东方田鼠乳酸脱氢酶同工酶的研究

目的研究乳酸脱氢同工酶在3种东方田鼠不同器官的分布.方法以大鼠和小鼠作对照,用聚丙烯酰胺凝胶电泳对3个不同地区的东方田鼠(Microtusfortis)血清、红细胞、肝脏、肾脏、肺中乳酸脱氢酶(LDH)同工酶进行分析.结果东方田鼠血浆中只有LDH5,血清中湖南洞庭湖地区、宁夏青铜峡地区的东方田鼠也只有LDH5,而东北地区的东方田鼠则含有LDH1和LDH5,3个地区的东方田鼠肾脏和肺中都有5种LDH同工酶,肝脏中除东北地区的东方田鼠含5种LDH同工酶外,其余两种东方田鼠均以LDH5为主(LDH5占95%以上).结论东北地区东方田鼠乳酸脱氢酶同工酶谱与其他两地的东方田鼠不相同.     

东方田鼠骨髓基因池的构建及抗日本血吸虫抗性相关基因的筛选

利用表达克隆法,从东方田鼠骨髓细胞中克隆出抗日本血吸虫抗性相关基因．首先提取高质量的mRNA,逆转录成cDNA,将cDNA与哺乳动物细胞瞬时表达载体pcDNA1．1／Amp连接,建立表达cDNA文库;将cDNA文库分成A—H8个基因池,转染HEK293细胞,48h后收集培养上清,获得条件培养基．将条件培养基与日本血吸虫童虫一起培养,观察杀虫效应,取对童虫抑制作用最强的基因池E再分成8个亚基因池E1-8,分别转染HEK293细胞,并将条件培养基与血吸虫童虫一起培养,获得具有明显抑制血吸虫童虫活性的亚基因池E77,按上述方法反复进行筛选,直到获得有抑制作用的单个克隆,该技术的建立为克隆东方田鼠抗日本血吸虫抗性相关基因以及研究其作用机制奠定基础．     

东方田鼠室内繁殖与生长发育观察

目的　探寻室内东方田鼠的繁殖与生长发育规律。方法　以F4代鼠及其仔代(F5)为对象,分别观察其繁殖与生长发育情况。结果　室内东方田鼠一年四季均具有繁殖能力,春(3～4月)秋(10～11月)两季为繁殖高峰期;雌雄单一配对比多性比配对的母鼠繁殖率明显提高;母鼠怀孕期20～21d,窝产仔数3～11只,平均(4.8±1.5)只,初生重2.5～4.4g;幼鼠3　d龄耳壳全部竖立,6～8d龄被毛长全,7～11d龄开眼,10～11d牙齿长齐;15d龄左右具有采食能力,20d龄可完全断奶;60～70d龄可见个别雌鼠阴门开孔,75～90d龄可见多数雌鼠阴门开孔和雄鼠睾丸明显下位;3月龄后体重、身长增长不显著。结论　开放式(普通级)饲养环境下,室内东方田鼠的繁殖季节、窝产仔数及初生重与野生东方田鼠基本相似;种群密度、性比对雌鼠的繁殖率有明显影响;2～3月龄为性成熟期,3～4月龄为体成熟和初配时期。但成熟时间存在个体差异,同时受饲料营养和环境因素的影响。     

东方田鼠微卫星标记的富集筛选与初步应用

根据生物素与链霉亲和素的亲和原理, 利用磁珠富集法筛选东方田鼠(Microtus fortis)微卫星分子标记。链霉亲和素磁珠捕获生物素标记的微卫星探针, 然后与连有接头的单链限制性酶切片段复性结合, 获得含有微卫星的单链片段, PCR扩增形成双链, 连接T载体并转化感受态细胞, 得到东方田鼠微卫星富集文库。随机挑选70个阳性克隆, 经测序分析, 获得微卫星序列92个。设计合成27对微卫星引物并成功筛选出21对可用引物, 取其中10对引物, 荧光标记后对3个人工驯养及野生东方田鼠种群进行遗传多样性分析。结果显示, 文章所构建的东方田鼠微卫星文库的阳性克隆率较高, 初步筛选的10个微卫星标记均为具有高度多态性的微卫星标记。在3个东方田鼠种群中, 野生湖南种群的观测等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)和多态信息含量(PIC)均最高, 人工驯养的湖南种群次之, 人工驯养的宁夏种群最低。     

