沙眼衣原体血清型L2体外培养影响因素的研究

研究沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）血清型LGV L2在体外培养的繁殖规律及其影响因素,确定血清型LGV L2在体外培养的最佳生长发育条件。用沙眼衣原体血清型LGV L2分别感染HEp-2细胞、HeLa229细胞、HepG-2细胞、SGC-7901细胞和Vero细胞,在荧光显微镜下计数包涵体形成单位（inclusion fig-ure unity,IFU）和观察培养不同时间后包涵体的形态,比较不同细胞对血清型LGV L2的敏感性及血清型LGVL2在不同细胞内的生长情况。同时分别设DEAE葡聚糖处理组与未处理组,含放线菌酮培养组与不含放线菌酮培养组,比较培养12、24、36和48 h后血清型LGV L2包涵体形态、IFU和Real-Time PCR定量检测血清型LGV L2的核酸量,判断DEAE葡聚糖和放线菌酮对沙眼衣原体血清型LGV L2生长的影响。在感染20 h后,显微镜下观察发现HEp-2、Vero、HepG-2、HeLa和SGC-7901细胞均不同程度肿胀,5种细胞内均可见包涵体,大约40~48 h后包涵体占据整个胞浆。IFU计数和Real-Time PCR结果显示5种细胞中HeLa细胞感染率最高,HepG-2细胞感染率最低,血清型LGV L2在HeLa细胞中生长速度最快。荧光显微镜下计数IFU,发现DE-AE葡聚糖预处理组和对照组中血清型LGV L2的感染率和生长发育没有明显区别,而含放线菌酮培养组中各细胞内血清型LGV L2生长速度较对照组快,Real-Time PCR检测结果显示放线菌酮组各细胞内血清型LGVL2核酸量较对照组高。血清型LGV L2在HeLa细胞中的感染率最高,DEAE葡聚糖对血清型LGV L2的感染没有明显影响,而体外培养时添加放线菌酮有利于血清型LGV L2的生长发育。     

黄芩苷介导PI3K/AKT通路减轻脂多糖诱导的心肌细胞凋亡及炎症反应

为探讨黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞凋亡、炎症及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的调控作用,该研究体外培养大鼠心肌H9C2细胞,将其分为对照组(不做干预)、LPS组(10μg/m L LPS)、实验组(10μg/m L LPS+10、20、40、80μmol/L黄芩苷)、黄芩苷+Y组(10μg/m L LPS+10μmol/L黄芩苷+5μmol/L PI3K/AKT通路抑制剂LY294002)、抑制剂组(10μg/m L LPS+5μmol/L LY294002)和黄芩苷+A组[10μg/m L LPS+10μmol/L黄芩苷+100 ng/mL PI3K/AKT通路激活剂胰岛素样生长因子-I(IGF-I)]。用细胞计数试剂盒-8测定细胞活力;酶联免疫吸附试验检测炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和IL-10的含量; Hoechst33258染色法测定细胞凋亡率; 5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷测定细胞增殖率;蛋白免疫印迹法测定PI3K/AKT相关蛋白、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspas...     

衣原体蛋白的亚细胞定位

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)是一种严格细胞内寄生、有独特发育周期的原核细胞型微生物.CT在宿主细胞浆内增殖,形成光镜可见的典型细胞内包涵体,包涵体为CT在宿主细胞内的生长繁殖提供屏障保护,同时也是CT与宿主细胞进行物质交换和信息传递的门户,CT不仅可从宿主细胞摄取营养物质,还可分泌效应蛋白进入宿主细胞质调节宿主细胞功能.CT基因组DNA序列和功能注释完成后,衣原体蛋白的亚细胞定位、结构和功能的研究已成为衣原体研究领域的热点之一[1-3].在CT与宿主细胞相互作用过程中,Inc蛋白、分泌蛋白等衣原体蛋白可能发挥着重要作用,鉴于蛋白质的亚细胞定位情况往往与其功能密切相关,衣原体蛋白在感染细胞中的定位认识成为其功能研究中的重要环节.     

