miRNA的重要调节者Dicer和Drosha与子宫内膜异位症的相关性研究

利用荧光定量PCR和Western blot检测证实,在异位的子宫内膜组织中Dicer和Drosha的表达低于在位子宫内膜组织,随后体外培养在位子宫内膜组织,采用siRNA干扰Dicer和Drosha,发现与干扰对照组相比,子宫内膜细胞的增殖加快而凋亡减少;同时ELISA检测显示转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1, TGF-β1)的表达上调;Western blot检测显示凋亡抑制蛋白Bcl2表达增加而促凋亡蛋白Bax的表达减少．结果表明,miRNA的重要调节者Dicer和Drosha可以影响TGF-β1及Bcl2/Bax的表达进而影响细胞的增殖和凋亡,从而参与了子宫内膜异位症的形成．     

上皮间质转化标记物及Snail在子宫内膜异位症中的表达

目的:研究上皮间质转化标志物(E-cadherin、β-catenin、vimentin)和Snail在子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)中的表达。方法:选取40例EMs患者(实验组)异位内膜及在位内膜,同时获取20例非EMs患者(对照组)的正常子宫内膜,采用免疫组化法研究Snail、EMT上皮标志物(E-cadherin、β-catenin)、间质标志物(vimentin)在各内膜组织中的表达,并比较其表达水平。结果:EMs患者异位内膜和在位内膜的EMT上皮标志物E-cadherin、β-catenin表达均显著低于正常内膜的表达(P0.05);EMs患者异位内膜和在位内膜的EMT间质标志物vimentin表达均显著高于正常内膜的表达(P0.05);EMs患者异位内膜和在位内膜中Snail表达显著高于正常内膜的表达(P0.05)。结论:在子宫内膜异位症(EMs)中,Snail、vimentin表达上调,E-cadherin、β-catenin表达下调可能与子宫内膜异位症(EMs)的发生、发展及浸润转移有关。     

C-myc和cyclin D1在子宫内膜异位症中免疫反应性增强

通过观察子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)患者雌激素靶基因C-myc和cyclin D1的表达,探讨它们之间是否存在相关性,并分析c-myc与cyclin D1的表达与患者分期、血清CA125水平之间的关系。方法选取开腹或腹腔镜手术治疗的EMS患者30例(病例组)和同期因其它良性疾病行手术治疗的患者30例(对照组),采用免疫组织化学技术和荧光定量PCR检测病例组的子宫内膜和腹膜异位病灶,及对照组的子宫内膜和正常腹膜中c-myc和cyclin D1的表达;化学发光免疫法检测病例组及对照组的血清CA125水平。结果免疫组织化学和荧光定量PCR检测显示:与对照组相比,病例组在位子宫内膜和腹膜异位病灶组c-myc和cyclin D1表达增强;不同分期的子宫内膜异位症患者的在位子宫内膜和腹膜异位病灶组织的c-myc和cyclin D1的表达无统计学差异;病例组c-myc与cyclin D1的表达呈正相关,但与患者血清CA125水平无相关性。结论本研究结果提示,子宫内膜异位症的发生可能与雌激素靶基因c-myc和cyclin D1的共同表达增加有关,与不同分期、CA125水平无关。     

YKL-40 和NF-κ B 在子宫内膜异位症中的表达及相关性研究

目的:通过检测人类软骨蛋白39(YKL-40)和核转录因子KappaB(NF-κB)在子宫内膜异位症组织中的表达,探讨二者与子宫内膜异位症的关系及二者的相关性。方法:用免疫组化二步法检测40例子宫内膜异位症(EMS)患者的异位内膜和在位内膜及40例子宫肌瘤患者子宫内膜(对照组)YKL-40和NF-κB的表达,并对检测结果进行统计学分析。结果:YKL-40、NF-κB在子宫内膜异位症患者的异位和在位内膜及对照组内膜中的表达率分别为67.5%、62.5%、35%及88.5%、57.5%、32.5%,差异有统计学意义(P<0.01);在不同月经周期YKL-40表达无统计学意义;在位内膜和正常内膜NF-κB的表达分泌期高于增殖期,差异有统计学意义(P<0.05);YKL-40和NF-κB在三种内膜中的表达具有正相关性,相关系数分别是0.305,0.267和0.457(P<0.01)。结论:YKL-40和NF-κB在EMS发生发展中起重要的作用。     