食物蛋白含量和限食对雌性东方田鼠生理特性的影响

为了研究食物蛋白含量和限食对雌性东方田鼠生理特性的影响,实验以成年雌性东方田鼠为对象,在控制其他因子一致的条件下,依据食物条件设置4个处理组:20％蛋白质+自由取食、20％蛋白质+70％限食、10％蛋白质+自由取食、10％蛋白质+70％限食.经过4周的食物驯化,测定了动物体重、动情周期、雌激素(雌二醇、孕酮、卵泡刺激素)和内脏器官(脾脏、肝脏、肾脏、子宫)湿重等指标.结果发现:(1)限食70％使东方田鼠体重减少,动情期缩短,脾脏、肝脏、肾脏及子宫湿重均显著减轻.(2)10％蛋白含量降低了脾脏湿重和肝脏湿重,但未显著影响体重、肾脏湿重和子宫湿重.(3)蛋白和限食均未影响雌二醇、孕酮、卵泡刺激素的含量及动情周期的长短.实验结果表明,在食物资源不理想的情况下,成年雌性东方田鼠通过降低体重来维持基本生存,内脏器官重量也相应地减轻,但是与繁殖相关的生理特性变化不显著.相对与食物蛋白含量,可获得的食物量的多少是引起东方田鼠生理变化的主要因素.实验结果反映出食物资源对成年雌性东方田鼠的生理特性产生了影响,但这些影响对其繁殖行为的调控强度及季节性的种群波动的作用还需结合其他相关方面做进一步探究.     

蛋白质,纤维素和单宁酸对东方田鼠摄食的影响

食物选择性是动物对取食生境中现存的食物种类做出的选择,是一个复杂的生态适应过程,与动物自身生理状及环境中食物的可利用量密切相关。单宁酸、蛋白质和纤维素是影响植食性动物食物选择的重要因素。在控制其它营养因子的条件下,设置10%蛋白质+2.25%纤维素+3%单宁酸(食物1)/6%单宁酸(食物2)和20%蛋白质+4.51%纤维素+3%单宁酸(食物3)/6%单宁酸(食物4)4个处理组,通过自助餐式选择笼内的喂养实验,测定单宁酸、蛋白质和纤维素对东方田鼠食物选择的影响。结果表明,东方田鼠对3%单宁酸处理组食物摄食量显著高于对6%单宁酸处理组(P0.001);但东方田鼠对6%单宁酸食物摄食量依蛋白质浓度变化,在20%蛋白质处理组的摄食量显著高于10%蛋白质处理组(P0.05);在含3%单宁酸处理组中,纤维素成为影响东方田鼠摄食的主要因素,而当单宁酸浓度增加到6%时,纤维素和蛋白质对东方田鼠摄食影响差异不显著;总之,单宁酸、蛋白质和纤维素对东方田鼠的摄食都产生重要影响,单宁酸对东方田鼠食物选择的影响程度最大,纤维素次之,蛋白质对东方田鼠摄食的影响会随单宁酸浓度的升高而增大。     

湖南等三地区东方田鼠遗传特性的分析比较

用染色体G带核型分析、生化位点、随机扩增多态性DNA(RAPD)标记等方法,对湖南洞庭湖湖滨、宁夏青铜峡市农田和黑龙江伊春市金山屯草甸3个地区的东方田鼠遗传特性进行了分析。结果表明,湖南和宁夏地区东方田鼠染色体数均为2N＝52,黑龙江东方田鼠染色体数则为2N＝42;生化位点结果显示3个地区的东方田鼠均呈遗传非均一性;湖南、宁夏和黑龙江鼠的个体间RAPD遗传距离分别为0．244（0．143—0．353)、0．226(0．161—0．294)、0．541(0.357—0．692)。湖南和宁夏两地区鼠种群间的遗传距离为0．367,湖南和宁夏鼠杂交一代与其亲代的RAPD遗传距离在0．310以下;但黑龙江鼠与湖南和宁夏鼠种群问的遗传距离分别为0．619和0．633。总的表明,3个地区的东方田鼠均呈遗传非均一性,但湖南与宁夏鼠在染色体、生化位点和RAPD标记等方面都具有相似性,并可杂交,而黑龙江鼠与其它两地的鼠不能杂交,且黑龙江鼠在遗传特性方面与前二地鼠有很大差异,因而后的“种”级分类地位值得进一步研究。     

