蓝猪耳卵细胞和合子的分离

蓝猪耳(Torenia fournieri)胚囊部分裸露出胚珠,在光学显微镜下能清楚观察到卵细胞和助细胞的形态结构.用解剖和酶解-解剖两种方法都能分离出生活卵细胞.用前种方法机械分离出的卵细胞数量较少(5%),但避免了酶对配子识别研究的干扰.在后种方法中加入0.1%纤维素酶和0.1%果胶酶既能使分离更加容易操作,又对卵细胞没有致命伤害,能在短时间内分离出较多的卵细胞(18%).用酶解-解剖方法也可分离出授粉14 h后的合子细胞.     

高等植物合子离体培养研究进展

合子是高等植物个体发育的第一个细胞,在研究植物个体发育机理中有着不可替代的位置。植物体内合子细胞分裂并以胚胎发生方式形成新个体的特征在植物生物工程应用中独具特色。随着离体受精技术的发展和合子分离技术的改进,已从多种植物中得到了人工合子和从体内直接分离出了合子。合子离体培养系统的建立为研究高等植物个体发育最初阶段的合子激活机理提供了条件,也为探索利用合子胚胎发生的特征进行植物基因工程打下了基础。另外,探索异种植物间人工杂种合子的培养也是进行远缘杂交的新尝试。     

电激转化GFP基因在小麦合子和早期原胚中的高频表达

用电激法将GFP基因成功转入分离的小麦(Triticum aestivum L.)合子及早期原胚中.在电场强度150 V/cm、电容25 μF、线性DNA浓度200 μg/mL、电激缓冲液pH 7.2的条件下,得到GFP基因在早期原胚中的高频瞬间表达(46.7%).与开花后5 d胚胎的最适电场强度相比,合子和早期原胚因较幼嫩而最适电场强度较低.电激后的一些早期原胚可以在KM8p培养基中培养并继续分裂,分裂后的细胞中也能观察到GFP基因的表达.此外,电激后的合子及2细胞、4细胞和8细胞原胚中没有看到基因表达的嵌合现象.     

蝴蝶兰合子和胚的分离

该文用酶解一振荡法分离蝴蝶兰受精后的胚囊,然后显微解剖出合子、早期原胚及接近成熟的球形原胚。酶解液由O．7％-1．3％的纤维素酶、0．6％-1．0％果胶酶和10％甘露醇组成,pH5．8,酶解时间20-30min。分离的蝴蝶兰早期原胚和接近成熟的球形原胚均发现有发达的胚柄吸器。     

千里光合子胚和胚乳形成及其早期发育的细胞学特征（英文）

千里光(Senecio scandens Buch.-Ham. ex D. Don)是传统中草药,抗菌功效显著。本研究从细胞学角度对千里光合子胚和胚乳的形成与发育进行观察研究。结果显示,结构和功能迥异的基细胞和顶细胞源自细胞质不均一分布的合子所致,推测合子的极性与胚囊的极性和生殖核分裂为"二态"精细胞有关;基细胞在合子胚胎"球型期"末期出现分化,早期胚胎的组织分化始于"三角期",可辨别的结构差异直到"鱼雷期"才出现。此外,胚乳形成遵循无细胞壁核化模型。本研究对千里光细胞分化、组织分化和结构差异各发育阶段特征的观察结果,不仅可为深入分析胚胎发育过程功能基因的时空表达提供依据,也为相关近缘物种的系统植物学研究提供参考资料。     

千里光合子胚和胚乳形成及其早期发育的细胞学特征(英文稿)

千里光（Senecio scandens Buch.-Ham. ex D. Don）是传统中草药, 抗菌功效显著。本研究从细胞学角度对千里光合子胚和胚乳的形成与发育进行观察研究。结果显示,结构和功能迥异的基细胞和顶细胞源自细胞质不均一分布的合子所致,推测合子的极性与胚囊的极性和生殖核分裂为“二态”精细胞有关;基细胞在合子胚胎“球型期”末期出现分化,早期胚胎的组织分化始于“三角期”,可辨别的结构差异直到“鱼雷期”才出现。此外,胚乳形成遵循无细胞壁核化模型。本研究对千里光细胞分化、组织分化和结构差异各发育阶段特征的观察结果,不仅可为深入分析胚胎发育过程功能基因的时空表达提供依据,也为相关近缘物种的系统植物学研究提供参考资料。     

水稻“双－3”多胚发生的研究

叶秀,陈泽濂,黎垣庆 　　水稻ＭＩＶ（双－３、籼稻）传粉后可以有多个花粉管同时进入胚囊．大多数胚囊的合子发育为一个正常的胚,但是有少数合子胚发生裂生并分化形成双胚芽和一胚根．有些胚囊的助细胞和卵细胞同时受精后,分别发育为助细胞胚和合子胚;有些胚囊中的反足细胞团可直接发育为胚．可见“双－３”水稻除有正常合子胚外还存在助细胞胚和反足细胞匹的多胚现象．     

