玉米体细胞培养中胚状体的发生

在植物细胞和组织培养中,高等植物发生胚状体的现象比较普遍。单子叶植物从花粉小孢子和体细胞形成胚状体的有水稻、小麦、黑麦、玉米、甘蔗、大麦、无芒雀麦、珍珠谷等。我们对玉米雌、雄幼穗进行培养,获得了体细胞胚状体和胚性细胞团,并建立起细胞无性系。现将试验结果报道如下。     

放线菌素D和环己亚胺对伊贝母胚性愈伤组织中胚性细胞团和球形胚发生及大分

伊贝母（F,pallidiflora Schrenk)胚性愈伤组织接种于NAA1．0mg/L 6=BA2.0mg/L的MS培养基上,在培养10天前可产生大量单细胞到多细胞胚性细胞团,培养10至15天,逐渐形成大量球形胚,利用这样一个实验体系,在培养0,1,2,3和4天后加入放线菌素D（AMD,20ug/ml)和环己亚胺（CHM,20ug/ml),继续培养至第6天,分析大分子代谢动态和观察胚性细胞团的形成情况;培养6和10天后加入同样浓度的AMD和CHM,继续培养至第15天,分析大分子代谢动态及观察球形胚形成情况,结果表明：（1）培养0,1,2,3和4天加入AMD的分别抑制胚性细胞团的100％,63％和45％,加入CHM的抑制100％,85％和75％,培养6和10天后加入CHM抑制球形胚的100％和75％;（2）DNA,RNA和蛋白质在胚性细胞团和球形胚形成时出现两个峰值,其中RNA变化剧烈,最早出现峰值,AMD和CHM分别抑制RNA和蛋白质的合成;（3）过氧化物酶同工酶带对胚性细胞团和球形胚形成过程中顺序表达。AMD和CHM分别在转录和转泽水平上对其进行规律性抑制,根据以上结果,本文对伊贝母体细胞胚胎发生的机制进行了初步讨论。     

籼稻花药培养中胚性细胞的利用和继代研究

诱发籼稻花药培养形成胚性细胞,并建立胚性细胞系,通过胚胎发育途径,在两个月内,由8块胚性细胞团经切割培养增殖获得再生绿苗12690株和白化苗若干。继代培养一年的胚性细胞团再生苗率仍高达90％,但畸变率高,移栽不易成活;检查胚性细胞532个,染色体变化呈多样性,但仍可分为12个同源染色体组。     

抗性赤松体胚发生细胞结构观察与增殖条件的优化

为了更有针对性地优化原生抗性赤松体胚发生培养体系,本研究通过体式镜定性观察种室中的合子胚分布、胚性胚柄细胞结构变化,通过Image-Pro Plus软件定量分析胚性细胞团在不同生长调节物质配方下胚头胚柄的比例变化,了解体胚发生的营养需求。结果发现,抗性赤松裂生多胚更易形成胚性细胞团;改变原有培养条件细胞团会出现胚头胚柄分离、胚头细胞颜色加深的反应;使用低浓度的混合生长调节物质配比(0.1 mg·L~(-1)2,4-D+1 mg·L~(-1) NAA+0.5 mg·L~(-1) 6-BA)能够提高体胚增殖速度;表明抗性赤松胚性细胞团增殖速度加快的内在机理为增加胚性细胞团中胚头与胚柄的比例。     

栓皮栎核型及体胚发生的细胞学特性研究

采用常规制片方法对栓皮栎核型、体胚发生过程中胚性愈伤组织细胞染色体进行了分析。结果表明,栓皮栎体细胞染色体数目2n＝24,核型公式K(2n)＝2x=24=20m十4sm,属于“2B”型,染色体组总长18.55 μm。继代8个月的胚性愈伤组织细胞的染色体数目和结构相对稳定,其中二倍体细胞占 97.20%,四倍体细胞占1.87%,单倍体细胞占0.93%。未发现有非整倍体细胞和染色体形态结构变异。子叶期体胚胚轴亚表层起源的分生组织团中有些细胞核呈片状或椭圆形。个别成熟体胚中偶见有3核细胞。     

伊贝母体细胞无性系的建立及其胚状体的发生

本文报道了伊贝母体细胞无性系的建立及其胚状体的发生。已继代培养三年零六个月共30多代的鳞芽愈伤组织,目前仍有分化能力。通过愈伤组织形态细胞学的观察,发现伊贝母体细胞无性系形成小鳞茎的途径有二:一是由特化了的愈伤组织表皮细胞。经多次分裂发育成不定芽而形成小鳞茎;二是由愈伤组织表层或内层特化了的胚性细胞,经多次分裂发育成胚状体而形成小鳞茎。不定芽和胚状体的形态发生是有区别的。     

油茶子叶体细胞胚形成的细胞学观察

以油茶子叶块为外植体,在附加2.0mg·L-1 2,4-D和1.0mg·L-1KT的MS培养基上进行培养,观察诱导产生的体细胞胚性愈伤组织细胞学结构.结果表明:油茶体细胞胚可直接起源于表皮或近表皮的单细胞原胚或者多细胞团.其中,单细胞原胚先分裂形成二细胞原胚,二细胞原胚再进一步分裂后聚集形成多细胞团,最终经过球形胚、梨形胚、心形胚发育形成一个完整的体细胞胚.     

