酿酒酵母海藻糖—６—磷酸合成酶基因克隆及植物表达载体的构建

从耐热性极强的酿酒酵母菌株ＡＳ２．１４１６中分离纯化出总ＲＮＡ和mRNA,以ＡＭＶ逆录酶合成cDNA,采用保守引物,从该cDNA中扩增克隆出tps1基因,对该基因的全序列分析表明,该基因含有１５０７个核苷酸,与国外报道相关基因的同源性达９９．６５。利用ＢamＨⅠSacⅠ切点将tps1基因插入植物表达载体pBin438多克隆位点上,得到tps1基因植物表达载体重组质粒。     

磷酸脂酶C—γ的信号传递研究进展

信号分子磷脂酶C－γ（PLC－γ）被蛋白酪氨酸酶（PTK）激活催化水解磷脂酰肌醇4,5－二磷酸（PIP2）生成第二信使分子肌醇三磷酸（IP3）和二酰基甘油（DAG）,参与受体酪氨酸激酶（RTK）介导的细胞分列、抗原与免疫细胞受体结合引起免疫反应及卵细胞受精等过程中的信号传递。     

番茄果实中焦磷酸：D—果糖—6—磷酸 1—磷酸转移酶的结构和动力学特性

比较了番茄果实和红果实中焦磷酸－Ｄ－果糖－６－磷酸 １－磷酸转移酶的两种酶型的结构和动力学特性。绿果实中大分子酶型Ｑ２在酶蛋白量和酶活力方面均占绝对优势,而在红果实中小分子酶型Ｑ１起主导作用。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶扫描结果显示绿Ｑ２和红Ｑ２的亚基组成不同。组成该酶的α－亚基和β－亚基的化学裂解肽谱表明两亚基差异很大,同时证明构成Ｑ１和Ｑ２的β亚基具有相同的肽谱。分析Ｑ１和Ｑ２的β亚基具有相同的肽谱。     

番茄果实中焦磷酸：果糖—6—磷酸1—磷酸转移酶的两种…

番茄果实由绿转红的过程中,焦磷酸：果糖－６－磷酸转移酶的酶型发生转化。在体外通过胰蛋白酶处理部分纯化的番茄绿果实中ＰＦＰ来探讨酶型转化的原因,蛋白免疫印渍结果证实ＰＦＰ的α－亚基比－更容易受到胰蛋白酶的降解,这也是ＰＦＰ经胰蛋白酶处理后酵解与生糖活性下降的原因,然而ＰＦＰ的亚基经尿素解离后,以胰蛋白酶处理的蛋白免疫印渍分析却表明ＰＦＰ的两种亚基均被胰蛋白酶更加有效地降解,显然α－亚基在ＰＦＰ的高级     

玉米果糖—6—磷酸，2—激酶／果糖—2，6—二磷酸酶基因的结构与表达分析

通过RT-PCR,结果RACE技术,得到了玉米（Zea maysL.)果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶的全长cDNA克隆。命名为mF2KP,氨基酸序列同源性比较发现,mF2KP蛋白可以分为两个部分;C端包含高度保守的催化功能区。N端为植物中特有的多肽,将mF2KP基因中一段包含完整催化功能区的片段在大肠杆菌（Escherichia coli)中表达,融合蛋白具有果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶活性,Northern杂交证明在种子活力不同的幼苗中,mF2KP的转录水平存在明显差异。种子活力越高,幼苗中mF2KP的转录水平越低。     