Musashi-1和β-catenin在子宫内膜中的表达及其在内膜异位病灶形成中的作用

目的:检测Musashi-1和β-连环蛋白(β-catenin)在子宫内膜异位症(EMs)患者的在位内膜和异位内膜中的表达,并初步探讨作用机制。方法:2016年9月至2018年9月,收集EMs患者的在位内膜(在位内膜组,28例)、异位内膜(异位内膜组,24例)和非EMs患者的正常内膜(正常内膜组,30例),采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)试验检测Musashi-1和β-catenin在各组内膜组织中的表达情况,并分析Musashi-1和β-catenin在各组内膜组织中的表达相关关系。结果:在位内膜组和异位内膜组中,Musashi-1和β-catenin的相对表达量均明显高于正常内膜组(P0.05),而在位内膜组与异位内膜组之间的差异无统计学意义(P0.05)。在位内膜组和正常内膜组中,增生期的Musashi-1和β-catenin相对表达量显著高于分泌期(P0.05),而异位内膜组中,在增生期和分泌期Musashi-1和β-catenin比较差异无统计学意义(P0.05)。在位内膜组和异位内膜组中,Musashi-1和β-catenin表达之间均呈正相关性(P0.05),而正常内膜组中,两者表达之间无明显相关性(P0.05)。结论:在EMs的发病过程中,干细胞标志物Musashi-1可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路参与并促进子宫内膜异位病灶的形成。     

子宫内膜异位症纤维化小鼠模型构建方法及其应用

目的探索一种高效的子宫内膜异位症纤维化小鼠模型建立方法及其评价方法。方法改良的腹腔注射法构建BALB/c小鼠子宫内膜异位症纤维化模型;收集小鼠腹腔灌洗液,ELISA试剂盒检测灌洗液TGF-β1水平;对小鼠腹腔粘连程度进行评分; HE染色验证子宫内膜异位症模型是否成功; Masson染色检测异位灶胶原纤维沉积情况,评估其胶原沉积程度;免疫组化法检测纤维化相关蛋白E-cadherin、Collagen I、α-SMA、smooth muscle myosin heavy chain II (SMMHC-II)的表达情况,评估异位灶纤维化程度。结果改良腹腔注射法构建小鼠子宫内膜异位症纤维化小鼠模型成功率可达到100%。小鼠腹腔灌洗液TGF-β1水平随造模时间延长有明显升高。Masson染色和纤维化相关蛋白免疫组化染色观察到子宫内膜异位症小鼠腹腔存在纤维化表型。结论改良的腹腔注射法构建小鼠子宫内膜异位症纤维化模型成功率高,腹腔灌洗液TGF-β1水平、Masson染色和纤维化相关蛋白E-cadherin、Collagen I、α-SMA、SMMHC-II免疫组化染色能够评价小鼠子宫内膜异位症盆腔纤维化程度。     

子宫内膜异位症患者血管生成相关基因VEGF和TSP-1 mRNA的表达

本研究的目的在于探讨血管内皮生长因子(VEGF)和血小板反应蛋白-1(TSP-1)在子宫内膜异位症患者的在位内膜、卵巢子宫内膜异位囊肿及正常子宫内膜中的表达及意义。采用q PCR法检测在北京妇产医院接受腹腔镜手术的62例内异症患者的异位内膜、在位内膜及23例不孕症患者正常子宫内膜中VEGF和TSP-1 mRNA的表达水平。结果表明卵巢子宫内膜异位囊肿间质细胞中的VEGF mRNA的表达水平与在位子宫内膜间质细胞相比明显降低(p=0.001),而TSP-1 mRNA的表达水平明显高于后者(p0.001)。VEGF mRNA在卵巢子宫内膜异位囊肿组织中的表达水平明显低于在位子宫内膜组织(p0.001),而TSP-1mRNA的表达水平明显高于后者(p0.001)。VEGF mRNA在在位子宫内膜组织中的表达水平明显高于正常子宫内膜组织(p0.001)。TSP-1 mRNA的表达与后者相比无统计学差异(p=0.221)。血管形成相关基因VEGF和TSP-1在卵巢子宫内膜异位囊肿和在位子宫内膜组织、细胞中表达不同,其可能参与了子宫内膜异位症的发生和发展。     

