糖基化3－磷酸甘油醛脱氢酶的含糖量及其构象变化

通过对ＧＡＰＤＨ及ｇＧＡＰＤＨ含糖量、ＣＤ、荧光及ＤＴＮＢ的修饰表明：用间氨基苯硼酸琼脂糖（ｍ－ＡＰＢＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ６Ｂ）亲和层析法分离的兔肌ｇＧＡＰＤＨ每分子含有１．８９个糖基。ｇＧＡＰＤＨ及ＧＡＰＤＨ的远紫外ＣＤ谱差别较小,但近紫外差别较明显。两者内源荧光在不同浓度的ＧｕＨＣｌ溶液中的变化亦有一定差异。ＤＴＮＢ对酶活性部位巯基的修饰表明,ｇＧＡＰＤＨ的ＤＴＮＢ修饰的快相一级动力学常数大于ＧＡＰＤＨ动力学常数一个数量级。以上结果提示：糖基化导致酶分子及活性部位的空间结构改变,糖基化位点可能发生在酶活性部位附近。     

3-磷酸甘油醛脱氢酶胍变性时的活力及构象变化

酵母3-磷酸甘油醛脱氢酶在盐酸胍溶液中的内源荧光及剩余活力的变化结果提示:apo酶及holo酶的活力在胍浓度为0.5M左右可完全丧失.同时伴有内源荧光强度的下降,光谱宽度的增加和335nm最大发射峰的红移(提示了色氨酸残基的暴露).与已经报导的肌肉酶(内源荧光强度在胍浓度为0.4—1.2M范围相对稳定)不同,酵母酶内源荧光在此浓度范围内表现为逐渐降低.在0.7M胍溶液中,内源荧光变化动力学过程只能测出一相,而酶失活动力学过程为快慢两相,快相动力学速度常数至少大于内源荧光降低速度常数三个数量级以上.以上结果提示:低浓度胍可引起该酶的完全失活,活性部位的空间构象比酶分子的构象更易受到变性剂的扰乱;有一个色氨酸残基位于或靠近酶的活性部位.     

糖基化3－磷酸甘油醛脱氢酶的分离纯化及糖基代位点的探讨

应用糖基化蛋白亲和层析技术对兔肌及人红细胞的３－磷酸甘油醛脱氢酶的分离分析表明,兔肌非糖基化ＧＡＰＤＨ的比活为１８０—２００单位,而糖基化ｇＧＡＰＤＨ的为４０—５０单位,并占该酶蛋白总量的４０％。人类红细胞糖基化ｇＧＡＰＤＨ的活力占其总活力的５５％左右。以上结果表明：哺乳动物体内存在糖基化３－磷酸甘油醛脱氢酶。由于（１）糖基化明显影响ＧＡＰＤＨ的活力;（２）糖基化酶活性部位的巯基（Ｃｙｓ－１４９）空间位置发生了改变;（３）糖基化影响活性部位的空间构象及（４）ＯＰＴ对糖基化及非糖基化酶的修饰无论在动力学上还是在ＫＩ淬灭时都有明显差异,因此,糖基化的位点可能与赖氨酸残基有关,并且接近或位于酶的活性部位。     

糖基化3－磷酸甘油醛脱氢酶的分离纯化及糖基代位点的探讨

应用糖基化蛋白亲和层析技术对兔肌及人红细胞的３－磷酸甘油醛脱氢酶的分离分析表明,兔肌非糖基化ＧＡＰＤＨ的比活为１８０—２００单位,而糖基化ｇＧＡＰＤＨ的为４０—５０单位,并占该酶蛋白总量的４０％。人类红细胞糖基化ｇＧＡＰＤＨ的活力占其总活力的５５％左右。以上结果表明：哺乳动物体内存在糖基化３－磷酸甘油醛脱氢酶。由于（１）糖基化明显影响ＧＡＰＤＨ的活力;（２）糖基化酶活性部位的巯基（Ｃｙｓ－１４９）空间位置发生了改变;（３）糖基化影响活性部位的空间构象及（４）ＯＰＴ对糖基化及非糖基化酶的修饰无论在动力学上还是在ＫＩ淬灭时都有明显差异,因此,糖基化的位点可能与赖氨酸残基有关,并且接近或位于酶的活性部位。     

邻苯二甲醛对糖基化3－磷酸甘油醛脱氢酶的修饰及荧光性质的研究

ＯＰＴ修饰ＧＡＰＤＨ及ｇＧＡＰＤＨ的荧光衍生物与Ｔｒｐ残基之间存在非辐射的能量传递。在不同浓度的ＧｕＨＣｌ溶液中,糖基化和非糖基化酶ＯＰＴ衍生物的荧光的变化具有一定的差异。特别是两者的荧光在碘化钾溶液中的淬来有明显的不同。ＯＰＴ修饰动力学研究表明,ｇＧＡＰＤＨ的修饰速度快于ＧＡＰＤＨ的修饰速度。以上结果提示：糖基化的位点可能在赖氨酸残基上,并且被糖基化的残基可能位于或靠近活性部位。     

邻苯二甲醛对糖基化3－磷酸甘油醛脱氢酶的修饰及荧光性质的研究

ＯＰＴ修饰ＧＡＰＤＨ及ｇＧＡＰＤＨ的荧光衍生物与Ｔｒｐ残基之间存在非辐射的能量传递。在不同浓度的ＧｕＨＣｌ溶液中,糖基化和非糖基化酶ＯＰＴ衍生物的荧光的变化具有一定的差异。特别是两者的荧先在碘化钾溶液中的淬灭有明显的不同。ＯＰＴ修饰动力学研究表明,ｇＧＡＰＤＨ的修饰速度快于ＧＡＰＤＨ的修饰速度。以上结果提示：糖基化的位点可能在赖氨酸残基上,并且被糖基化的残基可能位于或靠近活性部位。     