野黄芩苷对内毒素抑制人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的观察野黄芩苷对内毒素(LPS)抑制人牙周膜细胞的碱性磷酸酶活性的影响。方法原代培养人牙周膜细胞,采用酶动力学方法观察野黄芩苷对LPS抑制人牙周-膜细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果100μg/mL LPS可显著抑制体外培养的人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性。加入0.001-10μg/ml野黄芩苷干预后,对LPS抑制碱性磷酸酶活性有一定的拮抗作用,在1μg/ml时达到高峰。结果 野黄芩苷可能通过拮抗LPS抑制牙周膜细胞碱性磷酸酶的活性,促使牙周膜细胞向成骨细胞分化而利于牙周组织再生修复。     

辛伐他汀通过上调sirt1抵抗氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞衰老

目的:探讨辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞衰老的作用及其可能机制.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,给予不同浓度(0、25、50、100 μg/ml)氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)培养24小时,观察细胞β-半乳糖苷酶染色及SIRT1蛋白表达的变化;给予不同浓度辛伐他汀(1、5、10 μmol/L)预处理内皮细胞l小时后加入100μg/ml ox-LDL培养人脐静脉内皮细胞23小时,检测细胞β-半乳糖苷酶染色及SIRT1蛋白表达的变化.结果:随着ox-LDL作用浓度的增加,细胞内β-半乳糖苷酶染色的阳性细胞百分率逐渐升高,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05),在ox-LDL(100 μg/mll)组达到最高,显著高于ox-LDL(25 μg/ml)组(P＜0.001).而不同浓度ox-LDL处理的细胞内SIRT1的表达较空白对照组相比逐渐下降,ox-LDL(50、100 μg/ml)组SIRT1的表达显著低于ox-LDL(25 μg/ml)组(P＜0.05).10 μmol/L辛伐他汀预处理能明显降低100μg/ml ox-LDL处理的内皮细胞内β-半乳糖苷酶染色的阳性细胞百分率(P＜0.001),并显著抑制细胞内SIRT1的蛋白表达(P＜0.001).结论:辛伐他汀可以抵抗ox-LDL诱导的内皮细胞衰老,可能与增加内皮细胞内SIRT1的表达有关.     

人参皂甙Rg1抗OxLDL诱导内皮细胞凋亡及分子机制

目的 探讨人参皂甙Rg1抑制氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,OxLDL)诱导血管内皮细胞凋亡的作用及其相关分子机制。方法 以体外培养的牛主动脉内皮细胞为模型。分别加入OxLDL200μg/ml(OxLDL组）和OxLDL200μg/ml Rg140μg/ml（Rg1组）;对照组不加任何诱导物,培养24小时后观察细胞形态变化,DNA电泳,TUNEL染色检测细胞有无凋亡及凋亡的程度,Western blot分析各组内皮细胞型一氧化氮合酶（endothelial Nitric Oxide Synthase,eNOS)的表达水平。结果 （1）对照组和OxLDL组血管内皮细胞凋亡比例分别为8%和41.35%;(2)Rg1组血管内皮细胞凋亡比例为13.29%;(3)OxLDL抑制牛主动脉内皮细胞的eNOS表达水平,此抑制作用具有剂量依赖性。人参皂甙Rg1可使被OxLDL抑制的eNOS表达水平回升。结论 （1）OxLDL能诱导血管内皮细胞凋亡。（2）人参皂甙Rg1能抑制OxLDL诱导的血管内皮细胞凋亡。（3）此作用可能与上调内皮细胞的eNOS水平,减轻细胞的脂质过氧化损伤有关。     

黄芩苷对肺癌细胞A549增殖和迁移的作用研究

肿瘤恶化的根本原因是肿瘤细胞的过度增殖和转移,黄芩苷作为一种黄酮类天然药物,对保护血管功能、抑菌、消炎等都具有良好的效果。本研究观察不同浓度黄芩苷对体外培养人肺癌A549细胞的增殖和迁移的作用,探讨黄芩对肿瘤细胞转移的调控作用,以期开发黄芩苷作为肿瘤抑制药物的重要潜能。将0μm/L、20μm/L、40μm/L、60μm/L、80μm/L和100μm/L的黄芩苷处理细胞6 h,采噻唑蓝(MTT)、Tranwell小室迁移、显微形态观察等细胞学方法检测不同浓度的黄芩苷对细胞增殖和迁移的影响。结果显示,与对照组相比,不同浓度的黄芩苷均能抑制肺癌细胞的增殖和迁移,且抑制作用呈剂量依赖效应,80μm/L和100μm/L的黄芩苷能显著抑制肺癌细胞的增殖效率(p0.01)。我们得出这样的结论,黄芩苷对肺癌细胞的增殖和迁移具有抑制作用,且抑制效果与药物使用剂量正相关,黄芩苷对于肿瘤治疗效果的研究具有重要意义,有望成为高效抑制肿瘤发生的候选药物。     