P物质在子宫内膜异位症中的表达及其意义

目的:探讨P物质(substance P,SP)在子宫内膜异位症(endometriosis,EM)中的表达及其意义。方法:采用免疫组织化学法检测2012年10月至2013年4月在哈尔滨医科大学附属第一医院经腹腔镜及病理证实的EM患者异位子宫内膜组织20例,与其配对的在位子宫内膜组织10例以及因非EM(子宫肌瘤)行腹腔镜下子宫全切术或肌瘤核除患者的正常子宫内膜组织20例中SP的表达情况,并分析和比较术中盆腔粘连发生情况。结果:SP在EM患者的异位子宫内膜、在位子宫内膜及非EM患者的正常子宫内膜的阳性表达率分别为75%、80%、20%,异位子宫内膜和在位子宫内膜比较无显著性差别(P=1.0),但均高于非EM患者的正常子宫内膜,差异均有统计学意义(P=0.002,P=0.004);EM组盆腔粘连的阳性率高于非EM组,EM患者异位子宫内膜中SP阳性组盆腔粘连阳性率高于SP阴性组,差异均有统计学意义(P=0.001,P=0.032),非EM患者正常子宫内膜中SP阳性组盆腔粘连阳性率与SP阴性组相比,差异不具有统计学意义(P=0.061)。结论:SP在EM的异位子宫内膜和在位子宫内膜中的表达上调,并与EM合并盆腔粘连有关,其具体机制尚有待进一步的研究。     

MMP-2、MMP-9及VEGF在子宫内膜异位症中的表达及临床意义

目的:研究基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)表达在子宫内膜异位症发生发展中的作用.方法:应用免疫组化二步法检测EMs患者异位内膜36例、在位内膜36例及正常内膜中的MMP-2、MMP-9、VEGF的表达情况.结果:MMP-2、MMP-9、VEGF在异位内膜组中阳性表达率分别为94.4%、91.7%和91.7%,显著高于在位内膜组、正常内膜组(P＜0.05);而在位内膜组和正常内膜组差异无统计学意义(P＞0.05).结论:检测MMP-2、MMP-9、VEGF的表达可用于判断子宫内膜异位症的侵袭转移和评估预后.     

TFF2、ERa和ERβ在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的:研究三叶因子2(Trefoil factors2,TFF2)及雌激素受体ERa,ERβ在子宫内膜癌、子宫内膜不不典型增生及正常子宫内膜组织中的表达并探讨其临床意义。方法:应用免疫组化法对14例正常子宫内膜组织、22例子宫内膜不典型增生及82例子宫内膜癌病例中TFF2,ERa和ERβ的蛋白表达进行检测,观察在不同子宫内膜组织中TFF2,ERa和ERβ蛋白的表达情况。结果:TFF2在正常子宫内膜中的阳性表达率为85.7%(12/14),在不典型增生组织中的阳性表达率72.7%(16/22),在子宫内膜癌中的阳性表达率为57.3%(47/82),TFF2蛋白表达强度在正常、不典型增生和内膜癌组间比较有统计学差异(P<0.05)。TFF2蛋白表达与肿瘤的分化程度,肿瘤的分期和淋巴结转移有关(P<0.05),与浸润程度无关。ERa在正常子宫内膜中的阳性表达率为92.8%(13/14),在不典型增生组织中的阳性表达率为86.4%(19/22),在子宫内膜癌中的阳性表达率为53.7%(44/82),ERa蛋白表达强度在正常,不典型增生和内膜癌组间比较有统计学差异(P<0.05),ERa蛋白表达与肿瘤的分化程度和浸润程度有关(P<0.05),与肿瘤的分期和淋巴结转移无关。ERβ在14例正常子宫内膜组织中ERβ蛋白阳性表达率为78.6%(11/14),在子宫内膜不典型增生中的蛋白阳性表达率为72.7%(16/22),在82例子宫内膜癌组织中ERβ蛋白阳性表达率为48.8%(40/82),ERβ蛋白表达强度在正常、不典型增生和内膜癌组间比较有统计学差异(P<0.05),ERβ蛋白的表达与肿瘤的分化程度、浸润程度有关,与肿瘤的分期和淋巴结转移无关。结论:TFF2、ERa和ERβ在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生、子宫内膜癌中的表达逐渐降低,为进一步研究在子宫内膜癌诊治中的作用提供依据。     