甘油醛-3-磷酸脱氢酶与辅酶类似物ATP及底物磷酸结合特性的晶体学研究

气相扩散共晶生长法培养出Ｐ．ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ龙虾肌ＡＴＰ－Ｄ－甘油醛－３－磷酸脱氢酶（ＡＴＰ－ＧＡＰＤＨ）的晶体。用同步辐射Ｘ光源－磷光储屏－Ｗｅｉｓｓｅｎｂｅｒｇ照相机系统收集了一套２．０分辨率的衍射数据。用同晶差值傅立叶法解析了其结构。精化后的结构模型最终Ｒ因子为０．１９７,与标准键长、键角的均方根偏差为０．０１６°和３．２０°。ＰｖＡＴＰ－ＧＡＰＤＨ结构总体上和Ｐｖａｐｏ－ＧＡＰＤＨ相似。ＡＴＰ分子的占有率较低,并表现出一定程度的无序性,提示ＡＴＰ与酶蛋白结合的稳定性较低,表明ＮＡＤ＋的尼克酰胺核苷部分与蛋白质分子的作用在辅酶与蛋白质的稳定结合中起关键作用。ＡＴＰ－ＧＡＰＤＨ中每个亚基只有一个磷酸结合位点（Ｐｉ）。认为无机磷酸结合位点Ｐｉ的形成不依赖于ＮＡＤ＋,而底物磷酸结合位点ＰＳ的形成则依赖于ＮＡＤ＋的存在。     

丙糖磷酸异构酶、果糖—1，6—二磷酸醛缩酶及果糖—1，6—二磷酸酶的共表达

致力于建立一条控制或降低大气中CO2浓度的途径,选择对 进行代谢工程以便改进其光合固定CO2的效率。作为研究的初始阶段,将编码丙糖磷酸异构酶、果糖－1,6－二磷酸醛缩酶及果糖－1,6－二磷酸酶的3个基因构建进一个由启动子trc控制的表达质粒pTrcFAT,成功地在大肠杆菌中实现了上述3个基因的活性共表达。活性测定结果显示：从1L培养液获得的破菌上清液每分钟可以催化二羟丙酮磷酸（DHAP）转化成700μmol果糖－6－磷酸。在此基础上进一步构建了这3个基因共表达的大肠杆菌－蓝藻穿梭表达质粒,也在大肠杆菌中实现了活性表达,当外泊基因的操纵子与载体质粒以大于1：1的比例进行构建时,可显著提高外源基因的表达量及相应的的酶活性。     

水稻葡萄糖-6-磷酸脱氢酶cDNA的电子克隆

电子克隆是基因克隆的新策略,以小麦胞质葡萄糖－6－磷酸脱氢酶cDNA(Tagpdl克隆）序列为信息探针,在GenBank水稻nr数据库中找到高度同源的水稻基因组序列,通过人工序列拼接及RT-PCR确认得到了水稻该基因的全长cDNA序列,命名为OsG6PDH,OsG6PDH与小麦Tagpdl克隆的DNA一致率为88％,推导的氨基酸序列与小麦,番茄,烟草的胞质葡萄糖－6－磷酸脱氢酶基因的一致率分别为89％,79％,80％,经RT－PCR表达谱分析,OsG6PDH在水稻幼穗,胚,根,叶中都有表达,在幼穗与根中表达略高,另外,讨论了利用水稻基因组信息的电子克隆方法克隆水稻功能基因的可行性。     

龙虾甘油醛-3-磷酸脱氢酶结构中的氢键

甘油醛－３－磷酸脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）是一种具有别构作用的寡聚酶。根据Ｘ射线晶体学研究得到的中国南海龙虾Ｐ．ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒｈｏｌｏ－ＧＡＰＤＨ高分辩率三维结构显示复杂的氢键结构,对各种类型氢键的分布和几何性质进行了统计分析。这个寡聚蛋白氢键的特性总体上与单体蛋白类似。几乎所有位于亚基间界面的极性侧链都能形成氢键,并满足能量上有利的几何学要求     

