用磷光探针测定肿瘤细胞

用磷光探针测定肿瘤细胞马贵斌（山西大学化学系,太原０３０００６）关键词磷光探针,肿瘤细胞磷光是三重态蜕变到基态的辐射过程。它需要改变电子的自旋,因此是一种“禁止”跃迁。这就使磷光成为一种不可几的过程,所以在液态溶液中很少观察到磷光。但是在低温下（例如...     

分子运动性预测麻栎种子离体胚轴适宜贮藏条件初探

应用电子顺磁共振波谱仪和自旋标记技术,以硝基氧探针为标记物,检测了室温下麻栎种子离体胚轴脱水过程中分子运动性的变化。发现含水量0.7gH2O/gDW至0.64gH2O/gDW范围是细胞质粘度的转折区域,低于这个含水量区域,细胞质粘度骤然上升,推测这个区域是室温下保存离体胚轴的适宜含水量下限。通过变温电子顺磁共振波谱测定,找到离体胚轴含水量在0.43gH2O/gDW至1.02gH2O/gDW范围内,分子运动性的临界温度和玻璃态相变温度所在区间。根据分子运动性随温度变化的规律,预测含水量为0.69gH2O/gDW的麻栎种子离体胚轴适宜贮藏温度约为-50℃。     

一种新型免疫PCR基因探针的构建及其在诊断中的初步研究

利用叶绿素分子 (chlorophyll)作为共价连接蛋白质与核酸的中间分子 ,构建了甲胎蛋白 (α fetoprotein ,AFP)抗体的基因探针 ,并用构建的基因探针通过免疫PCR对AFP进行了诊断的初步研究 .结果表明 ,其检测灵敏度比ELISA高 1 0 ⁴～1 0 ⁵ 倍 .基因探针的构建方法完全避免了蛋白质与有机溶剂的接触 ,基本保持了抗体的原有活性 ;并且人为地将蛋白质定向地锚定在dsDNA分子上 ,使PCR扩增不受任何影响 .构建的基因探针采用一定的保藏方法 ,室温中活性保存至少 6个月 .构建方法精简 ,成本低 ,易于推广应用     

短期高温胁迫对高产小麦品系灌浆后期旗叶光系统Ⅱ功能的影响

以叶绿素快相荧光动力学曲线(OJIP)为探针,探讨了高温胁迫对高产小麦品系01-35灌浆后期光系统Ⅱ（PSⅡ）功能的影响.结果表明,在37 ℃～43 ℃范围内,随温度升高Q_A还原程度和还原速率增大,至43 ℃时分别比室温下增加了23.89%和24.09%,表明Q_A→Q_B的电子传递受到抑制;43 ℃时PSⅡ的电子受体库降至室温下的47.4%,表明高温胁迫伤害了PSⅡ受体库;而PSⅡ供体侧未受到影响.当温度达到46 ℃时,Q_A还原程度和还原速率分别比室温下增加了13.95%和20.48%,但比43 ℃时显著下降,而PSⅡ电子受体库与43 ℃时相比无显著变化,表明46 ℃时PSⅡ供体侧受到伤害.与对照品种鲁麦14相比,高温胁迫下高产小麦的捕光色素复合体仍能捕获较多的光能,而且将捕获的光能更多的用于电子传递,表明高产小麦的捕光色素复合体及电子传递体耐受高温的能力较强,能够维持较高的电子传递能力.     

柯萨奇B1病毒VP1基因片段原子力显微镜成像分析

用原子力显微镜(AFM)观察线性DNA并探讨其成像条件。用RT-PCR技术扩增柯萨奇B1病毒VP1基因DNA片段,纯化回收后配制成含和不含1mmol/LMgCl2的水溶液,DNA终浓度为100μg/ml。分别取20μl滴加在新鲜解理的云母片上,吸附1min,用滤纸吸去残液,氮气吹干,在室温下采用MultiModeAFMNanoscopeⅢa的敲击模式成像。同时比较新制备的和多次使用过的探针所获得图像的质量,对两种探针进行扫描电镜观察。电泳证明获得了0.83kb的VP1基因DNA线性片段。Mg2+存在时,DNA在云母片上吸附延展较好,所获图像质量优于无Mg2+时。新制备的探针较多次使用过的探针所获图象分辨率更高。DNA分子的表观宽度为18±2.9nm,高度为0.8±0.2nm。说明AFM能以高分辨率直接观察DNA分子,Mg2+的存在和高质量的探针有助于获得理想的图象。     

