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蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)对BAEE的降解 总被引:2,自引:0,他引:2
以苯甲酰-L-精氨酸乙酯(benzoyl-L-arginineethylester,BAEE)为底物,研究了蚯蚓体内纤溶酶原激活剂(plasminogenactivatorfromEiseniafetida,e-PA)的酶学性质.酶促反应的最适pH为8.4,e-PA降解BAEE的Km为1.24±0.16×10-5mol/L,Kcat为13.80±4.02s-1.测定了构成e-PA的大,小亚基分别降解BAEE的Km和Kcat.结果表明,大亚基的Km与全酶的Km相差不多,但比小亚基小约10倍,即对底物的亲和力比小亚基强约一个数量级.大小亚基的Kcat比较接近,分别是全酶的1/6和1/3.研究了8种抑制剂对e-PA降解BAEE活性的影响,其中pepstatin和E-64(一种巯基抑制剂)对酶促反应有激活作用,TPCK,TL-CK,PMSF,chymostatin和leupeptin对其有不同程度的抑制作用,EDTA对e-PA的活性没有影响.对e-PA的BAEE活性和e-PA的纤溶活性之间作了比较. 相似文献
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蚯蚓纤溶酶的分离纯化及性质 总被引:17,自引:0,他引:17
蚯蚓纤溶酶的分离纯化及性质邢宝东殷慎敏茹炳根(北京大学生命科学学院生物化学及分子生物学系,北京100871)关键词蚯蚓;纤溶酶;纤维蛋白收搞日期:1997-01-21;接收日期:1997-03-27。蚯蚓作为中药已有悠久历史,许多中医都把它作为活血药... 相似文献
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蚯蚓纤溶酶的糖成分分析 总被引:5,自引:0,他引:5
以大豆胰蛋白酶抑制剂为配基的亲和层析制备的蚯蚓纤溶酶是一组糖蛋白。通过苯酚一硫酸法测中性糖,3,5一二硝基水扬酸法测还原糖,硅胶G薄层层析法鉴定糖的种类,结果为:蚯蚓纤溶酶主要含有中性己糖,含量为15%左右,TFMS的去糖处理会使蚯蚓纤溶酶酶活丢失. 相似文献
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蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)的部分性质研究 总被引:15,自引:0,他引:15
从赤子爱胜蚓(Eiseniafaetida)中纯化出的一种纤溶酶原激活剂(e-PA)在纤维蛋白平板上可表现出三种活性,分别记为:CFPg,uCFPg和uCF.为更好了解各种活性与e-PA的纤溶能力的关系,考察了在SDS和不同抑制剂存在下各种活性的变化.结果表明,SDS可以增强CFPg活性且使得e-PA变得对一些抑制剂更敏感;leupeptin,chymostatin,pepstatin,apro-tinin,phenylmethylsulfonylfluoride(PMSF)和dithiothreitol(DTT)对uCF没有影响;pep-statin能增强CFPg和uCFPg活性,E-64(一种巯基抑制剂)能增强uCFPg和uCF活性.这些现象说明不能简单将e-PA归结为丝氨酸蛋白酶或巯基蛋白酶.此外又以纤溶酶原为底物,分析了e-PA在体外降解天然蛋白质的肽键特异性,结果表明:e-PA可以切割碱性氨基酸,小的中性氨基酸及Met的羧基端,同时e-PA确能将纤溶酶原切割为纤溶酶;这一结论为e-PA有可能成为新型溶栓药物提供了生化基础. 相似文献
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蚯蚓纤溶酶是近年发现的一种新型的溶解血栓物质,属丝氨酸蛋白酶,不同种属的蚯蚓中均可分离到,具纤溶活性和溶栓活性。有较好的热稳定性,多为单体酶,多数兼有纤溶活性和纤溶酶原激活活性。不同种属的蚯蚓分离的纤溶酶性质上有一定差别。已获得多种纤溶酶的N端序列及部分核酸序列,相互之间及与某些蛋白酶之间有一定的同源性。纤溶酶通过降解目的蛋白的特定位点而起作用 。 相似文献