东方田鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及生物学特性

目的对影响东方田鼠胚胎成纤维细胞（MfEF）分离和培养的因素进行探索,并观察其生物学特性。方法取室内繁殖饲养不同胎龄的东方田鼠胚胎分离成纤维细胞,通过原代和继代培养,分析比较不同胎龄、不同血清浓度、不同胰蛋白酶浓度等因素对MfEF分离及培养的影响,观察MfEF的生长形态及其生物学特性。结果 MfEF为贴壁型生长,细胞形态多样,呈梭形、不规则多边形;采用0.125%的胰蛋白酶室温消化12～13 d胚胎组织5 min,以DMEM培养基添加15%小牛血清分离培养MfEF的效果最佳;MfEF2～7代增殖最旺盛。结论获得了实验室分离、培养MfEF的有效方法 ,为进一步深入研究东方田鼠抗日本血吸虫机制以及开展不同动物成纤维细胞间比较研究奠定了基础。     

东方田鼠皮肤成纤维细胞的分离培养及生物学特性

目的探索和建立东方田鼠皮肤成纤维细胞体外分离、培养的技术方法并观察其生物学特性。方法采用含10%小牛血清的Dulbecco改良Eagle培养液(DMEM)和1640两种培养体系,运用组织块贴壁法和胰酶消化法,分别对出生后1、3 d和5 d的东方田鼠乳鼠皮肤成纤维细胞进行原代分离、培养。苏木素-伊红染色及倒置相差显微镜下观察成纤维细胞形态和生长特性。结果 0.25%胰酶消化分离出生后1 d和3 d东方田鼠乳鼠皮肤较出生后5 d组织可获得较多数量细胞,成纤维细胞在体外快速贴壁生长,一般6～7 d长满培养瓶,细胞纯度高,HE染色细胞呈长梭形,胞核明显;DMEM和1640两种培养液均可用于东方田鼠皮肤成纤维细胞的培养,但细胞传代后生长趋缓,只可传代2～3次。本实验运用组织块贴壁法未能培养出皮肤成纤维细胞。结论确定了有效分离东方田鼠皮肤成纤维细胞的日龄和方法,为进一步深入研究提供了技术方法和操作依据。     

洞庭湖区东方田鼠的食物组成调查

采用胃内容物显微组织学鉴定法,定量调查了洞庭湖区东方田鼠（Ｍｉｃｒｏｔｕｓｆｏｒｔｉｓｃａｌａｍｏ－ｒｕｍ）的食物组成。该鼠的主要食物,在苔草地是苔草和水田碎米荠,在芦荻场是碎米荠、苦草、荻和镜子苔,在稻田区是水稻和双穗雀稗,在岗地是三毛草、一年蓬、千金子和水稻。植物叶片是其主要利用对象,在绿色食物资源不足的情况下,也取食植物种子。其食物组成的变化表明,该鼠能依不同栖息地的植被结构调整摄食对象,因而能适应湖区生活环境的灾变性变化。     

东方田鼠长江亚种和指名亚种基因组DNA序列比较分析

根据东方田鼠基因组DNA序列片段(CenBank登录号：AF277394),通过PCR方法扩增东方田鼠长江亚种(Microtus fortis calamorum)和宁夏指名亚种(Microtus fortis fortis)基因组DNA,得到-670bp左右的特异扩增片段。将PCR扩增产物克隆到pGEM-Teasy裁体,进行DNA序列分析,并用生物信息学方法比较东方田鼠长江亚种与指名亚种之间该序列的差异。结果表明：在东方田鼠两个亚种中共发现19个不同的等位基因,不同的个体在该序列存在广泛的单个核苷酸多态性(SNP),多态性位点多达25个;变换类型包括：转换(G→A、A→G、T→C、C→T)、颠换(G→T、A→T、T→A、C→A)、插入(CA)和缺失(TGTTTT)。东方田鼠长江亚种和指名亚种两个种群之间存在明显差别,尤其是在146、192、223、224、235位,但两种群间同源性仍高达98％。同时采用系统发育树(phylogenetic tree)分析方法,对两个亚种的亲缘关系进行了分析和比较,结果显示,东方田鼠长江亚种和宁夏指名亚种基因组DNA明显的分为两大组别。     