生物化学与生物物理进展1993年第20卷(第1—6期)总目次

综述与专论,芋螺毒素及其在Ca2+通道研究中的应用 ...............................·.···……徐幼芬施玉棵(1)室温下三重态探针在生物大分子研究中的应用······…… ...................·...······.······……卑其新程极济(6)螺旋一环区一螺旋蛋白质—DNA结合蛋白的新类型 ......................·.···.·..·····……李建义童坦君(11)膜锚蛋白结构与功能及其调控机制·········……朱大栩(15)空泡膜类型H+一ATPase的研究进展··················…… .....................一…     

植物光诱导延迟荧光与光合作用的内在关联性研究

光合作用是地球上最重要的化学反应,植物内源性光诱导延迟荧光是光合作用原初过程中光系统Ⅱ作用中心P680处电荷分离效率的内在探针。本文从实验上证明了延迟荧光的产生与光合作用存在本质必然的联系。实验结果表明,延迟荧光激发谱与光合作用谱存在着明显的相似,延迟荧光强度随着激发光源光强的变化表现出类似的光抑制现象,以及在室温条件下延迟荧光强度与光合速率有着很好的相关性。为从植物光诱导延迟荧光技术来研究植物的光合作用提供了重要的实验证据。     

标志的单链RNA——一种核酸杂交新探针

核酸杂交是进行基因分析的重要技术之一。目前,该技术常规使用的都是DNA探针。近几年来的研究结果表明,RNA也可用作探针成功地用于基因探查。与同类DNA探针比较,它具有更高的敏感性。 单链RNA探针的主要优点是:(1)转录产生的单链RNA探针具有非常高的特异活性。最适条件下其特异活性可大于6×10~(?)cpm/μg。它的应用大大提高了原位杂交的敏感性。Cox等人在应用海胆胚胎的实验中发现不对称的SP6 RNA探针要比对称的RNA探针或DNA探针分别敏感8倍和100倍。在Northern     

纯化探针降低基因芯片杂交结果的背景

研究探针的纯化对基因芯片杂交结果的影响。将乙醇沉淀的探针和用DNA纯化试剂盒纯化的探针分别与基因芯片交,在同等条件下进行杂交后清洗和芯片扫描检测。结果表明,纯化的探针与基因芯片杂交结果的背景低,而未纯化的探针背景强,阳性信号界限比较模糊。运用基因芯片进行基因表达谱研究,要求杂交检测的结果必须低背景。探针的纯化是影响芯片杂交结果的一个重要因素。     

寡核苷酸探针进行DNA指纹分析在法医学上应用的评价

本文用自制的寡核苷酸探针（ＣＡＣ）５／（ＧＴＧ）５,对与法医学应用有关的问题进行了研究。从室温下放置三年的血痕得到不完全的ＤＮＡ指纹图;从同一个体不同组织的ＤＮＡ得到完全一致的结果;从混合斑中分离出精子ＤＮＡ进行ＤＮＡ指纹检验,并与同一供体的血液ＤＮＡ指纹图进行比较;还仅有０．２５μｇ的ＤＮＡ获得了可分辨的ＤＮＡ指纹图。此外,用限制性内切酶ＨａｅⅢ代替Ｈｉｎｆｌ酶切入的基因组ＤＮＡ,也获得了高度多     

蛋白质的玻璃化

在成玻载体(糖类)和保护剂(分子伴侣和脱水蛋白)存在下,蛋白质类生物活性物质可在室温下被玻璃化.这类玻璃态产品在室温下极其稳定,已被用于可在室温下长期储、运的新一代体外诊断试剂盒的生产.有迹象表明,植物种子的休眠即是由于种子内含有全套成玻物和保护剂,使其所含活性分子能在自然条件下玻璃化而高度稳定.     

酶标HBV DNA探针的研制与应用

本实验采用一种非放射性物质——碱性磷酸酶标记乙肝病毒HBV DNA制备分子探针。碱性磷酸酶在苯醌作用下与单链DNA联结,形成DNA和酶的共价复合物,即酶标探针。此探针通过分子杂交与待测DNA结合,与酶的底物作用显色,几小时内可观察结果,其最低检测量约为10pg。用此探针检测乙肝病人血清中的HBV DNA,与~(32)P标记的探针比较,酶标探针可检测出~(32)P标记探针检出率的95.7％。结果表明,所合成的酶标探针具有准确、简便、快速、安全而经济的优点,具有应用前景。     

测定冷藏蔬菜呼吸速率时的温度探讨

在冷藏温度下测定的呼吸速率与将冷藏蔬菜置于室温下立即测定或置于室温下1h后测定的呼吸速率有显著差异。低温下贮藏的蔬菜在室温下测定呼吸速率的结果不能真实地反映贮藏状态下的呼吸速率。冷藏蔬菜呼吸速率的测定应在冷藏温度下进行。     