酵母K.fragilis甘油醛—3—磷酸脱氢酶基因的克隆

根据已克隆的马克斯克鲁维酵母（Ｋ．ｍａｒｘｉａｕｓ）,乳酸克鲁维酵母（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）与酿酒酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｅｉａｅ）甘油醛－３－磷酸脱氢酶（ＧＡＰ）基因的核苷酸序列同源性分析设计ＧＡＰ探针,以该探针与脆壁克鲁维酵母（Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）ＣＢＳ３９７基因文库进行原位杂交,得到一阳性克隆ｐＧ１并通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交实验得以证实。该克隆所携带的ＧＡＰ１基因的部分序列也已被测定。利用     

植物的磷酸乙醇胺甲基转移酶

磷酸乙醇胺甲基转移酶(PEAMT)是催化磷酸乙醇胺(P-EA)甲基化,最终合成磷酸胆碱(P-Cho)的关键酶。文章就近年来植物中PEAMT的结构、性质、功能、表达特性、分子生物学和基因工程的研究进展作了概述。     

碱性磷酸酶底物的研究——兼介绍一种新底物: 萘酚AS-OL磷酸

本文研究了免疫组织化学方法中碱性磷酸酶（ＡＰ）的显色系统。本文以人扁桃体的石蜡切片为材料,以ＣＤ２０为标记,二抗为生物素标记的兔抗鼠抗体,选择了５种萘酚磷酸（ｎａｐｈｔｈｏｌＡＳ－ＯＬｐｈｏｓｐｈａｔｅ,ｎａｐｈｔｈｏｌＡＳ－ＧＲｐｈｏｓｐｈａｔｅ,ｎａｐｈｔｈｏｌＡＳ－ＴＲｐｈｏｓｐｈａｔｅ,ｎａｐｈｔｈｏｌＡＳ－ＭＸｐｈｏｓｐｈａｔｅ和ｎａｐｈｔｈｏｌＡＳ－ＢＩｐｈｏｓｐｈａｔｅ）与９种重氮化合物（ｆａｓｔｒｅｄＴＲｓａｌｔ,ｆａｓｔｂｌａｃｋＫｓａｌｔ,ｆａｓｔｂｌｕｅＢＢｓａｌｔ,ｆａｓｔｂｒｏｗｎＲＲｓａｌｔ,ｆａｓｔｓｃａｒｌｅｔＲｓａｌｔ,ｆａｓｔｂｌｕｅｓａｌｔＢＮ,ｆａｓｔｂｌｕｅＢ,ｆａｓｔｄａｒｋｂｌｕｅＲｓａｌｔ,ｆａｓｔｒｅｄｖｉｏｌｅｔＬＢｓａｌｔ）以及新品红为ＡＰ显色底物,相互配伍,根据形成的一系列显色反应,比较研究了不同的底物对。研究结果表明：在５种萘酚磷酸中,ｎａｐｈｔｈｏｌＡＳ－ＯＬｐｈｏｓｐｈａｔｅ具有良好的显色敏感性,当一抗为１∶１０００时,与常用ｎａｐｈｔｈｏｌＡＳ－ＢＩｐｈｏｓｐｈａｔｅ一样,具有较强的显色反应;该底物还具较好的配伍性,能与新品红和ＦａｓｔＢｌｕｅ     

黑子南瓜甘油-3-磷酸酰基转移酶基因的克隆及序列分析

依据国外报道的南瓜甘油－３－磷酸转酰酶（ＧＰＡＴ）基因的ｃＤＮＡ序列合成相应引物,用ＲＴ－ＰＣＲ技术,成功地分离了黑子南瓜（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｆｉｃｉｆｏｌｉａ）ＧＰＡＴ基因的ｃＤＮＡ片段,并亚克隆到了ｐＧＥＭ－Ｔ载体系统的多克隆位点上,序列分析表明黑子南瓜ＧＰＡＴ基因的ｃＤＮＡ序列及递推的氨基酸序列与南瓜（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｍｏｓｃｈａｔａ）相比分别具有９８％和９６５％的同源性。在１１８８ｂｐ中有２２个核苷酸发生变化,导致１３个氨基酸的改变