大鼠局灶性脑皮质缺血/再灌注对脑神经元损伤作用及瘦素受体表达的改变

目的:研究脑缺血/再灌注(I/R)损伤后瘦素受体(OB-R)表达的变化情况.方法:雄性成年Wistar大鼠20只,随机分成4组:假手术24 h、72 h对照组及I/R 24 h、72 h实验组.线栓法制备大鼠局灶性脑皮质I/R损伤模型,在脑I/R后相应时间点分别处死大鼠,采用免疫组织化学、免疫电镜方法观察大脑皮质OB-R的表达,在光镜及电镜下观察神经元损伤改变.结果:左顶叶皮质锥体细胞、血管内皮、脉络丛发现有OB-R阳性表达;与假手术对照组相比,I/R 24 h(I/R早期)锥体细胞OB-R免疫反应阳性细胞表达减少(P＜0.05),I/R 72 h(I/R晚期)锥体细胞OB-R免疫反应阳性细胞减少更明显(P＜0.001);光镜及电镜对缺血中心区神经元的观察均显示I/R晚期的神经元损伤明显重于早期.结论:脑I/R损伤后早期神经元损害和迟发性神经元损害均伴随有OB-R的表达减少,且迟发性神经元损害表达减少更明显,因此在脑梗塞的防治中有必要对瘦素及其OB-R的作用进一步研究.     

当归多糖通过上调VEGF抑制细胞凋亡

本研究旨在探讨当归多糖减轻糖尿病缺血再灌注(I/R)诱导大鼠心肌细胞凋亡的作用机制。通过构建糖尿病I/R大鼠模型,再将大鼠随机分为4组(n=10):假手术组(Sham)、糖尿病I/R组(I/R)、I/R+10 mg/kg当归多糖组(I/R+ANG)、I/R+10 mg/kg当归多糖+15μg/kg阿柏西普组(I/R+ANG+AF);通过TTC染色法分析不同实验组大鼠心肌梗死面积差异;使用ELISA试剂盒分析当归多糖干预对I/R大鼠心肌酶水平和氧化应激反应的影响;借助TUNEL/DAPI双重染色分析各组大鼠心肌细胞凋亡情况;通过Western blotting检测当归多糖对血管内皮生长因子A (VEGFA)蛋白表达的影响。TTC染色检测结果表明,与糖尿病I/R组相比,当归多糖可显著减少糖尿病I/R大鼠心肌梗塞面积(p<0.05)。ELISA检测结果显示,与I/R组相比,当归多糖显著降低了糖尿病I/R组大鼠心肌酶--LDH和CK血清水平(p<0.05),并降低TNF-α(p<0.05)、IL-6 (p<0.05)水平,以及上调SOD活性(p<0.05)。TUNEL/DAPI双重染色镜检观察到当归多糖组的TUNEL阳性心肌细胞百分比显著低于I/R组(p<0.05);蛋白免疫印迹分析表明,与假手术组相比,在糖尿病I/R大鼠中检测到p-eNOS蛋白表达下调;而与I/R相比,当归多糖显著减轻了I/R对p-eNOS蛋白表达的抑制作用;与I/R组和阿柏西普组相比,当归多糖处理组的Caspase-3活化水平较低(p<0.05)。而VEGF抑制剂--阿柏西普处理均明显减轻上述当归多糖在糖尿病I/R大鼠中的所有有益作用。当归多糖通过减轻糖尿病I/R大鼠的氧化应激以及炎症反应,以及上调VEGFA表达和抑制Caspase-3活化来减弱糖尿病缺血/再灌注诱导的心肌细胞凋亡,从而在大鼠体内发挥心脏保护作用。     

