快速制备水稻基因组DNA PCR模板的煮沸法

文章发展了一个采用煮沸法快速制备水稻基因组DNA PCR模板的程序,成功地从水稻基因组扩增到了相应基因。     

快速制备酵母质粒和基因组DNA PCR模板*

发展了一个利用煮沸法快速制备酵母质粒和基因组DNAPCR模板的程序 ,成功地从低拷贝的ARSCEN酵母质粒和酵母基因组扩增到了相应基因。     

快速制备酵母质粒和基因组DNA PCR模板

发展了一个利用煮沸法快速制备酵母质粒和基因组DNA PCR模板的程序,成功地从低拷贝的ARSCEN酵母质粒和酵母基因组扩增到了相应基因。     

利用微波炉快速制备水稻基因组DNA PCR模板

建立了利用微波炉法快速制备水稻基因组DNA PCR模板的程序,成功地从水稻基因组扩增到了相应基因。     

大肠杆菌和酵母PCR模板制备的优化

对快速制备大肠杆菌和酵母基因组DNA PCR模板的方法进行了优化。实验证明加入0.1%Triton X-100和0.1%SDS的煮沸法能够明显提高大肠杆菌基因组模板的扩增效率,加入0.1%SDS的煮沸法在提高酿酒酵母基因组模板的扩增效率方面也有类似效果,但加入0．1％Triton X—100的煮沸法对酿酒酵母基因组模板的扩增仅有较小的作用。     

三种快速制备含重复序列质粒PCR模板的方法

为了探索含重复序列质粒PCR模板的快速简易制备方法,分别利用高速离心法、TE煮沸法和TE/SDS煮沸法处理过夜培养的含重组质粒大肠杆菌菌体,制备模板后进行PCR扩增发现,均能得到比较清晰的目的条带,可以用于含重复序列质粒的初步鉴定。相比较而言,高速离心5 min、TE煮沸3 min、TE/SDS煮沸2.5 min制备的样品PCR扩增后效果较好。这3种方法快速、简便、费用低、无污染,简化了PCR模板制备的过程,为重组质粒大量筛选鉴定的研究奠定了基础。     

利用微波炉快速制备酵母质粒和基因组DNA PCR模板

制备基因组ＤＮＡＰＣＲ模板一般都比较费工费时 ,研究人员尝试用微波炉提取真核生物基因组ＤＮＡ ,然后做ＰＣＲ扩增取得了较好的效果[1 ,2 ] 。本文描述了一个利用微波炉快速制备酵母质粒和基因组ＤＮＡＰＣＲ模板的程序 ,具有良好的重复性。1　材料与方法1.1　材料酿酒酵母菌种 1ｃ163 6ｄａｒｇ11,ｕｒａ 3为比利时ＯｒｉａｎｅＳｏｅｔｅｎｓ馈赠。酵母载体ｐＹＸ13 3从美国康乃尔大学曹维国处获得 ,并由此构建了粗糙脉孢霉ａｒｇ 13ｃＤＮＡ的酵母表达载体ｐＹＸＡ5。培养基为ＳＤ或ＹＰＤ固体培养基。1.2　酵母质粒提取[3]取 1.5ｍｌ…     

大肠杆菌质粒DNA PCR模板的快速制备

在分子遗传学的研究中要频繁地用到ＰＣＲ的方法。本文基于粗糙脉孢霉的方法[1] 发展了快速制备大肠杆菌质粒ＤＮＡＰＣＲ模板的程序 ,具有良好的重复性 ,为分子遗传学研究提供了快速有效的方法。收稿日期 :2 0 0 1 - 1 0 - 2 0 ;修回日期 :2 0 0 1 - 1 1 - 2 1基金项目 :广东省自然科学基金 (Ｎｏ.980 30 3) ;国家自然科学基金 (Ｎｏ .30 0 70 4 2 0 ) ;教育部高等学校骨干教师计划资助项目 (Ｎｏ.2 0 0 0 - 0 61 -31 4 30 1 )作者简介 :罗樨 (1 977- ) ,女 ,硕士 ,从事生物钟研究。图 1　质粒ＤＮＡＰＣＲ扩增结果1 ＤＬ2 0 0 0分子量标…     

水稻PCR扩增模板的快速制备

用碱处理水稻嫩叶,取碱处理水稻叶片浸出液直接用作PCR扩增的模板,扩增结果稳定、准确,与常规提取的DNA扩增效果相比没有显著差异。用此方法制备的模板室温下2周之内、4℃下3周之内、-20℃下4个月以上扩增结果不变。此方法所需试剂均为常规试剂,具有需要材料少、成本低、简便、快捷等优点,尤其适合材料比较宝贵的转基因水稻的预筛选和大样本量的PCR检测,为分子标记技术的实际应用创造了条件。 Abstract:The solution of alkali-treated fresh rice leaves was used directly as the templates of PCR.The amplified results were stable,reliable,and had no difference compared with that amplified with rice total DNA extracted by common method.The stable results can still be obtained based on the templates kept at 25℃ for tow weeks,at 4℃ for three weeks,at -20℃ for over four months.With this technique,less material and only common reagent are required,which is especially adapted to the screening of the precious trangenic rice in advance and large-scale PCR tests.     