玉米花粉愈伤组织胚状体发生的研究

在玉米花药培养中,从八趟白花药中获得了花粉愈伤组织,在继代培养中能连续发生胚状体并分化成苗。经两年继代24次仍保持全能性。细胞学和组织学研究表明,胚状体的发生过程和合子胚相类似。胚状体发生不同步,因此在同一块愈伤组织上可以见到不同发育阶段的胚状体;从单细胞胚、2—8细胞胚、到多细胞胚和成熟胚。小植株根尖细胞染色体检查表明,绝大多数细胞为单倍性。在长期继代培养下倍性相对稳定。如能建立单倍性胚性细胞无性系,在玉米改良的理论和实践问题的研究中将是有用的。     

离体条件下卡德丽亚兰的形态建成

采用光学显微镜和电子显微镜技术对离体培养条件下卡德丽亚兰原球茎产生及形态建成进行了系统的细胞学观察。结果表明,离体培养条件下卡德丽亚兰原球茎起源于母原球茎表皮、亚表皮或中央薄壁细胞,这些细胞形成胚性细胞后,通过不断的细胞分裂形成胚性细胞团,胚性细胞团保持细胞分裂的同时伴随着胚性细胞的液泡化过程,形成了由上百个薄壁细胞组成的原球茎;原球茎通过芽端分生组织区形成,进一步分化成芽,其下方有输导组织形成。这一过程几乎重演了其合子胚发育及分化的过程。原球茎生长过程中其薄壁细胞通过叶绿体储存大量淀粉粒,而在以后的形态建成中淀粉粒逐渐降解。     

黄瓜胚性细胞悬浮培养及其原生质体的植株再生

黄瓜子叶原生质体来源的胚性愈伤组织,在液体培养中形成胚性悬浮细胞系,已继代两年,仍保持胚胎发生能力,不同的ABA和蔗糖浓度对胚状体的生长发育和同步化有明显影响。1mg/l的ABA和7－9％的蔗糖能显著地减少培养物的愈伤化,并同步地控制胚状体处于球形或球形后期,低浓度的蔗糖（1％）有利于胚状体的早期萌发,继代3－5天的胚性是浮细胞团酶解后,获得大量有活力的原生质体,原生质体在DPDK,液滴或浅层培养,或褐藻酸钠包埋培养中活跃分裂,形成细胞团和球形胚,转至固体培养基上或将包埋培养物直接转入液体振荡培养,胚状体可不断增殖,胚状体在大量元素减半,不加外源激素的MS培养基上发育成小植株。     

黄瓜胚性细胞悬浮培养及其原生质体的植株再生

黄瓜子叶原生质体来源的胚性愈伤组织,在液体培养中形成胚性悬浮细胞系,已继代两年,仍保持胚胎发生能力,不同的ABA和蔗糖浓度对胚状体的生长发育和同步化有明显影响。1mg/l的ABA和7－9％的蔗糖能显著地减少培养物的愈伤化,并同步地控制胚状体处于球形或球形后期,低浓度的蔗糖（1％）有利于胚状体的早期萌发,继代3－5天的胚性是浮细胞团酶解后,获得大量有活力的原生质体,原生质体在DPDK,液滴或浅层培养,或褐藻酸钠包埋培养中活跃分裂,形成细胞团和球形胚,转至固体培养基上或将包埋培养物直接转入液体振荡培养,胚状体可不断增殖,胚状体在大量元素减半,不加外源激素的MS培养基上发育成小植株。     

油松体细胞无性系的建立

以油松（Ｐｉｎｕｓｔａｂｕｌａｅｆｏｒｍｉｓ）种胚为外植体,通过器官发生途径建立体细胞无性系。以ＭＳ为基本培养基,在芽的诱导和增殖培养基中,附加植物激素,以６ＢＡ＋ＫＴ和ＮＡＡ效果最好,两者的配比为５－１０：１,６ＢＡ和ＫＴ的浓度分别均不超过１ｍｇ／Ｌ。同时根据培养物的发育状态交替使用活性炭,则对芽的增殖有明显的促进作用。选择发育状态较幼嫩的刚抽茎的外植体,诱导生根,在１／２ＭＳ＋ＫＴ０．１＋ＩＢＡ０．１＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ的培养基中,生根率达３２．％。体细胞胚胎发生途径建立细胞无性系也已取得成功,筛选出可继代培养的胚性胚柄团无性系,在胚轴和子叶上诱导出成熟的体细胞胚并获得完整小植株。     