SIK2对心肌缺血/再灌注损伤大鼠能量代谢的影响及其机制*

目的: 探究盐诱导激酶2(SIK2)对大鼠心肌能量代谢的影响及其机制。方法: 通过结扎冠脉左前降支建立大鼠急性心梗模型,实验分为假手术组(Sham)、缺血再灌注组(I/R)、SIK2抑制组(I/R+Bosutinib)(10 mg/kg处理24 h)。心脏超声检测各组大鼠心脏结构和功能;HE染色观察大鼠心肌细胞病理学变化;ELISA检测各组大鼠心肌组织中腺苷三磷酸(ATP)、乳酸(LA)的含量;蛋白印迹法(WB)检测各组大鼠心肌组织中SIK2、p-DRP1(Ser616)、DRP1、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR蛋白表达水平。结果: 与Sham组相比,I/R组心肌细胞病理损伤加重且SIK2蛋白表达增加(P<0.05);与I/R组相比,I/R+Bosutinib组SIK2表达降低且心肌病理损伤减轻。与Sham组相比,I/R组LVEF、FS降低(P<0.05);与I/R组相比,I/R+Bosutinib组LVEF、FS增高(P< 0.05),各组IVS、LVPW无明显差异(P>0.05)。与Sham组相比,I/R组ATP含量减少,LA含量增加(P<0.05),与I/R组相比,I/R+Bosutinib组ATP含量增加,LA含量减少(P<0.05)。与Sham组相比,I/R组p-DRP1(Ser616)表达增多,p-AKT、p-mTOR蛋白表达减少(P<0.05);与I/R组相比,I/R+Bosutinib组p-DRP1(Ser616)蛋白表达减少,p-AKT、p-mTOR蛋白表达增多(P<0.05);各组mTOR、AKT、DRP1蛋白无明显差异(P>0.05)。结论: SIK2可能通过AKT/mTOR信号通路及促进线粒体裂变抑制能量代谢,抑制SIK2可提高心肌能量代谢水平进而减轻心肌缺血/再灌注损伤。     

电针介导eNOS动员内源性EPCs促MCAO/R大鼠脑内血管再生

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(e NOS)在电针干预下对局灶脑缺血/再灌注大鼠骨髓及外周血中内皮祖细胞(EPCs)数量变化的影响,及其促大鼠脑内血管再生的机制。方法线栓法制备大鼠局灶脑缺血/再灌注模型,针刺"百会"穴及左侧"四关"穴。100只SD雄性大鼠随机分为正常组(N组)、模型组(I/R组)、模型+电针组(I/RE组)、模型+电针+L-NAME组(I/REL组)。除N组外的各组局灶脑缺血1.5 h后分为再灌注1、2、7 d三个亚组,每个亚组10只大鼠。在各时间点采用流式细胞术检测外周血及骨髓中VEGFR2+EPCs数量,荧光定量PCR技术检测缺血皮质区VEGFR2 mRNA的表达,免疫组织化学法检测缺血皮质区VEGFR2阳性细胞表达及CD34标记的微血管计数。结果与I/R组比较,电针可明显提高骨髓及外周血中EPCs的数量(P0.01,P0.05),而I/REL组的VEGFR2+EPCs数量相比于I/RE组则显著降低(P0.01)。各时间点I/RE组缺血皮质区VEGFR2阳性细胞表达,VEGFR2 mRNA表达及CD34微血管计数明显高于I/R组(P0.01),而I/REL组与之比较则显著减少(P0.01)。结论电针可动员局灶脑缺血/再灌注大鼠内源性EPCs促大鼠缺血脑区血管再生,该作用在e NOS被抑制后减弱,推测电针动员EPCs促血管再生的作用与e NOS的激活有关。     