分子杂交鉴定杆状病毒

利用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus,AcNPV) DNA EcoRI-I片段作为同源探针,在35℃条件下,通过Southern-blot hybridization将斜纹夜蛾核型多角体病毒(Prodenia Iiturs nuclear polyhedrosis virus. PlNPV)多角体蛋白基因定位于其HindⅢ-A片段。以PlNPV DNA HindⅢ-A片段和PlNPV DNA HindⅢ-C片段分别制备探针,在不同的杂交条件下,对PINPV,甘兰夜蛾NPV(Mamestra brassicae nuclear polyhedrosis virus,MbNPV)油桐尺蠖NPV(Buzura suppresseria nuclear polyhedrosis virus,BsNPV)进行了鉴定。结果表明:由A片段制备的探针,在不同的杂交条件下,具有相应不同的非特异性,而由C片段制备的探针则具有严格的特异性。     

菌紫质光循环中间体的时间分辨谱

利用毫微秒时间分辨的吸收变化和微秒的闪光动力学光谱研究了室温下菌紫质光循环中间体的形成过程及衰减过程。实验结果表明,室温下,K_(610)和M_(412)中间体同样出现,L_(550)中间体还不能得到证实,有待于进一步研究。     

利用基因芯片技术筛选HIV-1F亚型基因限制性显示探针

为筛选限制性显示技术制备的HIV 1F亚型基因探针 ,应用基因芯片打印仪将其有序地打印在玻片上制备基因芯片 .在随机引物延伸的过程中进行HIV样品的荧光标记 ,然后与芯片进行杂交 .杂交后清洗玻片并干燥 ,对芯片进行扫描 ,分析各探针的杂交信号 .从中筛选了 14个基因片段作为芯片下一步研究的探针 .实验证明 ,限制性显示技术是一种制备基因芯片探针的实用方法     

家常菜和蔬菜中亚硝酸盐含量的变化

以6种家常菜和6种蔬菜为试验材料,研究在室温和低温（4℃）贮藏条件下以及炒制前后6种样品蔬菜中亚硝酸盐的变化情况。结果表明：在低温和室温条件下储藏12.5h,家常菜和蔬菜的亚硝酸盐含量不会超过4mg/kg的国家标准;叶菜类的亚硝酸盐含量高于根茎类;和室温相比,低温条件能够延迟叶菜的亚硝峰的到来,室温下叶菜的亚硝峰出现在7.5h,低温下叶菜的亚硝峰出现在10h,且亚硝酸盐的含量也少于常温。不同的蔬菜在炒制前后亚硝酸盐的变化不同。通过聚类分析,可以根据亚硝酸盐含量将24个试验样品分为两类。     

一种基于类花菁检测过氧化氢荧光探针的合成

文章以2-甲基苯并噻唑和尼泊金乙酯为原料，合成了一种具有红色荧光的花菁类染料，该染料与4-溴甲基苯硼酸频哪醇酯反应可以生成用于检测过氧化氢的荧光探针。通过紫外和荧光研究该探针在不同溶剂、过氧化氢浓度、黏度条件下检测过氧化氢的响应。研究结果表明。在该实验中，过氧化氢浓度越高、体系黏度越低，探针荧光强度均逐渐降低，同时具有良好的选择性。     

肽核酸探针技术及其在微生物检测中的应用

肽核酸(Peptide Nucleic Acid,PNA)是近十几年发展起来的以中性酰胺键为骨架的脱氧核糖核酸 (Deoxyribonucleic Acid,DNA)类似物,它能够与DNA和RNA特异性地结合从而可以制备PNA探针.与 DNA探针相比,其杂交的稳定性和特异性增加且能在低盐浓度下进行杂交.因此它能够大大提高微生物学检测和医疗诊断的效率和灵敏度.PNA独特的生化属性已逐渐为世人所瞩目,PNA探针技术也得到了迅速发展,尤其是其在微生物检测领域中的应用.     

DiO—C18—（3）介导细胞融合

发现荧光分子探针ＤｉＯ－Ｃ１８－（３）在等渗、室温、无外源Ｃａ＾２＋及ＰＨ７．４的条件下快速介导人红细胞融合。丝氨酸蛋白水解酶抑制剂本甲磺酰氟（ＰＭＳＦ）不能阻断这个过程,ＤｉＯ－Ｃ１８－（３）亦引起Ｌ－９２９（小鼠成纤维细胞瘤）细胞融合。细胞的ＤｉＯ荧光图象显示质膜上存在ＤｉＯ局域浓度很高的结合位点,从细胞及融合体表面伸出一至娄车丝,表明在细胞融合条件下,质膜确实存在一种有力的机制使细胞向外伸出