2．5分辨率单斜Al－（L－丙氨酸）胰岛素晶体结构研究

空间群为Ｐ２１的Ａ１－（Ｌ－丙氨酸）胰岛素晶胞内,一个不对称单位含有一个六聚体,应用差值Ｆｏｕｒｉｅｒ技术,立体化学制最小二来技术和Ｘ—ＰＬＯＲ程序并辅以电子密度图的人工拟合,解析了分辨率ＡＩ—（Ｌ－丙氨酸）胰岛素（Ａｌ－Ｌ－ＡｌａⅠ）的晶体结构。最终Ｒ因子为２０．６％,与标准键长与键角的均方根偏差分别为和４．１９°,从电子密度图与模型的拟合来看,六聚体中每条Ａ链的Ａｌ位置替换的Ｌ—Ａｌａ清晰可见,每条Ｂ链Ｎ端Ｂ１—Ｂ８伏段都为α螺旋构象,形成了Ｂ１—Ｂ１９的连续α螺旋段。     

1．9A分辨率Al－（L－丙氨酸）胰岛素晶体结构研究

使用Ｘ－ＰＬＯＲ及立体化学制约最小二乘精化技术,并结合差值Ｆｏｕｒｉｅｒ图人工分析,测定了１．９　分辨率Ａｌ修饰丙氨酸胰岛素的晶体结构,晶体空间群为Ｒ３,晶胞参数：ａ＝ｂ＝８０．８９,ｃ＝３７．６４。精化后的结构模型最终偏离因子Ｒ＝０．１８５,同理想键长和键角的均方根偏差分别为０．０１８和３．５°,独立区内二个分子的Ａ链Ｎ端Ａｌ－丙氨酸残基清晰可见。     

单斜Al－（L－丙氨酸）胰岛素初步晶体学研究

用微量气相扩散方法在含酚的柠檬酸缓冲体系中,得到了可供Ｘ射线晶体学分析用的Ａｌ－（Ｌ－丙氨酸）胰岛素晶体,晶体衍射能力为２．５Ａ。经Ｘ射线衍射分析确定,该晶体属于单斜晶系,空间群为Ｐ２_１,晶胞参数：ａ＝６１．５Ａ,ｂ＝６２．２Ａ,ｃ＝４８．３Ａ,α＝γ＝９０．０°,β＝１１０．９°。晶胞中每个结晶学不对称单位含有一个Ａｌ－（Ｌ－丙氨酸）胰岛素六聚体。     

A_(21)—Asp人胰岛素突变体2.4埃分辨率晶体结构研究

A_(21)-Asp人胰岛素(A_(21)D-HI)是经由蛋白质工程途径制备的突变体,具有高稳定特性.本文报道在2.4埃分辨率A_(21)-HI X-射线晶体结构的测定,所获结构模型经能量制约的最小二乘技术(EREF)精化,最后的晶体学一致性因子R=0.192,共价键长与标准值的平均偏差为0.019埃.在(2F-F_e)电子密度图上,突变残基A_(21)-Asp清晰可见.与天然胰岛素比较,除践基A_(21)外,突变体分子的构象在该分辨率未见显著变化,具有重要结构意义的残基A_(21)-NH与B_(23)-Co之间的主链氢键在两个独立分子中都仍然保持,A链末端羧基与B_(22)-Arg的侧链胍基间的盐键在分子中也仍然保持.在这一基础上,讨论了突变体与分子的化学稳定性和生物活力的关系.     

高分辨率高精度天花粉晶体结构研究 1．1分辨率衍射数据的收集

以同步辐射作为Ｘ射线源,在Ｓａｋｓｂｅ无屏Ｗｅｉｓｓｅｎｂｕｒｇ Ｘ－射线衍射数据收集系统上,应用磷光可逆成像屏作为记录装置,收集了天花粉蛋白正交晶体１．１Ａ分辨率的衍射数据。经ＷＥＩＳ程序处理和合并后,并获得独立衍射点６７．３２７个,占１．１Ａ分辨率范围应有反射总数的６９．８％;Ｒｍｅｒｇｅ＝５．９０％,表明数据的质量优良,这为特高分辨率天花粉蛋白的晶体结构研究奠定了坚实基础。     