黑果腺肋花楸花色苷对人皮肤成纤维细胞紫外辐射损伤的保护作用

为了探讨黑果腺肋花楸花色苷对紫外辐射所致人皮肤成纤维细胞氧化损伤的保护作用,将体外培养的人皮肤成纤维细胞分为对照组、辐射组和辐射给药组。采用MTT法检测不同浓度花色苷添加量对细胞增殖的保护作用,以选择最优添加浓度。采用化学荧光法检测细胞活性氧(ROS)含量,ELISA法检测细胞MMP-1分泌水平。结果表明:UVA辐照剂量为10 J/cm2条件下,与辐射组相比,MTT法显示花色苷添加组浓度为125μg/m L对损伤细胞增殖保护作用有极显著的提高(P0.01),同时,125μg/m L花色苷添加组能够显著降低辐射损伤后细胞ROS含量以及MMP-1分泌水平(P0.01)。由此可见,适宜浓度的黑果腺肋花楸花色苷能够降低细胞ROS含量及MMP-1分泌水平,从而对辐射损的细胞起到一定的保护作用。     

黄芩苷对血管平滑肌细胞增殖的调控作用及相关信号通路研究

血管平滑肌细胞(VSMC)过度增殖是多种血管疾病发生的根本原因,黄芩苷作为一种传统植物天然药物,具有抗菌、消炎以及保护血管等多种功能。本研究采用细胞学及分子生物学手段,通过CCK-8法检测不同浓度的黄芩苷(0μmol/L,50μmol/L和100μmol/L)对VSMC增殖的作用,同时测定增殖细胞核抗原PCNA的转录水平,进一步对VSMC增殖进行基因水平上的验证。同时,对MAPK信号通路中的关键因子ERK的表达量进行定量检测,分析黄芩苷调控VSMC增殖的信号通路。结果显示黄芩苷对VSMC增殖具有抑制作用,且呈药物剂量依赖效应;此外,VSMC中ERK的表达水平也随黄芩苷使用浓度增大而降低,从而推测黄芩苷可能通过调控ERK介导的相关信号途径实现对VSMC增殖的阻抑,达到防止血管发生病变的目的。此研究对保护血管功能和开发治疗血管疾病新药物具有积极的意义,也为代谢工程在天然药物开发方面的应用提供理论依据和实践基础。     

褪黑素对脂多糖诱导血管内皮细胞损伤的保护机制研究

目的：研究褪黑素（melatonin,MLT）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用及其机制探讨。方法：不同浓度的褪黑素作用于体外培养的内皮细胞脂质过氧化损伤模型,实验分为5组,即正常对照组（Ctrl）,脂多糖（LPS）氧化损伤组：在培养基中加入2mmol／L的LPS诱导损伤4h;LPS加MLT低剂量（200t~mol／L）组、中剂量（400ixmol／L）组、高剂量（600txmol／L）gai。采用MTT法观察MET对HUVECs活性的影响;用双波长荧光分光光度法测定HUVECs细胞内游离钙离子浓度;检测各组内皮细胞匀浆中丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH·Px）活性;用ELISA法测定培养的细胞上清液中白细胞介素6（IL．6）表达的变化;并测定细胞凋亡率。结果：①LPS作用后血管内皮细胞损伤明显,细胞增殖减少,细胞培养上清液和细胞匀浆中MDA含量、细胞内钙离子浓度和IL．6均升高,SOD、GSH-Px活性下降,凋亡率可达38．9±1．1％,均与正常对照组有统计学差异（P〈0．01）;②加入MET可明显减轻LPS对抗氧化酶SOD、GSH—Px的影响,同时MDA含量、细胞内钙离子浓度和几一6均明显下降,并显著减少凋亡细胞数量,各指标差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：褪黑素可保护和修复LPS引起的血管内皮细胞损伤,其作用途径可能与保护细胞的线粒体,提高了该细胞的抗氧化酶活性,降低细胞内钙离子浓度作用有关。     

黄芩配伍川贝母后黄芩中主要化学成分含量变化及抗肺炎作用研究

本文旨在探究黄芩川贝母不同比例配伍后对黄芩中主要化学成分含量影响及等比配伍后抗肺炎作用.将黄芩川贝母按3∶0、3∶1、3∶2、3∶3、2∶3、1∶3、0∶3比例配伍后,水提取,高效液相色谱法测定黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素含量.选择健康ICR小鼠36只,随机分为6组,分别为空白组、LPS组、阳性药组、黄芩组、川贝...     