被子植物早期近交衰退与晚期自交不亲和

被子植物自交后结籽率的降低通常由早期近交衰退(early-acting inbreeding depression)与晚期自交不亲和(self-incompatibility)导致.早期近交衰退是严格的合子后的作用机制,通常由多位点隐性有害基因的纯合导致,并在合子发育成成熟种子的过程中发生.发生在柱头表面或花柱中的自交不亲和是合子前的作用机制,而发生在子房内的晚期自交不亲和(late-acting ovarian self-incompatibility)可在合子前或合子后发生作用,与早期近交衰退很难区分.在合子前的子房内自交不亲和机制下,尽管花粉管能生长到子房甚至穿透胚珠,但通常不能形成合子.合子后的子房内自交不亲和能形成合子,但由于自交不亲和通常由单位点控制,合子败育集中发生在受精作用后的很短时间内.基于早期近交衰退和子房内自交不亲和的这种差异,己有研究提出了8种区分方法.通过解剖学方法观察授粉后生物学过程,比较自交和异交先后授粉和自交授粉处理的结籽率,以及通过一元线性回归模型考察自交和异交处理下成熟种子和败育种子数之和是否保持恒定,可以区分是合子前还是合子后过程导致的自交后种子产量降低.通过全同胞间杂交实验判断败育的遗传基础是单基因控制还是多位点有害隐性等位基因的纯和,可以区分合子后自交不亲和机制与早期近交衰退;或者通过这两种不同遗传基础导致的种子大小等表型性状的差异来区分.     

电激转化GFP基因在小麦合子和早期原胚中的高频表达

用电激法将GFP基因成功转入分离的小麦（Triticum aestivumL.)合子及早期原胚中。在电场强度150V/cm,电容25μF。线性DNA浓度200μg/mL,电激缓冲液pH7.2的条件下,得到GFP基因在早期原胚中的高频瞬间表达（46.7%)。与开花后5d胚胎的最适电场强度相比,合子和早期原胚因较幼嫩而最适电场强度较低。电激后的一些早期原胚可以在KM8p培养基中培养并继续分裂,分裂后的细胞中也能观察到GFP基因的表达。此外,电激后的合子及2细胞。4细胞和8细胞原胚中没有看到基因表达的嵌合现象。     

水稻“双－3”多胚发生的研究

水稻ＭＩＶ（双－３、籼稻）传粉后可以有多个花粉管同时进入胚囊．大多数胚囊的合子发育为一个正常的胚,但是有少数合子胚发生裂生并分化形成双胚芽和一胚根．有些胚囊的助细胞和卵细胞同时受精后,分别发育为助细胞胚和合子胚;有些胚囊中的反足细胞团可直接发育为胚．可见“双－３”水稻除有正常合子胚外还存在助细胞胚和反足细胞匹的多胚现象．     

Isolation of egg cells and zygotes of Torenia fournieri L. and determination of their surface charge

Egg cells of Torenia fournieri were isolated from embryo sacs 1 day after anthesis using enzymatic digestion or mechanical dissection. About 5% of the egg cells and zygotes (2-3 from 50 ovules) could be mechanically dissected within 2 h. When 0.1% cellulase and 0.1% pectinase were added to the mannitol isolation solution, about 18% of the egg cells (8-10 from 50 ovules) could be isolated within 2 h. The egg cells isolated by mechanical dissection could be used for in vitro fertilization studies without any of the potentially deleterious effects of the enzymes on the plasma membrane of egg cell. The egg cells isolated using enzymatic digestion could be used in the study of the molecular biology of female gamete because more egg cells could be isolated with this technique. Using enzymatic digestion, over 10 zygotes from 50 ovules (over 20%) were isolated from the pollinated ovules. Coupled with our successful isolation of mature sperm cells, the isolation of egg cells of T. fournieri will make in vitro fertilization possible in a dicotyledon plant.     

五唇兰合子与原胚的分离

分离合子和原胚可以为植物受精和胚胎发生提供很好的研究材料, 因此具有重要意义。用酶解-振荡法分离出五唇兰(Doritis pulcherrima)受精后胚囊, 然后以显微解剖获得合子和原胚。酶解液组成为0.7%–1.3%纤维素酶、0.6%–1.0%果胶酶和10%甘露醇, pH值为5.8, 酶解时间0.5–3.0小时。在分离的早期原胚和接近成熟的球形胚中, 珠孔端均有较发达的胚柄吸器。实验获得了对五唇兰胚胎发育的新认识, 合子和原胚的成功分离也为进一步的细胞学和分子生物学研究打下基础。     

葱卵细胞的分离

将大葱（Allium fistulosum）胚珠置于酶液中30分钟可将其外珠被去掉。可清楚地看到由内珠被包裹的胚珠中胚囊的轮廓。将胚珠转移至不含酶的相同溶液中,用解剖针从胚珠中部切割,然后挤压胚珠的珠孔部位,卵器细胞从胚珠的切口处逸出。再用显微操作仪将卵细胞和2个助细胞分开,达到葱卵细胞分离的目的。酶对分离卵细胞具有重要的作用,经0．2％果胶酶Y23、0．8％果胶酶、0．8％纤维素酶和0．5％半纤维素酶的处理,可在2小时内从30个胚珠中分离出18个卵细胞。随着胚囊的发育,2个助细胞的体积出现明显差异。生活的葱卵细胞的成功分离,为建立葱离体受精体系创造了条件。     