Al-(L-丙氨酸)胰岛素晶体学研究

应用微量过饱和静置法在含柠檬酸钠和氯化钠的晶体生长体系中得到适合Ｘ射线衍射分析用的Ａｌ－（Ｌ－丙氯酸）胰岛素单晶体。晶体属于三方晶系,空间群为Ｒ３晶体衍射分辨率可达１．８Ａ以上。晶胞参数：ａＨ＝８０．８９Ａ,ｂＨ＝８０．８９Ａ,ｃＨ＝３７＼６４Ａ,α＝β＝９０°,γ＝１２０°。每个结晶学不对称单位含有两个Ａｌ－（Ｌ－丙氨酸）胰岛素分子。     

L－丙氨酸生产菌种培养条件的研究

本文从培养基组成、通气量、培养温度及培养时间四个方面研究并提出了Ｌ－丙氨酸生产菌种ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓＩＡＭ１１５２－Ａ的最佳培养条件。     

L－丙氨酸生产菌种培养条件的研究

本文从培养基组成、通气量、培养温度及培养时间四个方面研究并提出了Ｌ－丙氨酸生产菌种ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓＩＡＭ１１５２－Ａ的最佳培养条件。     

胰岛素晶体结构研究40年回眸

<正>"Standards There as High as Achieved Elsewhere":《中国科学》传递给世界的信息40年前,在中国处于一个十分特殊和艰难社会环境的历史时期中,     

0.21nm分辨率BO-(L-精氨酸)牛胰岛素晶体结构研究

应用差值Fourier技术,立体化学最小二乘技术和XPLOR程序并辅以电子密度图的人工拟合,以三方二锌猪胰岛素模型为起点,解析了0.21nm分辨率BO-(L-精氨酸)牛胰岛素的晶体结构,最终R因子为18.2%,与标准键长与键角的均方根偏差分别为0.0022nm和 4.3°.从电子密度图与模型的拟合来看,独立区两个分子中B链N端加长的L-精氨酸清晰可见.相对于三方二锌猪胰岛素分子,B链N端晶体学微环境发生了变化.     

L-丙氨酸对小鼠胰岛分泌胰岛素的急性作用及其葡萄糖依赖性研究

探讨L-丙氨酸刺激小鼠胰岛分泌胰岛素的剂量和葡萄糖依赖性。雌性6~10周NMRI小鼠,苯巴比妥腹腔麻醉,应用胶原酶技术消化胰腺分离胰岛,置于RPMI1640培养皿中在37℃培养箱(5%CO2,95%空气)过夜培养。次日在Krebs-Ringer缓冲液中37℃水浴培养箱预培养30 min,分别把单个胰岛小心放入100 L含有不同浓度葡萄糖和不同浓度L-丙氨酸的改良Krebs-Ringer缓冲液37℃水浴培养箱培养60 min,留取50 L上清液进行胰岛素测定。结果:L-丙氨酸在0.1~20mmol.L-1范围促进了葡萄糖刺激的小鼠胰岛的胰岛素分泌,随剂量增大而增强,在低浓度葡萄糖存在的条件下,10 mmol.L-1L-丙氨酸不能刺激小鼠胰岛的胰岛素分泌,在6.7 mmol.L-1及以上葡萄糖存在的条件下,L-丙氨酸能增加葡萄糖诱导的小鼠胰岛分泌胰岛素。本研究显示L-丙氨酸能增加葡萄糖诱导的小鼠胰岛分泌胰岛素,此作用依赖于一定水平葡萄糖的存在。     

高分辨率高精度天花粉晶体结构研究 1．1分辨率衍射数据的收集

以同步辐射作为Ｘ射线源,在Ｓａｋｓｂｅ无屏ＷｅｉｓｓｅｎｂｕｒｇＸ－射线衍射数据收集系统上,应用磷光可逆成像屏（ＩｍａｇｅＰｌａｔｅ）作为记录装置,收集了天花粉蛋白正交晶体１．１Ａ分辨率的衍射数据。经ＷＥＩＳ程序处理和合并后,共获得独立衍射点６７．３２７个,占１．１Ａ分辨率范围应有反射总数的６９．８％;Ｒｍｅｒｇｅ＝５．９０％,表明数据的质量优良。这为特高分辨率天花粉蛋白的晶体结构研究奠定了坚实基础。     