封闭繁殖的成年东方田鼠心电图分析

记录并分析24例麻醉东方田鼠体表心电图。结果表明,（1）Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、aVF导联波形较稳定,主波向上,各波较明显;（2）aVR及部分aVL导联主波向下多见,QRS波群形态多样复杂;（3）各导联T波不对称,无明显S－T段,且不在等电位线上;（4）与大鼠相比各导联波幅值均低较,心率较快。     

人工饲养条件下东方田鼠指名亚种繁殖特性及其幼仔的生长发育

在实验室饲养条件下, 对东方田鼠指名亚种繁殖特性和幼仔生长发育进行了初步观察。该鼠全年均可繁殖, 平均每胎产仔3.8 ±1.5 只, 妊娠期20～21 d , 繁殖间隔期39.3 ±26.4 d , 雌雄比为1.48。幼鼠3 日龄耳壳完全直立, 4 日龄开始长下门齿, 5 日龄长上门齿, 7～8 日龄睁眼, 20 日龄可断奶, 55 日龄左右性成熟。3 种生长模型(Logistic 方程、Gompertz 方程和Von Bertalanffy 方程) 对体重、体长、尾和后足的生长过程的拟合优度均很高,择优选用Von Bertalanffy 方程对体重、体长和尾长进行描述, 选用Logistic 方程对后足长的生长过程进行描述。将该鼠的生长发育过程划分为4 个阶段, 乳鼠阶段: 初生至10 日龄; 幼鼠阶段: 11 日龄至20 日龄; 亚成年阶段: 21至55 日龄; 成年阶段: 56 日龄以后。对指名亚种和长江亚种生长、繁殖特性异同亦作了初步分析。     

封闭群东方田鼠的病理学特征观察

观察了东方田鼠封闭群在不同年龄阶段各种病理学变化的特征,为建立东方田鼠相关标准创造条件。采用常规病理学技术,结合电镜方法,对不同年龄的46只封闭繁育的东方田鼠进行了研究和观察。结果封闭群东方田鼠的病理变化主要集中在肺脏与肝脏;个别东方田鼠有乳腺癌和隐睾,东方田鼠乳腺癌的电镜特征与昆明小鼠有所不同;封闭繁育的东方田鼠主要病变有8种;不同年龄的东方田鼠病变的发生率亦不相同。因此,封闭群东方田鼠应加强病理监测,根据病理监测结果,有目的地分离病原生物体。     

东方田鼠肝脏cDNA 文库的构建及部分克隆序列分析

东方田鼠(Microtus fortis)隶属于啮齿目仓鼠科(Cricetidae)田鼠亚科(Microtinae)田鼠属(Microtus),主要分布于我国西北、东北及南方16个省区.     

限制食粪对东方田鼠食物消化和体重生长的影响

食粪行为是植食性小型哺乳动物为满足其营养需求所采取的一种适应对策。实验室条件下,限制1月龄和12月龄东方田鼠摄食粪便,测定了限制食粪对食物消化率和体重生长的影响,旨在进一步揭示食粪行为在植食性小型哺乳动物的营养及消化对策中的作用。结果表明,限制食粪使1月龄和12月龄东方田鼠的干物质消化率分别下降27.64 %和7.89 %,粗蛋白消化率分别下降21.39 %和12.68 %;限制食粪可显著抑制东方田鼠的体重增长,且限制食粪对幼体体重的影响较成体明显。因此,研究结果充分验证了限制食粪可降低东方田鼠的食物消化率及抑制其体重生长的假设。     

不同生活条件下东方田鼠内脏器官比较

脏器指数可以反映动物的生理功能 ,消化道形态的变化受食物质量和动物能量需求的影响 ,国内外不少学者探讨了野外条件下鼠类脏器指数和消化道形态的季节变化及其生态适应意义[2 ,4 ,6～ 8,14 ,15] 。Ｇｒｏｓｓ等[12 ] 在室内研究了温度和食物质量对草原田鼠 (Ｍｉｃｒｏｔｕｓｏｃｈｒｏｇａｓｔｅｒ)消化道形态的影响。东方田鼠 (Ｍ .ｆｏｒｔｉｓｃａｌａｍｏｒｕｍ )为洞庭湖湖泊河汊区优势鼠种 ,严重危害农林业生产 ;同时其具有天然抗日本血吸虫的特性[13] ,对血吸虫的研究和防治有着较为重要的意义。该鼠以湖滩苔草(Ｃａｒｅｘｓｐｐ …