用快速琼脂糖层析纯化磷酸甘油酸激酶及磷酸甘油醛脱氢酶

研究了用快速琼脂糖离子交换层析(DEAE—Fast Flow sepharose)结台PEG 4000／Reppal PES双水相体系从黄豆中分离纯化磷酸甘油酸激酶(PGK)及磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)。控制床层高度(10～20cm),径向放大具有压降低的优点．设计多点进料取代传统的中心管进料,解决了径向流场不均匀的问题。GAPr)H的总收率及纯化倍数分别为58％和144,PGK的总收率及纯化倍数分别为41％和44。工艺成本为2．92美元／ku GPADH,具有一定的实用价值。     

用双水相萃取分离纯化磷酸甘油酸激酶和磷酸甘油醛脱氢酶

用聚乙二醇（ＰＥＧ）／羟丙基淀粉（ＲｅｐｐａｌＰＥＳ）双水相体系两步法从黄豆中分离磷酸甘油酸激酶（ＰＧＫ）和磷酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）。ＰＧＫ在上相收率及ＧＡＰＤＨ在下相收率均在８０％以上。放大采用离心倾析机（ｄｅｃａｎｔｅｒ）连续处理匀浆液,用离心萃取器（ｓｅｐａｒａｔｏｒ）完成双水相体系的萃取两相分离。整个工艺具有处理量大、接触时间短、酶收率高的优点     

3-磷酸甘油醛脱氢酶的分子遗传

3-磷酸甘油醛脱氢酶(D-glyceraldehyde-3-pho-sphate dehydrogenase,GAPDH)是糖酵解、糖异生及光合作用碳固定循环过程中的关键酶,充当蛋白质结构与功能研究的重要材料,其基因也越来越多地应用于分子遗传学的研究领域中。由于糖酵解和光合作用是细胞古老的能量代谢形式,GAPDH的基因也在进化的早期出现。在漫长的     

甘油醛-3-磷酸脱氢酶与辅酶类似物ATP及底物磷酸结合特性的晶体学研究

气相扩散共晶生长法培养出Ｐ．ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ龙虾肌ＡＴＰ－Ｄ－甘油醛－３－磷酸脱氢酶（ＡＴＰ－ＧＡＰＤＨ）的晶体。用同步辐射Ｘ光源－磷光储屏－Ｗｅｉｓｓｅｎｂｅｒｇ照相机系统收集了一套２．０分辨率的衍射数据。用同晶差值傅立叶法解析了其结构。精化后的结构模型最终Ｒ因子为０．１９７,与标准键长、键角的均方根偏差为０．０１６°和３．２０°。ＰｖＡＴＰ－ＧＡＰＤＨ结构总体上和Ｐｖａｐｏ－ＧＡＰＤＨ相似。ＡＴＰ分子的占有率较低,并表现出一定程度的无序性,提示ＡＴＰ与酶蛋白结合的稳定性较低,表明ＮＡＤ＋的尼克酰胺核苷部分与蛋白质分子的作用在辅酶与蛋白质的稳定结合中起关键作用。ＡＴＰ－ＧＡＰＤＨ中每个亚基只有一个磷酸结合位点（Ｐｉ）。认为无机磷酸结合位点Ｐｉ的形成不依赖于ＮＡＤ＋,而底物磷酸结合位点ＰＳ的形成则依赖于ＮＡＤ＋的存在。     

酵母羧甲基化及光照甘油醛-3-磷酸脱氢酶在碘化钾溶液中荧光发色团的形成

CM-GAPDH在碘化钾溶液中,NAD~+的存在下,形成发射波长为383nm的荧光物。对照的NAD~+与碘化钾溶液混合不产生荧光物。全位及半位修饰光照酶的内源荧光在碘化钾溶液中的变化与天然酶的有明显不同。两者在碘化钾中都形成383nm的荧光,但全位修饰光照酶形成383nm荧光的最适碘化钾浓度为1.0M;半位修饰的为0.8M。以上结果暗示:383nm荧光物的形成需要GAPDH和NAD~+同时存在,并且与活性部位巯基修饰的多少有关,该荧光物可能位于GAPDH的活性部位。     

酵母羧甲基化及光照甘油醛-3-磷酸脱氢酶在碘化钾溶液中荧光发色团的形成

CM-GAPDH在碘化钾溶液中,NAD~+的存在下,形成发射波长为383nm的荧光物。对照的NAD~+与碘化钾溶液混合不产生荧光物。全位及半位修饰光照酶的内源荧光在碘化钾溶液中的变化与天然酶的有明显不同。两者在碘化钾中都形成383nm的荧光,但全位修饰光照酶形成383nm荧光的最适碘化钾浓度为1.0M;半位修饰的为0.8M。以上结果暗示:383nm荧光物的形成需要GAPDH和NAD~+同时存在,并且与活性部位巯基修饰的多少有关,该荧光物可能位于GAPDH的活性部位。     

酿酒酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶的两个同工酶

酿酒酵母细胞中的NAD+ 依赖性胞浆 3 磷酸甘油脱氢酶是甘油代谢途径中的关键酶之一 ,催化磷酸二羟丙酮生成 3 磷酸甘油 ,它有两个同工酶。深入研究它们的结构 ,编码基因的表达调控以及它们在细胞中的作用的异同 ,有助于进一步了解酵母细胞对高渗和缺氧环境做出应答的机理。本文对酿酒酵母胞浆 3 磷酸甘油脱氢酶的两个同工酶的上述 3方面进行了综述。