缺血预处理对大鼠肺缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 :观察缺血预处理 (IPC)对大鼠肺缺血 /再灌注 (I/R)损伤的保护作用 ,并初步探讨其作用机制。方法 :建立离体大鼠肺灌流模型 ,36只wistar大鼠随机分为对照组、I/R组和IPC组 ,处理完毕后分别测定平均肺动脉压(MPAP)、肺组织湿 /干重比、支气管肺泡灌洗液中肺表面活性物质磷脂及表面张力改变 ,肺组织标本送电镜检查。结果 :①电镜下观察IPC组肺损伤明显减轻。②肺组织湿 /干重比值IPC组为 4.41± 0 .2 4,显著低于I/R组 ,但仍高于缺血前 (P <0 .0 1) ;③IPC组大鼠缺血 1h后MPAP为 ( 1.88± 0 .2 9)kPa ,明显低于I/R组 (P <0 .0 1) ;④IPC组支气管肺泡灌洗液中总磷脂为 ( 2 33 .42± 14.0 5 ) μg/kg ,大聚体为 ( 10 5 .39± 6 .17) μg/kg ,与I/R组相比显著增高 ,但低于对照组 (P <0 .0 1) ,三组之间小聚体含量没有显著差异 ;⑤IPC组表面张力为 ( 36 .88± 3.49)mN/m ,显著低于I/R组 ,与对照组相比则无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :缺血预处理对大鼠肺I/R损伤有保护作用 ,保护机制可能与促进肺表面活性物质 (PS)磷脂分泌、改善PS组成 ,从而提高PS功能有关。     

白藜芦醇通过介导eNOS表达促进局灶脑缺血/再灌注大鼠脑内血管再生

目的探讨eNOS在白藜芦醇促进局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑缺血皮质区血管再生中的作用。方法 80只SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(I/R组)、模型+白藜芦醇组(I/RB组)、模型+白藜芦醇+eNOS特异性拮抗剂L-NAME组(I/RBL组)。采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血/再灌注模型,再灌注后2h后腹腔注射白藜芦醇,连续7d,以再灌注后24h、48h、7d为观察时相点。对I/R、I/RB和I/RBL组大鼠行改良神经功能缺损程度评分,HE染色观察大脑缺血皮质区病理结构变化,Western Blot检测eNOS蛋白表达,免疫组织化学检测VEGF、CD34表达情况,荧光定量PCR检测eNOS mRNA表达。结果 I/RB组再灌注后各时间点大鼠大脑缺血皮质区eNOS蛋白及mRNA、VEGF蛋白表达较I/R组明显升高,侧脑室注射L-NAME阻断eNOS作用后,I/RBL组eNOS、VEGF表达较I/RB组降低。同时,白藜芦醇可有效促进缺血后神经功能恢复、改善缺血损伤后脑组织病理变化,增加CD34~+微血管密度。结论白藜芦醇可能通过上调局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑缺血皮质区eNOS和VEGF表达,促进脑微血管再生,发挥缺血损伤后脑保护作用。     

肝缺血再灌注大鼠血清外泌体引起海马和大脑皮质损伤

本文旨在探究大鼠肝缺血再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)后血清中外泌体的变化及其在海马和大脑皮质损伤中的作用。采用随机数字表法将清洁级雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠分为4组:假手术组(S组)、肝缺血再灌注组(I/R组)、S组大鼠血清外泌体处理组(ES组)和I/R组大鼠血清外泌体处理组(EI组)。ES组和EI组为正常大鼠经尾静脉分别注射S组和I/R组大鼠血清中的外泌体各100μL。另取3只正常大鼠经尾静脉注射PKH26红色荧光标记的外泌体,利用免疫荧光显微镜观察大鼠脑组织中荧光表达情况。应用透射电子显微镜观察外泌体的形态和大小;免疫蛋白印迹法检测外泌体标记蛋白CD63和CD9的表达情况;通过血清学和组织学指标的检测,观察肝及脑组织损伤情况及海马和大脑皮质组织细胞凋亡和氧化应激水平。结果显示:外泌体是直径为30～100 nm的圆形或椭圆形膜性囊泡。与S组比较,I/R组大鼠血清中外泌体含量增加(P 0.05)。外泌体具有血脑屏障通透性,可自外周经血液循环进入脑组织。I/R组血清肝功能指标较S组明显升高(P 0.05)。与S组比较,ES组脑组织损伤程度及海马和大脑皮质组织细胞凋亡和氧化应激水平无显著变化;与S组、ES组比较,I/R组、EI组血清脑损伤标志物水平、海马和大脑皮质组织中凋亡指数、氧化应激水平升高,但EI组以上指标均低于I/R组(P 0.05)。因此,大鼠肝I/R可导致海马和大脑皮质组织损伤,而且其介导的血清外泌体含量增加在其中发挥了重要作用。     