YKL-40和NF—KB在子宫内膜异位症中的表达及相关性研究

目的：通过检测人类软骨蛋白39（YKL-40）和核转录因子KappaB（NF—KB）在子宫内膜异位症组织中的表达,探讨二者与子宫内膜异位症的关系及二者的相关性。方法：用免疫组化二步法检测40例子宫内膜异位症（EMS）患者的异位内膜和在位内膜及40例子宫肌瘤患者子宫内膜（对照组）YKL-40和NF—KB的表达,并对检测结果进行统计学分析。结果：YKL-40、NF—KB在子宫内膜异位症患者的异位和在位内膜及对照组内膜中的表达率分别为67．5％、62．5％、35％及88．5％、57．5％、32．5％,差异有统计学意义（P〈0．01）;在不同月经周期YKL-40表达无统计学意义;在位内膜和正常内膜NF-KB的表达分泌期高于增殖期,差异有统计学意义（P〈0．05）;YKL-40和NF-KB在三种内膜中的表达具有正相关性,相关系数分别是0．305,0．267和0．457（P〈0．01）。结论：YKL-40和NF—KB在EMS发生发展中起重要的作用。     

PTEN蛋白的异常表达与卵巢子宫内膜异位症恶变的关系

目的:探讨PTEN蛋白表达与与卵巢子宫内膜异位症(内异症)恶变的关系.方法:应用免疫组化方法检测21例子宫内膜异位症相关卵巢癌(内异症相关卵巢癌),10例不典型卵巢子宫内膜异位症(不典型内异症)及23例内异位症中PTEN蛋白表达.结果:PTEN在内异症和不典型内异症组阳性表达率分别为82.61%和60.00%,内异症相关卵巢癌组中PTEN蛋白阳性表达率为42.86%.内异症相关卵巢癌组PTEN蛋白表达与内异症组相比差异有显著性(p＜0.05). PTEN蛋白表达与内异症相关卵巢癌患者的年龄、病理类型无相关性(p＞0.05),与分化程度、临床分期相关(p＜0.05),在内异症相关卵巢癌中,临床分期早,分化程度高的PTEN表达显著高于分期晚,分化差的.结论:PTEN蛋白表达缺失可能参与了卵巢子宫内膜异位症恶变,有可能成为一个很有潜力的诊断指标及新的治疗靶点而应用于临床.     

子宫内膜异位症患者细胞因子的表达与抗体反应

目的:探究细胞因子的表达与抗体反应在子宫内膜异位症(EMS)发生中的作用及其作为诊断指标的可能性。方法:选取子宫内膜异位症患者70例与对照组50例,检测并比较两组患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达以及抗子宫内膜抗体(EM-Ab)和转铁蛋白抗体(TRF-Ab)的阳性率。分析以上细胞因子及抗体的表达与子宫内膜异位症临床分期的关系。结果:子宫内膜异位症组TNF-α、IL-6、MCP-1与VEGF均显著高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);子宫内膜异位症组抗子宫内膜抗体阳性率、转铁蛋白抗体阳性率以及两种抗体均为阳性的比例均显著高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);TNF-α、IL-6、MCP-1与VEGF细胞因子与子宫内膜异位症分期呈正相关,分期越高、EMS病情越重则细胞因子表达水平越高(P0.05)。结论:细胞因子的表达与相关抗体反应均参与了子宫内膜异位症的发生及发展,通过检测到相关细胞因子水平的升高与自身抗体转阳可以筛选与诊断子宫内膜异位症,初步判断其临床分期和病情程度。     