葱卵细胞的分离

将大葱(Allium fistulosum)胚珠置于酶液中30分钟可将其外珠被去掉。可清楚地看到由内珠被包裹的胚珠中胚囊的轮廓。将胚珠转移至不含酶的相同溶液中, 用解剖针从胚珠中部切割, 然后挤压胚珠的珠孔部位, 卵器细胞从胚珠的切口处逸出。再用显微操作仪将卵细胞和2个助细胞分开, 达到葱卵细胞分离的目的。酶对分离卵细胞具有重要的作用, 经0.2%果胶酶Y23、0.8%果胶酶、0.8%纤维素酶和0.5%半纤维素酶的处理, 可在2小时内从30 个胚珠中分离出18个卵细胞。随着胚囊的发育, 2个助细胞的体积出现明显差异。生活的葱卵细胞的成功分离, 为建立葱离体受精体系创造了条件。     

Isolation of individual egg cells and zygotes in Alstroemeria followed by manual selection with a microcapillary-connected micropump

AIMS: To develop a procedure for isolating living egg cells and zygotes from Alstroemeria ovules. SCOPE: An attempt was made to isolate egg cells and zygotes from the ovules of Alstroemeria aurea. The ovules were histologically observed using a clearing procedure which revealed the localization and sizes of the embryo sacs and egg apparatus within the ovules. For the isolation of egg cells, ovules were cut into sections with a surgical blade and treated with an enzyme solution. Subsequently, these ovule sections were dissected using a glass needle under an inverted microscope. Egg cells successfully isolated by this procedure were collected using microcapillaries connected to a micropump. For zygote isolation, ovules were excised from ovaries 24 h after self-pollination. By treating excised ovules with an enzyme solution and subsequently dissecting them using a glass needle, zygotes were successfully isolated from the ovules and collected with a microcapillary. The isolated zygotes were associated with pollen tubes and one of the synergids. Egg cells and zygotes were viable for up to 2 h following isolation, as determined by fluorescein diacetate staining. CONCLUSIONS: The procedures for isolating egg cells and zygotes in Alstroemeria were established, and each egg cell and zygote was captured with a microcapillary.     

黄花木本曼陀罗卵细胞分离(简报)

采用分离的精、卵细胞体外融合并诱导人工合子长成植株的离体受精方法可在没有其他组织影响的单细胞水平上探索受精事件的发生过程．为研究高等植物的受精机理、探索配子识别和合子激活等问题提供有效手段。分离的卵细胞不仅可以用来开展离体受精研究．也提供了用分子生物学方法研究被子植物卵细胞发育和合子发育机理的实验基础.     

从水稻花粉管分离精细胞(简报)

精细胞的分离是植物生殖工程的一个重要组成部分,是目前被子植物有性生殖研究的一个活跃领域[1,2]。随着精细胞分离技术的完善和分离出精细胞的植物类型的增加,目前对精细胞的分子生物学研究已有一些进展,主要是精细胞特异蛋白的分离[3,4]和cDNA文库的构建以及一些精细胞特异基因的分离[5,6]。     

洋葱卵细胞的分离

将洋葱的胚珠置于酶液中酶解50-110 min后剥去其珠被,可清楚地看到珠心中的胚囊轮廓。用解剖针将珠心从中部横切,然后挤压其珠孔部位,卵器细胞从胚珠的切口处逸出。再用显微操作仪的玻璃针将卵细胞和两个助细胞分开,达到分离洋葱卵细胞的目的。酶对分离卵细胞具有重要作用,在最佳的酶液浓度[0.02%果胶酶Y23、0.08%果胶酶（Serva）、0.05%纤维素酶和0.05%半纤维素酶]下酶解胚珠110 min后,解剖1 h可从24个胚珠中分离出10个卵细胞（41.67%）。随着胚囊的发育,两个助细胞的体积出现明显的二形性。洋葱生活卵细胞的分离为开展洋葱离体受精建立了基础,也为研究洋葱卵器细胞的发育创造了条件。     

胡萝卜精、卵细胞、助细胞和中央细胞的分离

用两个解剖针挤压胡萝卜花粉使其破裂释放出精细胞。用酶解-解剖方法分离胡萝卜胚囊中的卵细胞、助细胞和中央细胞。胡萝卜胚珠先在酶液中酶解40~50min,然后将其转移到不含酶的分离液中用解剖针解剖胚珠。将胚珠的合点端切破,轻轻挤压胚珠的珠孔,卵细胞、助细胞和中央细胞即可逸出。在最佳条件下,20min可从20个胚珠中分离出5个卵细胞。对分离胚囊细胞的渗透压和酶液成分进行了筛选。分离出的卵细胞用显微操作仪收集。胡萝卜精、卵细胞的成功分离为在双子叶植物中进行离体受精探索创造了条件。