原花青素对脑缺血再灌损伤大鼠模型的影响

目的研究原花青素对脑缺血/再灌损伤(ischemia/reperfusion,I/R)大鼠神经功能评分(neurologicaldeficit score,NDS)、脑梗死体积、脑含水量等指标的药理作用。方法采用大鼠大脑中动脉阻断(middle cerebralartery occlusion,MCAO)法复制类似人类缺血性卒中的I/R损伤模型。结果该模型各时间点内均有程度不同的神经功能缺失,原花青素给药组神经功能评分明显低于对照组(P0.05),假手术组大鼠均无神经功能缺失,脑水肿情况均较对照组明显改善(P0.05),脑梗死体积与盐水对照组相比差异有显著性(P0.05),而假手术组均未见有梗死灶。结论原花青素具有一定的保护大鼠I/R后受损脑组织的作用,可供后续研究,并可为缺血性卒中使用原花青素治疗提供确凿的理论依据。     

电针通过PI3K/AKT信号通路动员脑缺血/再灌注大鼠骨髓内皮祖细胞至外周血

目的探讨PI3K/AKT信号通路在电针动员SD大鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)至外周血的作用研究。方法采用线栓法制备SD大鼠局灶脑缺血/再灌注模型,以"百会"穴(GV 20)及左侧"四关"穴(合谷LI4/太冲LR 3)为治疗穴位。腹腔注射PI3K特异性抑制剂LY294002阻断PI3K/AKT通路。192只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、缺血组(I/R)、缺血+电针组(I/RE)及缺血+电针+LY294002组(I/REL)。脑缺血90min,根据再灌注时间,将各组分为再灌注24h、48h和7d三个亚组。采用流式细胞术检测骨髓和外周血CD34+EPCs数量,ELISA法检测各组大鼠骨髓AKT、磷酸化AKT(p-AKT)及内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白含量,免疫荧光共聚焦检测各组大鼠大脑皮质区CD34+微血管密度。结果脑缺血再灌注后24h和48h,大鼠骨髓和外周血CD34+EPCs数量较Sham组明显增多,EA组骨髓和外周血CD34+EPCs数量在各个观察时间点均较I/R组明显增多,I/REL组与I/RE组比较,骨髓及外周血CD34+EPCs数量无明显增高。I/R组大鼠骨髓p-AKT和eNO含量在再灌注后各时间点均较Sham组明显增多,I/RE组p-AKT及eNOS较I/R组明显增多,I/REL组与I/RE组比较,上述蛋白表达明显减少。所有组于各观察时间点总AKT蛋白表达无明显差异。此外,脑缺血再灌注后各时间点,大鼠大脑皮质缺血区CD34+MVD较Sham组明显增多。EA组CD34+微血管密度较I/R组进一步增加,I/REL组与I/RE组比较,CD34+微血管密度明显减少。结论电针可通过进一步激活骨髓PI3K/AKT信号通路动员局灶脑缺血/再灌注大鼠骨髓EPCs至外周血,促进脑血管再生。     