子宫内膜癌中TGF-β_1及受体TβRI的表达及其临床意义

目的:研究转化生长因子(TGF-β_1)及其Ⅰ型受体(TβRI)在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用RT-PCR方法检测36例子宫内膜癌及31例正常子宫内膜组织中TGF-β_1及TβRI基因的表达水平,分析其与临床病理参数之间的关系。结果:子宫内膜癌组织中TGF-β_1mRNA的表达明显高于正常组织(P<0.05),而TβRI mRNA的表达水平明显低于正常内膜组织(P<0.05)。TGF-β_1mRNA及TβRImRNA在子宫内膜癌中的表达均与肿瘤的临床分期、组织学分级、肌层浸润深度、淋巴结转移呈显著性相关(P<0.05),差别有统计学意义。结论:TGF-β_1及其Ⅰ型受体TβRI在子宫内膜癌的发生、发展中可能起重要作用,检测TGF-β_1及TβRI对评价子宫内膜癌的转移及预后有重要价值。     

子宫内膜异位症患者在位内膜及异位内膜中Claudin-1、Claudin-3的表达及意义

目的:探讨紧密连接蛋白claudin-1、claudin-3在子宫内膜异位症(内异症)发生发展中的作用及意义.方法:免疫组织化学方法检测正常子宫内膜、内异症患者的在位内膜和异位内膜组织中claudin-1、claudin-3蛋白质的表迭.结果:chudin-1、claudin-3蛋白主要定位于子宫内膜细胞的细胞膜/质,内异症患者的异位内膜中claudin-1、claudin-3蛋白的表达显著低于在位内膜及正常子宫内膜(P＜0.01).结论:claudin-1、claudin-3蛋白在内异症患者异住内膜中的表达明显下调,二者可能与内异症的发生发展相关.     

趋化因子CCR7受体在子宫内膜组织上的表达水平及意义

目的通过观察趋化因子CCR7受体在子宫内膜异位症组织上的表达,探讨趋化因子CCR7受体在子宫内膜异位症发病中的作用。方法采用SABC免疫组化染色法观察CCR7在正常对照的子宫内膜和AM的异位子宫内膜及OEM的异位子宫内膜、在位子宫内膜腺上皮组织中表达水平。结果 CCR7主要在腺上皮细胞的胞浆和胞膜表达,CCR7受体的表达水平在AM组及OEM组的异位、在位子宫内膜显著高于正常子宫内膜(P0.05)。CCR7受体的表达水平在AM组及OEM组的异位内膜间差异无统计学意义(P0.05)。结论     

NGF 及其受体TrkA 在子宫腺肌病中的表达及与痛经的关系

目的:研究NGF及其受体TrkA在子宫腺肌病患者的异位内膜与在位内膜组织的表达情况及与痛经的关系。方法:采用免疫组化MaxVision法检测子宫腺肌病异位内膜(30例)、在位内膜(30例)、正常子宫内膜(19例)标本中NGF、TrkA蛋白的表达,分析其表达差异及与痛经的关系。结果:①子宫腺肌病异位内膜组NGF、TrkA表达显著高于正常内膜组(P<0.01),在位内膜组NGF、TrkA表达显著高于正常内膜组(P<0.01),子宫腺肌病异位内膜组NGF、TrkA表达与在位内膜组无显著差异。②子宫腺肌病异位内膜组NGF、TrkA表达与痛经强度评分呈正相关(相关系数r=0.637,P=0.000;r=0.662,P=0.000)。结论:NGF及其受体TrkA在子宫腺肌病中高表达可能参与子宫腺肌病发病机制,而且可能与痛经有关。     