一种简便、快速从病毒感染鱼、虾组织中制备PCR模板的方法

以虹彩病毒(iridovirus)感染大黄鱼的脾组织、对虾白斑杆状病毒(whitespotsyndromebaculovirus,WSBV)感染中国对虾的肌肉组织为材料,采用一种简便、快速的方法获得了可满足病毒PCR检测的高质量模板DNA,分别以针对虹彩病毒、WSBV的特异性引物进行PCR扩增,均能有效扩增出预期的条带。与常规DNA病毒模板制备方法相比,具有简便、快速、提取率高、无污染等优点,尤其适用于水产动物病毒PCR检测试剂盒的商品化开发及生产实际应用。     

丝状真菌PCR模板DNA的快速制备方法

以尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)为材料,旨为建立沸水浴获得PCR模板DNA的新方法。】取少量真菌菌丝置于一定体积50 mmol/L Na OH溶液中沸水浴10 min,再加入1/10体积1 mol/L Tris-HCl(p H8.0)缓冲液,12 000 r/min离心后,上清用作PCR的DNA模板。结果显示,该方法扩增效率高,扩增条带清晰,且Taq酶适应性强,适合快速制备丝状真菌的模板DNA。该方法经济、简单、快速、安全高效,可用于丝状真菌转化子的高通量筛选和菌株的快速鉴定。     

一种适于PCR反应的快速提取食用菌基因组DNA的方法

目的:建立一种以食用菌菌丝体和子实体为原材料的快速提取其基因组DNA的方法,从而提高基因组DNA的提取效率,为食用菌分子生物学提供便利.方法:分别以平菇黑平王的菌丝体和子实体为材料,快速提取其基因组DNA,并以此为模板进行ITS序列扩增.结果:采用方法提取的基因组DNA结构完整,无明显拖尾现象,浓度大约为10ng/μl,以此为模板能够获得预期的ITS条带.结论:该方法具有简便、快速、经济、无污染等优点,提取的基因组DNA适用于PCR反应等分子生物学研究,提高了提取效率,可作为高通量的提取方法.     

一种单个胚胎的DNA模板制备方法

建立了一种简单处理单个卵子和早期胚胎制备DNA模板的方法——KOH/DTT-Triton X裂解法,并与TE-蛋白酶K法比较了PCR扩增效率。结果,采用KOH/DTT-Triton X裂解法处理单个卵子或2-细胞胚、8-细胞胚、桑椹胚、囊胚后,作为DNA模板直接进行PCR扩增线粒体DNA片段,3对引物的PCR扩增总成功率为100%（70/70）,而TE-蛋白酶K法处理的单个卵子的PCR扩增总成功率为92.9%（65/70）,二者差异显著（P<0.05）。但两种方法所制备模板的PCR假阳性率均为0。实验设计的KOH/DTT-Triton X裂解法是一种有效的单个早期胚胎的DNA模板制备方法,经一次PCR扩增即能获得清晰的目的DNA条带,能够满足早期胚胎遗传物质检测的需要。     

一个实用的制备EMBL4 DNA 的方法

以往人们通常用氯化铯梯度超速离心法、甘油梯度超速度离心法等方法纯化噬菌体。采用这些方法,虽然可以获得纯净的λ噬菌体颗粒。但需要昂贵的试剂和仪器。操作也冗长繁琐。我们采用并改进了Reddy的方法,首先用DE_(52)纤维素柱层析纯化λ噬菌体颗粒,然后用酚抽提,从提纯的噬菌体中分离DNA,这个方法简单快速,不需要氯化铯梯度超速离心,也不使用SDS、蛋白酶和核酸酶。     

PCR法快速识别Actinobacteria的五种模板制备方法的比较

放线细菌的23S rRNA基因序列具有较好的保守性和相对的可变性,被认为是快速筛选放线细菌的合适部位。能否快速有效地扩增特异性区间,聚合酶链反应(PCR)扩增前的模板制备质量是关键,故比较了基因组DNA作为PCR模板的5种制备方法。旨在寻找准确、快速、简便、经济的放线细菌筛选技术,为普通和极端环境放线细菌资源的研究和开发利用创造条件。     

一种简单、快速提取DNA的方法

随着分子生物学研究的迅速发展,提取ＤＮＡ已成为一项常规实验。用经典方法提取ＤＮＡ［１］,先用蛋白酶Ｋ、ＳＤＳ消化,然后用酚、氯仿抽提,乙醇沉淀,耗时较多,提取液需要多次转移,易引起交叉污染和ＤＮＡ丢失。本文利用硅藻（ｄｉａｔｏｍ）能够特异性吸附核酸的...     

小麦叶片直接用于PCR和RAPD反应的方法

本研究以经过碱处理的小麦叶片直接作为PCR和RAPD反应的模板,并应用于小麦转基因目标性状的跟踪检测、品种多态性分析等方面。该方法具有快速、简便等特点,尤其是在受测群体较大时,此种方法更显得经济有效。 Abstract:In this paper we introduce a new method of PCR and RAPD reaction by using a small quantity of wheat leaf tissue with alkali treatment.It can be used either to detect target gene or to analyze polymorphism of wheat varieties.This method is simple and reliable,especially for a large-scale detection.