电针通过eNOS促进局灶脑缺血/再灌注大鼠脑缺血皮质区血管再生

目的观察电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑缺血皮质区e NOS、MMP-9表达及CD34+微血管密度变化的影响,探讨电针促进大脑缺血皮质区血管再生的机制。方法 120只SD雄性大鼠随机分为正常组(NC组)、模型组(I/R组)、模型+电针组(I/RE组)、模型+电针+e NOS特异性拮抗剂L-NAME组(I/REL组)。采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血/再灌注模型,缺血90min后将I/R、I/RE和I/REL组分各为再灌注1d、3d和7d三个亚组。取大鼠"百会"穴(GV 20)及左侧"四关"穴(合谷LI 4/太冲LR 3)为电针穴位,刺激时间为20min/d,最长持续7d。采用免疫组化法检测各组大脑缺血皮质区e NOS、MMP-9和CD34表达,荧光定量PCR技术检测大脑缺血皮质区e NOS mRNA表达。结果与NC组比较,I/R、I/RE与I/REL组大脑缺血皮质区e NOS mRNA及蛋白表达随再灌注时间延长呈进行性增加,与I/R组比较,I/RE组各时间点e NOS mRNA及蛋白表达均显著升高,在L-NAME作用下,I/REL组e NOS mRNA及蛋白表达明显低于I/RE组。再灌注后1d、3d,I/RE组MMP-9表达明显低于I/R和I/REL组,7d时I/RE组MMP-9表达较I/R、I/REL组升高。I/RE组各时间点CD34+微血管密度升高较I/R组显著,I/REL组微血管密度明显低于I/RE组。结论电针可通过上调局灶脑缺血/再灌注大鼠脑缺血皮质区e NOS和MMP-9表达,促进血管再生。     

硫化氢对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及其对c-Fos蛋白表达的影响

为探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对大鼠心肌缺血,再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的保护作用及机制,雄性Sprague-Dawley大鼠被随机分为对照组(假手术组)、I/R组、2.8μmol/kg体重NaHS干预组、14 μmol/kg体重NaHS干预组.结扎冠状动脉前降支30 min后,松扎再灌注60 min,心电图Ⅱ导联检测和TTC染色测定心肌梗死面积评价制作的心肌I/R模型:测定血浆中H2S浓度变化;监测血流动力学指标(LVSP,LV±dp/dtmax);HE染色和透射电镜观察心肌形态学改变;免疫组织化学方法测定心肌组织中c-Fos蛋白表达.结果显示:心肌I/R后血浆中H2S浓度明显低于对照组[(30.32±5.26)vs(58.28±7.86)μmol/L,P<0.05]:2.8和14μmol/kg体重NaHS均可显著改善I/R引起的心功能改变,且14μmol/kg体重NaHS较2.8 μmol/kg体重NaHS作用强;14 μmol/kg体重NaHS明显减轻心肌形态学及超微结构损伤,同时降低大鼠I/R心肌组织中c-Fos蛋白表达(0.20±0.06vs0.32±0.10,P<0.05).以上结果提示,H2S对大鼠心肌的I/R损伤有保护作用,这可能与其降低c-Fos蛋白表达有关.     

氢饱和生理盐水治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的效果研究

目的:探讨氢饱和生理盐水对大鼠脑缺血再灌注损伤模型的治疗效果及可能的作用机制。方法:SD大鼠(250-300g)随机分为3组(n=20):假手术组(Sham组),缺血再灌注损伤模型组(I/R组),氢饱和盐水治疗组(HS组)。采用大鼠线栓法右侧中动脉栓塞模型(MCAO模型),于模型90 min时拔出线栓进行再灌注,再灌注同时,I/R组腹腔给予生理盐水10 m L/kg,HS组腹腔给予氢饱和生理盐水10 m L/kg。24 h后,对各组大鼠进行神经功能缺陷评分。断头取脑后,TTC染色法检测脑组织梗死体积(n=10)。选取缺血半暗带处大脑皮层组织进行相关指标测定(n=10)。HE染色观察大鼠缺血半暗带脑组织形态结构,测定缺血半暗带区域氧化应激反应,选取指标为SOD,MDA;并观察缺血半暗带区域炎症反应,利用Elisa方法测定该处TNF-α,IL-6含量。结果:TTC染色证实,右侧MCAO明显诱导大鼠脑局灶性缺血(P0.05)。与I/R组相比,HS组明显降低脑梗死体积(P0.05),显著降低大鼠神经功能缺陷评分(P0.05)。与I/R组相比,氢饱和生理盐水治疗后,很好的保持了缺血半暗带区域细胞结构完整性,明显提高了SOD含量(P0.05),有效降低了MDA水平(P0.05),并且减轻了炎症因子TNF-α,IL-6含量(P0.05)。结论:氢饱和生理盐水可有效的治疗脑缺血再灌注损伤,其机制可能涉及氢气在缺血半暗带区域的选择性的抗氧化应激作用,以及抗炎症反应。     