从基因工程小C肽人胰岛素原类似物（B－R2－A）制备人胰岛素

以融合蛋白的形式,在Ｅ．ｃｏｌｉ中经温度诱导表达了小Ｃ肽人胰岛素原类似物（Ｂ－Ｒ２－Ａ）．表达的融合蛋白可占细胞总蛋白６８％．经磺酸解,及初步分离Ｓ－磺酸型融合蛋白,再经ＣＮＢｒ裂解后,进行还原重组,ＨＰＬＣ分离纯化等步骤,每升发酵液可得到Ｂ－Ｒ２－Ａ约５０ｍｇ。经酶促转化及ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５纯化,得重组人胰岛素约２０ｍｇ,其氨基酸组成与人胰岛素相同,并具有与猪胰岛素相同的生物活性．     

G－蛋白异三聚体（G－proteinheterotrimer）的晶体结构

继１９９４年Ｓｉｇｌｅｒ－ｈａｍｍ和Ｓｐｒａｎｇ－Ｇｉｌｍａｎ实验室报道了Ｇｉα１的晶体结构之后,１９９５年１２月和１９９６年１月这两个实验室又相继报道了Ｇ－蛋白异三聚体（ＧαＧＤＰ）βγ和Ｇβγ二聚体的晶体结构．这些研究结果表明Ｇ－蛋白复合物象一台由操纵杆（受体）、开关（Ｇα）和螺旋桨（Ｇβγ）组成的信号转导纳米机器,并揭示了α和β亚基间可能存在两种不同的功能界面,β和γ亚基间、α和γ的相互作用,以及信号传导过程中,ＧＴＰ诱导开关Ⅱ区重排和亚基解高的机制．βγ亚基能稳定α亚基和ＧＤＰ的紧密结合,使Ｇ－蛋白维持在失活状态．β亚基的ＷＤ４０重复序列形成７叶片的螺旋桨（ｓｅｖｅｎｆｏｌｄｐｒｏｐｅｌｌｅｒ）构造,每个叶片的外侧面显露出许多可变的接触位点．β亚基部分地为伸展的γ亚基包围。关键词     

B链氨端去－肽（B1）羧端去五肽（B26—30）猪胰岛素的初步晶体学研究

应用悬滴气相扩散法在含６％氯化钠和１２．５％丙酮的柠檬酸缓冲体系中,获得可供Ｘ射线结构分析用的Ｂ链氨端去－肽（Ｂ１）羧端去五肽（Ｂ２６－３０）猪胰岛素单晶体。晶体属四方晶系,空间群为Ｐ４１２２或Ｐ４３２２,晶胞参数为：ａ＝ｂ＝３６．０Ａ,ｃ＝１２０．０Ａ,α＝β＝γ＝９０度。单位晶胞中每个结晶学不对称单位含有２个ＤｅｓＢ１－ＤＰＩ分子。     

2.2埃分辨率B链N端去三肽猪胰岛素(DesB1-3INS)的晶体结构研究

应用同晶差值Ｆｏｕｒｉｅｒ技术和立体化学制约最小二乘精化技术,测定了２．２Ａ。分辨率ＤｅｓＢ１－３ＩＮＳ的晶体结构。晶体属于Ｒ３空间群。精化后的结构模型最终Ｒ因子为０．１７８,同标准键长、键角的均方根偏差分别为０．０１７Ａ。和２．９９°。从电子密度图与模型的拟合来看,独立区内两个分子Ｂ链Ｎ端残基的表现十分清晰,相对于三方二锌猪胰岛素的两个分子,ＤｅｓＢ１－３ＩＮＳ分子Ｉ中Ｂ链Ｎ端的构象发生了变化