TGF-β1-509(C/T)基因多态性与子宫内膜异位症相关性的研究

目的:研究转化生长因子(TGF-β1)-509(C/T)基因多态性与子宫内膜异位症易感性的关系。方法:采用PCR-RFLP法和PCR产物直接测序法,检测80例子宫内膜异位症和80例正常对照组TGF-β1-509(C/T)基因型及等位基因分布。结果:子宫内膜异位症组TGF-β1-509CC、CT、TT基因型频率分别为20%、35%、45%,C和T等位基因频率分别为37.5%和62.5%;对照组中TGF-β1-509CC、CT、TT基因型频率分别为30%、32.5%、37.5%,C和T等位基因频率分别为46.25%和53.75%。基因型频率和等位基因频率在两组之间无显著性差异(P>0.05、P>0.05)。结论:TGF-β1-509(C/T)基因多态性与子宫内膜异位症无关联。     

内皮抑素转基因治疗子宫内膜异位症大鼠模型的实验研究

目的:了解内皮抑素(ES)转基因治疗子宫内膜异位症大鼠模型的疗效。方法:构建子宫内膜异位症大鼠模型,选择建模成功的大鼠为实验研究对象,随机分为ES转染组(I组)24只、载体对照组(Ⅱ组)20只和阴性对照组(Ⅲ组)20只。I组病灶局部注射lipofectamine-endo-pBud复合物进行基因转染,Ⅱ组注射lipofectamine-pBud复合物,Ⅲ组注射PBS用于对照。通过实时荧光定量PCR法检测异位病灶中ES基因的相对表达量,用Western-blot测定ES-HA融合蛋白及ES蛋白的相对表达量,来判断转染成功与否。用ELISA法对大鼠血清中ES及血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平进行测定,用免疫组化SP法对ES、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)以及微血管密度(MVD)的表达进行测定,用游标卡尺对转染前后各组大鼠异位病灶的长、宽进行测量,计算体积,分析各指标实验前后的差异,观察内皮抑素转基因治疗子宫内膜异位症大鼠模型的疗效。结果:注射相应试剂后2周,I组异位病灶组织中ES基因的相对表达量高于两对照组(P<0.05),有ES-HA融合蛋白表达,且ES蛋白的相对表达量显著高于两对照组(P<0.01);I组血清中ES水平显著高于两对照组(P<0.01),VEGF水平显著低于两对照组(P<0.01),三组ES与VEGF在血清中的表达水平呈负相关(r=-0.805);I组异位病灶组织中ES表达明显高于两对照组(P<0.01);MMP-2的表达明显少于两对照组(P<0.01);MVD明显少于两对照组(P<0.01);三组ES与MMP-2在异位内膜中的表达呈负相关(r=-0.700);I组异位病灶体积明显小于两对照组(P<0.01)。结论:阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导的重组质粒endo-pBud病灶内直接注射法可以成功实现ES在子宫内膜异位症大鼠异位内膜中的表达,并对子宫内膜异位症大鼠模型有治疗作用。     

神经细胞黏附因子在子宫腺肌病病灶中的表达及意义

目的:探究神经细胞黏附因子(NCAM)在子宫腺肌病病灶中的表达及意义。方法:将2016年6月~2017年6月在我院接受治疗的80例子宫腺肌病患者作为研究对象,包括分泌期与增生期各40例,采用免疫组化法检测,其在位内膜、异位内膜组织中NCAM表达情况,并以同期我院40例正常者子宫内膜标本作为对照。对子宫腺肌病患者痛经程度给予NRS疼痛评估,比较其NCAM的表达。结果:80例子宫腺肌病在位内膜、异位内膜均存在NCAM表达,40例正常内膜腺上皮有38例存在NCAM表达,2例正常内膜无表达。NCAM在异位内膜组织中的表达明显高于在位内膜及正常子宫内膜(P0.05),差异均有统计学意义。NCAM在在位内膜组织分泌期表达与增生期差异有统计学意义(P0.05);子宫腺肌病异位病灶NCAM表达与患者NRS评分呈现明显正相关(r=0.824,P0.05)。结论:NCAM在异位子宫内膜高表达,可能参与了子宫内膜异位症的发生和发展,并与患者痛经程度呈现出正相关。