石防风细胞悬浮培养中的体细胞胚发生

石防风试管苗的根经2,4-D诱导可形成具有发生体细胞胚潜能的愈伤组织,用愈伤组织制备悬浮细胞。细胞及组织学的观察表明,体细胞胚发生经历了单细胞、丝状体、细胞团、愈伤组织及胚性细胞团的出现及类胚体的各个发育阶段。丝状体可以经过不同的分裂途径发育为细胞团。愈伤组织表面或者内部的某些细胞演变为胚性细胞,它们不断分裂形成了体细胞胚,一个愈伤组织可形成一个或几个体细胞胚。     

白Qian体细胞胚胎发生的细胞组织学和淀粉积累动态的研究

以白Ｑｉａｎ的成熟种胚为外植体,诱导体细胞胚胎发生。整体染色封片和组织切片的观察结果表明,白Ｑｉａｎ体细胞胚起源于胚性愈伤组织的单个细胞。胚性细胞经过一次不均等分裂产生两个细胞,即胚细胞和胚柄细胞。然后依次经过胚性胚柄团、球形胚、心形胚及鱼雷形胚阶段,最后发育成具有子叶的成熟胚。通过ＰＡＳ反应研究后发现,在体细胞胚发育过程中,淀粉粒在胚性胚柄团时期开始积累,至心形胚时期达到积累高峰,且淀粉粒的分布     

植物体细胞胚发生与作物育种

评述了植物体细胞胚发生在作物育种中的研究与应用,内容包含有：胚性细胞系的建立与原生质体培养;体细胞胚的形成与人工种子制作;胚性细胞与遗传转化;胚性细胞系与优良种质保存和体细胞无性系变异与突变体筛选等,并讨论了有关机理。     

福录考体细胞胚胎发生的观察

福录考（ＰｈｌｏｘｄｒｕｍｍｏｎｄｉｉＨｏｏｋ）体细胞胚胎发生的方式有两种：一是由叶外植体具有一定功能的特化细胞脱化为胚性细胞,如叶表皮细胞,维管束鞘及韬皮薄壁细胞均可发生脱分化进行分裂,形成胚性细胞或分细胞团;二是叶外植体先脱分化形成愈伤组织。     

离体培养下大豆体细胞胚胎发生的组织学研究

大豆胚状体可以直接从未成熟的子叶表皮及表皮下面1—3层细胞发生。这些细胞经过脱分化后,首先形成细胞质浓厚、核大的胚的发生细胞,胚发生细胞再分裂形成胚性细胞团,胚性细胞团再继续分裂形成胚状体。胚状体的发育过程和合子胚一样,经过球形、心形,鱼雷期和子叶期等诸阶段发育成小植株。此外,在诱导胚状体发生过程中,还观察到另一值得注意的现象:在未成熟胚的子叶表皮下面1至较深处的数层细胞,也转变成分生状细胞团,这些分生状细胞团呈不规则状,从其起源看,可称它们为内生“胚状体”,这些内生“胚状体”培养至20天,即停止生长发育。     

甘蔗胚性细胞团和愈伤组织某些性质的比较

在培养24天的生长周期中,胚性细胞团的分裂细胞数共出现三次高峰。第一次出现在继代后的第8天,第二次出现在第12天,第三次出现在第18天,其中以第二次高峰期的细胞分裂数量最多。愈伤组织中仅观察到两次高峰,第一次出现在第12天,第二次出现在第18天。细胞分裂数比胚性细胞团少。细胞分裂高峰出现得迟可能愈伤组织比胚性细胞团生长缓慢的一个重要因素。 不同细胞分裂高峰时期胚性细胞团的DNA和蛋白质均比相同时期的愈伤组织含量高,高峰期在第12和第18天,这与内部的DNA和蛋白质含量变化是一致的,这说明胚性细胞团具有较快分裂能力的原因之一。胚性细胞团的过氧化物酶同工酶带也多于愈伤组织,酶带染色较深,表示酶活性高。     

2,4-D诱导的花生体细胞胚发生的组织学研究

花生成熟胚胚叶在佃附加20mg/L 2,4-D的培养基上诱导20d后,转移至无激素培养基MS0继续培养,可获高频体细胞胚发生。组织学观察表明,体细胞胚起源于胚叶上表皮及表皮下数层细胞,这些细胞脱分化形成细胞质浓厚、细胞核大的胚性细胞团,胚性细胞团继续分裂形成体细胞胚。体细胞胚的发育过程经历球形胚、心形胚、鱼雷胚、子叶胚四个时期。     

2，4-D诱导的花生体细胞胚发生的组织学研究

花生成熟胚胚叶在MS附加 2 0mg/L 2 ,4_D的培养基上诱导 2 0d后 ,转移至无激素培养基MS0 继续培养 ,可获高频体细胞胚发生。组织学观察表明 ,体细胞胚起源于胚叶上表皮及表皮下数层细胞 ,这些细胞脱分化形成细胞质浓厚、细胞核大的胚性细胞团 ,胚性细胞团继续分裂形成体细胞胚。体细胞胚的发育过程经历球形胚、心形胚、鱼雷胚、子叶胚四个时期