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夏威环毛蚓纤溶酶的分离纯化及部分性质研究 总被引:6,自引:0,他引:6
以夏威环毛蚓(Pheretima hawayana)为材料,采用磷酸盐缓冲液抽提、(NH4)2SO4分段盐析,离子交换树脂 D290、 Sephadex G-100和 DEAE-sephadex A-50三种连续柱层析方法得到一种在 PAGE上显示单一区带的纤溶酶组份。采用凝胶柱层析和 SDS-PAGE测其分子量为 12 000和 12300,由一条肽链组成。该酶具有强烈的纤溶活力和水解BAEE的活力,能直接作用纤维蛋白和间接激活纤溶酶原。其最适反应温度为45℃,最适反应pH为8.0。该酶水解BAEE的活力可被Na+、K+、Mg2+、Hg2+、金属离子和EDTA、巯基乙醇抑制,Ca+则有激活作用。该酶中性糖含量为5%,氨基酸组成中Arg、Len含量较多. 相似文献
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蚯蚓纤溶酶分子生物学进展 总被引:5,自引:0,他引:5
蚯蚓纤溶酶是近年发现的一种新型的溶解血栓物质,属丝氨酸蛋白酶,不同种属的蚯蚓中均可分离到,具纤溶活性和溶栓活性。有较好的热稳定性,多为单体酶,多数兼有纤溶活性和纤溶酶原激活活性。不同种属的蚯蚓分离的纤溶酶性质上有一定差别。已获得多种纤溶酶的N端序列及部分核酸序列,相互之间及与某些蛋白酶之间有一定的同源性。纤溶酶通过降解目的蛋白的特定位点而起作用。 相似文献
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蛇毒降纤酶的主要药理作用 总被引:39,自引:9,他引:30
蛇毒中 “凝血酶样酶”( Throm binlike Enzym e, T L E) 由中国卫生部定名为降纤酶 ( Defibrase, Df)。类同生理凝血酶 ( Throm bin, Tb) 能降解血浆纤维蛋白原 ( Fibrinogen, Fg), 但只解离 Fg 结构的肽链 A, 而不象生理凝血酶能同时解离肽链 A 和肽链 B; 经 Df降解的 “脱肽链 A 纤维蛋白”是可溶性单体, 不接受血中稳定因子 (第十三因子, ⅩⅢ F) 的催化交联, 易被血中溶纤酶 ( Plasm in, P1) 迅速消溶并被吞噬细胞所消除, 不产生 D I C现象; 蛇毒 Df的直接效果是降低血浆纤维蛋白原在血中的含量, 从而降低血液粘度, 得以疏畅血流, 用于防治血液高粘滞伴发的血管闭塞性疾病; 蛇毒 Df能激发组织溶纤酶原激活物 (t P A) 的释放, 促使溶纤酶原转变为有活性的溶纤酶, 能使纤维蛋白降解产物 ( F D P) 得以消除, 使血栓崩解。蛇毒 Df能阻抑血小板的聚集从而延缓血栓的形成。 相似文献
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蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分序列的测定 总被引:10,自引:0,他引:10
以新鲜蚯蚓为原料,经过保温抽提、乙醇沉淀、DEAE-SepharoseFastFlow离子交换层析、Lysine-Sepharose4B亲和层析以及SDS-PAGE制备电泳等纯化步骤,得到一种纯度达95%以上的蝗蚓纤溶酶,该酶具有强烈的溶解纤维蛋白折作用及蛋白酶活性,平板法测得其比活性为900UK单位/毫克蛋白,TAME法测得其比活性为25000单位/毫克蛋白,酶学性质研究表明其最适反应温度为65 相似文献