离体大鼠主动脉内皮细胞氧化应激损伤模型的建立及评价

目的：建立离体大鼠主动脉内皮细胞氧化应激损伤模型,为细胞损伤及细胞凋亡的调控研究提供基础。方法：大鼠断头处死在无菌条件下开胸取主动脉,经组织块培养法后传代培养得到充足主动脉内皮细胞,接种于96孔板或爬片培养,每组设6个复孔,用于之后的各项试验检测。以不加H₂O₂的组作为对照组,以不同浓度的H₂O₂（100、200、300、400、500 μmol/L）作用于内皮细胞相同时间12 h,来筛选最佳作用浓度;依据结果以相同浓度的H₂O₂（100和200 μmol/L）分别作用不同时间（3、6、9、12及24 h）,来筛选最佳作用时间。通过免疫荧光法鉴定、细胞存活率检测、生化指标（LDH-L、NO、MDA、SOD）检测及内皮细胞凋亡指数等变化,评价及验证模型的建立。结果：对细胞内Ⅷ型胶原抗原进行免疫荧光染色后鉴定血管内皮细胞培养成功;在12 h的相同作用时间下,随着H₂O₂浓度的加大,细胞存活率呈显著下降（77.63%±5.20%~40.90%±2.10%）;相同浓度（100 μmol/L组和200 μmol/L组）随着作用时间的增加,细胞存活率呈显著递减（100 μmol/L组为86.83%±12.11%~44.26%±5.70%,200 μmol/L组为78.28%±11.98%~34.45%±5.87%）;以H₂O₂浓度为100 μmol/L作用3、6、9、12及24 h,培养液中生化指标在9 h后LDH-L与MDA呈显著递增,NO与SOD呈显著递减;在H₂O₂浓度为100 μmol/L与作用时间12 h的条件下,流式检测结果显示内皮细胞凋亡率为16.92%±2.37%,显著高于对照组2.68%±0.47%（P<0.01）; TUNEL检测内皮细胞凋亡指数为17.65%±2.36%,显著高于对照组的3.23%±0.57%（P<0.01）。结论：该方法成功建立了体外血管内皮细胞氧化应激损伤模型,探索了轻重适度的诱导细胞损伤和细胞凋亡的造模方法,可以成为开展多种血管内皮细胞损伤及凋亡调控机制研究的基础。     

二苯乙烯苷对氧化诱导内皮细胞凋亡及Caspase-3和PARP表达的影响

为研究二苯乙烯苷对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响并初步探讨二苯乙烯苷抗凋亡的可能机制,采用不同浓度H2O2和二苯乙烯苷处理内皮细胞24 h,以MTT法检测细胞生长活力、Hoechst33258染色观察细胞形态、流式细胞仪检测凋亡率等方法筛选造模内皮细胞凋亡的H2O2浓度和二苯乙烯苷最佳的抗内皮细胞凋亡作用浓度.RT-PCR、Western-blot分别检测Caspase-3、PARP mRNA及蛋白质的表达.结果发现,与空白对照组相比,300μmol/L H2O2作用后,内皮细胞增殖明显受到抑制,Hoechst33258染色可见大量凋亡细胞,细胞凋亡率显著增加,流式细胞仪检测出明显的凋亡峰,Caspase-3和多聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶(PARP)的表达量显著增加.经二苯乙烯苷处理后,随着二苯乙烯苷浓度增加,细胞的增殖率随之增加,凋亡细胞数减少,凋亡率逐渐降低,与H2O2组比较,10μmol/L的二苯乙烯苷能够显著提高细胞增殖率,降低细胞凋亡率,并显著减少Caspase-3和PARP表达.以上结果表明,二苯乙烯苷能够抑制由H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,增加细胞生长活性,降低细胞凋亡率,其作用机制可能与下调Caspase-3和多聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶(PARP)的表达有关.     

