较对照增长10.39％,通过重复三点取样,每点3—5株考查了经济性状,拌菌花生较     

叶面分离苏云金芽孢杆菌的研究进展

苏云金芽孢杆菌是一种在芽孢形成的同时能形成杀虫晶体蛋白的细菌,广泛存在于土壤、昆虫、贮藏物、仓库尘埃、植被等昆虫接触物上.植物叶片作为Bt分离的重要来源,目前对这方面的研究相对较少,国内刚刚起步.本文就叶面分离Bt的研究成果、叶片采样及分离方法进行阐述.     

长江流域水稻根际芽杆菌属固氮菌株的分离与鉴定

Rice rhizosphere soil samples were colected from 10 sites of 7 provinces in the Yangzi River Valley, and from the soil samples 16 endospore-forming strains with ARA (Acetylene Reduction Activity) were isolated, the nitrogen fixing ability was tested by the method of 15N tracer and the atom 15N% excess are ranged from 0.0297% to 0.4714%. The strains were identified as Bacillus licheniformis, B. subtilis, B. azotoformans, B. cereus, B. pumilus, B. brevis, B. megaterium, B. firmu.     

长江流域水稻根际芽孢杆菌属固氮菌株的分离与鉴定

生物固氮资源的研究、开发和利用有利于发展持续农业,水稻田的氮素肥力比一般旱地高得多,活跃的生物固氮被认为是主要因素之一.苏宝林、崔宗均等系统地研究了我国北方稻区的固氮菌资源,分离鉴定出8属18种共35株固氮菌.在此基础上,我们对长江流域水稻根际异养固氮菌资源进行了系统研究.本文报道芽孢杆菌属(Bacillus)固氮菌株分离与鉴定的结果.     

生物固氮与固氮菌质粒以及大质粒的分离(续)

五、质粒的检测和分离 1、大质粒的处理 采用通常使用于分离肠道细菌中质粒的“清亮裂解物(cleared lysate)法或类似方法从一些根瘤菌(Rhicobium)和兰细菌中获取到一些质粒。然而,它们的功能尚未查明,而且其分子量大都在70Md以下。目前已有可能分离到分子量超过300Md的质粒,而且除根瘤菌外,在固氮菌(Azotobacter)和拜叶林克氏菌(Beijerinckia)亦见到有质     

生物固氮与固氮菌的质粒以及大质粒的分离(续)

四、固氮菌的质粒 1.肺炎克氏杆菌的nif质粒 利用易位子的转位性以及不相容性的P1质粒广泛的寄主范围和自身传递能力,靠活体内的基因操作,已可使nif基因进行克隆繁殖。由于nif在染色体上接近于his(组氨酸),故以his为标记(参见图1)。     

联合固氮菌叶面接种剂的优化及其在玉米叶际的定殖

【背景】联合固氮菌由于不具有宿主专一性,在土壤、叶际中广泛存在,对生态系统氮素供应有着重要贡献,它还可以通过分泌生长激素等间接作用促进植物生长,可作为重要的农业生产菌剂。土壤接种剂由于受土著微生物的竞争和土壤抑菌物质等的影响,接种效果不稳定,难以推广使用。相比于土壤环境,叶际生境相对简单且表面积巨大,进行叶际接种是固氮菌剂推广应用的一个新思路。【目的】优化联合固氮菌菌株W12接种添加剂,制备液体接种剂并研究其在玉米叶际的定殖效果。【方法】对菌株W12进行菌落PCR测序,构建系统发育树并确定分类地位。分别在培养液中添加不同浓度梯度的羧甲基纤维素(Carboxymethyl cellulose,CMC)和甘油(Glycerol,Gly),测量菌株W12生长曲线和固氮酶活性,优化添加剂浓度并制备液体接种剂,对接种剂的有效保存时间进行检测。将接种剂喷洒到玉米叶际,测量其对玉米产量和植株含氮量的影响,并通过低氮培养基进行回收计数。【结果】固氮菌菌株W12的16S r RNA基因序列与变栖克雷伯氏菌(Klebsiella variicola)的相似性高达99%,在培养液中添加CMC和甘油对菌株W12的生长无明显促进和抑制效果,但均提高了固氮酶活性。添加甘油制备的接种剂在盆栽和大田玉米叶面喷施后,在玉米生长末期叶际回收到的W12类似菌分别为4.3×105 CFU/g叶片和1.7×105 CFU/g叶片,显著高于未接种的处理;而且大田玉米籽粒、茎部和叶片的含氮量高于不接种的对照处理。经过90 d贮藏后,4°C保存的接种剂剩余活菌数均高于1.0×108 CFU/m L。【结论】羧甲基纤维素和甘油的添加不仅有利于固氮菌液体接种剂在叶片的附着,并能显著提高联合固氮菌菌株W12的固氮酶活性,低温冷藏可保证液体接种剂的有效活菌数;液体接种剂在玉米叶际喷施后,菌株W12能够成功定殖,并显著提高玉米植株和籽粒含氮量。研究结果为固氮菌叶面接种剂的制备和应用,以及实现农业氮肥减施保产的目标提供了借鉴意义。     

山西省生物研究所内生共生固氮菌分离方法通过鉴定

自1978年以来,山西省生物研究所采用组织培养的方法从沙棘(Hippophae rhamnoides)分得HR104菌株,从伞花胡颓子(Flaeagnus umbellata T.)分得EU131菌株,从翅果油树(Elaeagnusmollis D.)分得EM273     

棕色固氮菌固氮酶复合体的分离提纯及其某些特性

用DEAE-纤维素柱层析及凝胶过滤获得了有活性的棕色固氮菌(Azotobacter vinelandiiOP)固氮酶复合体。聚丙烯酸胺凝胶电泳鉴定复合体的纯度为91％。Mo:Fe克原子含量比为1:20。吸收光谱在420 nm处有一个吸收肩,暴露于空气后,可见光谱区吸光度略有增加,加入Mg ATP后,在310nm处出现吸收肩。圆二色散光谱在360nm处有一负吸收峰,随滴定Mg ATP克分子当量增加,吸收值向负方向递增。328nm处荧光退偏振随 Mg ATP克分子当量增加而递增,两种光谱滴定曲线均在 ATP/复合体充分子比为2时达到饱和。     

褐球固氮菌的简便分离方法及荚膜染色

在多年的实验教学过程中,我们发现了褐球固氮菌(Azotobacterchroococcum)的简便分离方法,用此方法分离的褐球固氮菌进行荚膜染色可以取得良好效果。褐球固氮菌广泛存在于土壤中,可以固定空气中的氮气。在它的细胞壁外面有一层粘液状的物质——荚膜。我们采用阿须贝无氮培养基(甘露醇或蔗糖或葡萄糖10g,磷酸氢二钾0.2g,硫酸镁0.2g,氯化钠0.2g,硫酸钙0.2g,碳酸钙5g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,pH7.0～7.2)来分离褐球固氮菌,因为此培养基中没有氮源,只有固氮菌能够生长。将小铁铲与称量纸灭菌,在花园或花盆中取土,将土壤表面5cm左右的表层土去掉,…