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蚯蚓纤溶酶是具有较强溶栓作用的丝氨酸蛋白酶,为研究蚯蚓纤溶酶在溶栓的同时是否对其他血液蛋白有破坏作用,本实验以一些血液功能蛋白为底物,用蚯蚓纤溶酶在体外对其进行水解,采用SDS—PAGE检测水解前后底物成分的变化。结果显示,蚯蚓纤溶酶短时间内能完全水解纤维蛋白和纤维蛋白原,长时间作用下能部分水解牛血清白蛋白和人免疫球蛋白重链,不水解牛血红蛋白、牛血超氧化物歧化酶和牛凝血酶原。表明蚯蚓纤溶酶对血栓成分具有较强的识别和水解能力,而对其他血液蛋白作用微弱,说明蚯蚓纤溶酶作为药物使用时具有较强的溶栓和预防血栓形成的作用,且副作用较小。 相似文献
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蚯蚓纤溶酶的纯化及稳定性研究 总被引:4,自引:0,他引:4
蚯蚓纤溶酶(EPA)抽提液经30% ~70% 饱和度的(NH4)2SO4 盐析、DEAE—纤维素柱层析、Sephadex G-75葡聚糖凝胶过滤等纯化步骤,得到了具有纤溶活性的洗脱峰,置凝胶电泳后,得到四个活性组分,它们经50℃保温6h,活力上升64% ;在2 m ol/L盐酸胍存在时,活力仅保存7.2% ,当其浓度降低时,活力可恢复至90% ;在1% SDS存在时,活力仅保存12.1% ,但当SDS除去时,活力又可恢复。因此,盐酸胍、SDS均为EPA 可逆性抑制剂。另外,EPA 中含有较高的糖链(占总量的45% ),具有良好的抵抗自水解作用。 相似文献
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蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)的分离纯化 总被引:22,自引:3,他引:19
为获得一种高效,低廉的溶栓药物,从赤子爱胜蚓(Eiseniafaetida)体内分离纯化出一种可体外激活纤溶酶原从而间接降解纤维蛋白的酶(e-PA).纯化过程包括:粗品的盐析,离子交换层析,凝胶过滤层析及疏水相互作用层析.该组份是由二个亚基通过疏水相互作用维系在一起的.通过凝胶过滤层析,可测得全酶的分子量为45000;SDS电泳显示大、小亚基的分子量分别是26000与18000;而质谱法测得的大、小亚基的分子量分别为24556.7与15546.6.对大小亚基进行了氨基酸组成分析,结果显示大亚基不含Lys而小亚基不含Cys.测定了大亚基N端25个氨基酸序列:VIGGTNASPGEIPWQLSQQRQSGSW.并与部分已知蛋白质序列进行了比较.e-PA在纤维蛋白平板上表现有三种不同的纤溶活性 相似文献
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抗凝血蛋白质分子的研究现状 总被引:4,自引:0,他引:4
凝血酶抑制剂,纤溶酶原激活剂(t-Pa,u-Pa,SK和SAK等),蚯蚓纤溶酶和蛇毒抗凝血蛋白等是血栓类疾病领域的研究重点,纤溶分子突变体的应用,纤维蛋白水解特异性的增加,溶栓效率的提高以及半衰期的延长等是溶栓研究的方向。 相似文献
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利用生物信息学手段,以期获得蚯蚓纤溶酶F-Ⅰ-0组分的基因。根据从粉正蚓(Lumbricus rubellus)中分离的FⅠ0组分的N端氨基酸序列VVGGSDTTIGQYPHQL,利用DNAMAN软件通过电子克隆方法,从Lumbricidae 的dbEST中获得该组分的核酸序列信息,设计特异引物, 经过RT-PCR,成功地从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)中克隆到一条蚯蚓纤溶酶新基因,命名为EfP-0。EfP-0基因全长678bp, 编码225个氨基酸的成熟肽,属丝氨酸蛋白酶,胰蛋白酶家族,与F-Ⅰ-0组分的氨基酸组成非常接近。BLAST证明,EfP-0与已报道的蚯蚓纤溶酶基因之间的相似性均低于40%,因此为蚯蚓纤溶酶中的一个新基因,GenBank 登录号为DQ836917。构建的pMAL-c2x-EfP-0重组质粒,在大肠杆菌TB1中获得融合蛋白MBP-EfP-0的可溶性表达,表达产物有酪蛋白平板溶解活性。 相似文献
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