冰片提取物对沙眼衣原体感染HeLa细胞CT703及CT259表达的影响

目的:探究冰片提取物对沙眼衣原体感染后的He La细胞模型CT703和CT259表达的影响。方法:将成功建立的40例感染L2血清型沙眼衣原体的人宫颈癌上皮(He La)细胞模型随机分成A、B两组,分别添加冰片提取物和等剂量生理盐水。观察感染后He La细胞模型的包涵体数目及大小、RNA抽提结果完整性以及CT70与CT259的表达变化。结果:染色后的40例受沙眼衣原体感染的He La细胞模型体内均发现包涵体,在同一时间点B组细胞内包涵体比A组大,且数目比A组多(P0.05);两组提取的总RNA的OD值均在1.8~2.0之间,通过RNA凝胶电泳结果可清楚发现28S、18S及5S条带;同一时间点CT259和CT703扩增产物的平均灰度值比较,A组感染后He La细胞模型样本基因表达量低于B组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:冰片提取物能够有效降低经沙眼衣原体感染的He La细胞模型中CT703与CT259基因表达量。     

黄芩苷对酯多糖损伤AC16心肌细胞的保护作用及机制研究

本研究主要探讨黄芩苷对酯多糖损伤AC16心肌细胞的保护作用。设置对照组、LPS组、黄芩苷高、中、低剂量组、黄芪总黄酮组,共同培养6 h,检测细胞生存率及生存状况;荧光素法检测细胞内ATP浓度变化; Western blot检测各组细胞中Cyt C、Apaf-1、caspase-3、caspase-9表达。结果发现与LPS组相比,黄芩苷高、中、低剂量组及黄芪总黄酮组细胞生存状况及生存率明显改善,细胞内ATP浓度升高,凋亡率降低,细胞内Cyt C、Apaf-1、caspase-3及caspase-9表达均降低。说明黄芩苷对酯多糖损伤的AC16心肌细胞具有保护作用,其机制可能与降低Cyt C/Apaf-1/caspase-3/caspase-9通路表达有关。     

鹦鹉热衣原体的B598_0590基因编码包涵体膜蛋白

目的:鹦鹉热衣原体的B598_0590基因与沙眼衣原体的毒力基因CT135同源,本研究旨在分析该基因的表达和定位。方法:生物信息学方法分析B598_0590基因的进化地位,比较B598_0590蛋白和沙眼衣原体毒力蛋白CT135的氨基酸疏水特征;重组表达、纯化鹦鹉热衣原体的B598_0590蛋白,免疫小鼠制备抗血清;共聚焦免疫荧光观察鹦鹉衣原体在正常培养条件和使用Lpx C抑制剂时B598_0590基因的表达和定位。结果:衣原体属内12个种的基因组均含有CT135同源基因,它们编码的蛋白质有相似的疏水特征;B598_0590与CT135的氨基酸同源性为21%;B598_0590的免疫荧光染色特征与包涵体膜蛋白Inc A相似,浓染包涵体膜;Lpx C抑制剂可抑制网状体的分裂、包涵体的生长及网状体向原体转化,包涵体膜蛋白的染色呈现典型的空泡结构。结论:Lpx C抑制剂可用于鉴定未知的鹦鹉热衣原体包涵体膜蛋白;鹦鹉热衣原体的B598_0590基因编码此前尚未鉴定的包涵体膜蛋白。     

黄芩苷对巨细胞病毒神经系统感染小鼠学习记忆功能及海马中细胞凋亡的调节作用

新生儿感染巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)能够引起中枢神经系统不可逆损害,遗留神经功能缺损,危害较大,但缺乏有效的防治手段。黄芩苷是中药材黄芩中的黄酮类活性物质,具有抗凋亡、抗氧化、抗炎等功能,对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤具有保护作用。基于此,本研究将黄芩苷用于小鼠巨细胞病毒(Mouse cytomegalovirus,MCMV)感染新生KM小鼠的干预,并探究黄芩苷对MCMV感染后中枢神经损害的保护作用。为研究黄芩苷对MCMV神经系统感染小鼠学习记忆功能及海马中细胞凋亡的调节作用,本研究将新生KM小鼠随机分为对照组、MCMV组、黄芩苷组、黄芩苷+U0126组,后三组腹腔注射MCMV病毒悬液以获得MCMV神经系统感染模型,MCMV组给予生理盐水灌胃,黄芩苷组给予黄芩苷灌胃,黄芩苷+U0126组则给予黄芩苷灌胃及U0126腹腔注射。比较四组学习记忆功能指标及海马组织中MCMV载量、细胞凋亡率、凋亡基因表达量、信号通路基因表达量。结果显示:与对照组比较,MCMV组小鼠的逃避潜伏期明显延长(P0.05),穿平台次数明显减少(P0.05),海马组织中MCMV-DNA载量、细胞凋亡率及bax、cleaved-caspase-3的表达量明显增加(P0.05),海马组织中bcl-2、p-MEK1、p-ERK1/2的表达量明显降低(P0.05);与MCMV组小鼠比较,黄芩苷组小鼠的逃避潜伏期明显缩短(P0.05),穿平台次数明显增多(P0.05),海马组织中MCMV-DNA载量无明显变化(P0.05),海马组织的细胞凋亡率及bax、cleaved-caspase-3的表达量明显降低(P0.05),海马组织中bcl-2、p-MEK1、pERK1/2的表达量明显增加(P0.05);与黄芩苷组比较,黄芩苷+U0126组小鼠的逃避潜伏期明显延长(P0.05),穿平台次数明显减少(P0.05),海马组织中MCMV-DNA载量无明显变化(P0.05),海马组织的细胞凋亡率及bax、cleaved-caspase-3的表达量明显增加(P0.05),海马组织中bcl-2、p-MEK1、p-ERK1/2的表达量明显降低(P0.05)。综上,黄芩苷能够改善MCMV神经系统感染小鼠的学习记忆功能,通过激活MEK1/ERK1/2途径抑制海马中细胞凋亡是其可能的分子机制。     

假定蛋白CT440在沙眼衣原体感染细胞中的定位研究

包涵体膜蛋白在沙眼衣原体致病过程中发挥重要的作用.为确定假定蛋白CT440在沙眼衣原体感染细胞中的定位及特征,本研究采用PCR方法从D型沙眼衣原体的基因组中扩增Ct440基因,克隆入pGEX-6p原核表达载体构建pGEX-6p/Ct440原核表达重组体,重组体转化到XL1-blue大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白GST-CT440.纯化后的CT440融合蛋白免疫小鼠制备抗体,间接免疫荧光(IFA)和Western blot测定抗体的特异性.特异性抗体用于分析CT440蛋白在衣原体感染细胞内的定位、表达时相特征及其对衣原体感染的影响.结果表明,CT440蛋白定位于沙眼衣原体包涵体膜上,为沙眼衣原体包涵体膜蛋白;该蛋白在衣原体感染12h后开始表达,直至持续到整个感染周期;转基因在胞浆表达的CT440融合蛋白不影响其后的衣原体感染.本实验为深入研究衣原体与宿主细胞间的相互作用,阐明衣原体致病机制提供了重要的实验依据.     

沙眼衣原体CT058蛋白在感染细胞中的定位分析

分析沙眼衣原体CT058蛋白在感染细胞中的定位.克隆表达CT058蛋白;纯化的CT058融合蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体;间接免疫荧光法对CT058蛋白在沙眼衣原体感染细胞中的定位进行分析;Western blot检测CT058蛋白在原体和网状体中的表达情况.间接免疫荧光染色实验显示CT058蛋白位于包涵体内;鼠抗GST-CT058抗体与GST-CT058融合蛋白吸附后特异性染色消失,而与GST-CT232融合蛋白吸附后仍然可见GST-CT058抗体的包涵体染色特征;Western blot证实CT058蛋白在纯化的原体和网状体上均有表达.CT058蛋白定位于沙眼衣原体感染细胞的包涵体内.     

中药M对兔内皮细胞增殖影响的初步研究

目的　旨在探讨中药M对兔内皮细胞增殖的影响 ,试图阐明单味中草药品种M的活性成分促进血管生成的生物学机制。方法　建立兔胸主动脉内皮细胞体外培养模型 ,制备不同浓度的兔中药血清加入 96孔内皮细胞培养板 ,以MTT比色法测定内皮细胞增殖情况。结果　生脉素能够促进内皮细胞的增殖 (P <0 0 5 )。结论　中药M可能通过促进内皮细胞的增殖和分裂而达到其促进血管生成的作用