参麦注射液对肠缺血/再灌注肺损伤大鼠肺组织p38MAPK及凋亡相关基因表达的影响

目的:观察参麦注射液(SM)对肠缺血/再灌注(I/R)肺损伤大鼠肺组织p38MAPK和凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响,探讨其保护机制。方法:采用夹闭肠系膜上动脉(SMA)方法建立大鼠肠I/R损伤模型。24只SD大鼠随机分为对照组(Control组)、肠缺血/再灌注组(I/R组)、参麦注射液组(SM+I/R组),每组8只。比较各组大鼠肺湿/干比(W/D)、肺表面活性物质主要成分卵磷脂(PC)及总磷脂(TPL)含量的变化;同时免疫组织化学法检测各组大鼠肺组织中p38MAPK、Bax及Bcl-2蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,I/R组肺组织W/D明显升高,而PC和TPL的含量显著降低,肺组织p38MAPK、Bcl-2和Bax蛋白表达明显增强(P均＜0.01),其中Bax的增强比Bcl-2的增强更为明显,Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.01);与I/R组比较,SM+I/R组大鼠肺组织W/D明显降低,PC和TPL的含量增加,肺组织p38MAPK和Bax蛋白表达下降(P均＜0.01),Bcl-2的表达增强,Bcl-2/Bax比值明显升高(P＜0.01)。相关分析显示,肠I/R时肺组织p38MAPK蛋白表达水平与肺表面活性物质主要功能成分PC含量及凋亡基因Bcl-2/Bax比值呈负相关(r分别为-0.787,-0.731,P均＜0.01)。结论:SM可能通过抑制p38MAPK信号通路的激活,提高Bcl-2/Bax比值来阻抑细胞凋亡,从而减轻肠I/R时的肺损伤。     

AT2R载体可调控表达对大鼠颈动脉损伤后骨桥蛋白及新生内膜增生的影响

目的:血管紧张素Ⅱ 2型受体(AT2R)基因转染的骨髓间充质干细胞(MSC)在四环素可调控系统下作为载体,利用计算机图像分析系统研究新生内膜增生的情况,并探讨AT2R在体可调控表达对大鼠颈动脉损伤后骨桥蛋白(OPN)表达影响。方法:利用球囊损伤60只SD大鼠颈动脉,并随机将SD大鼠分为5组,分别为正常组(未行球囊扩张术)、对照组(球囊扩张术后注入PBS)、MSC组(球囊扩张术后注入常规MSC)、MSC转染组(球囊扩张术注入转染AT2R的MSC)、强力霉素(Dox)组(球囊扩张术后注入转染AT2R的MSC,术后当天至处死前三天通过尾静脉注射Dox 100μg/kg/d)。术后14及28天分别处死大鼠取材,光镜下观察血管内膜增生情况,Image pro plus 6.0计算机图像分析系统测量新生内膜面积(I/M),逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测AT2R及OPN在大鼠血管标本中的表达变化。结果:大鼠颈动脉AT2R在Dox组的表达显著增高,新的增生内膜面积较其它各损伤组显著降低(P≤0.01),并且OPN的表达显著低于其他各手术组。结论:AT2R基因在体可调控表达受到Dox的有效控制,AT2R基因可能抑制血管损伤后OPN的表达及新生内膜的过度增生。     

rhBNP通过抑制细胞凋亡减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

为了研究重组人B型钠尿肽(recombinant human B-type natriuretic peptide, rhBNP)对减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制,本研究采用尾部静脉注射的方法对I/R大鼠成功建模,并设计注射生理盐水(I/R组)、rhBNP (I/R+rhBNP组)和假手术组CK组3个处理组,通过TUNEL法检测各处理组大鼠心肌细胞的凋亡情况。本实验还用生理和生化方法检测了心肌细胞中超氧化物歧化酶(superoxidedismutase, SOD)和丙二醛(malondialdehyde, MDA)活性和含量的变化情况,用RT-PCR和免疫印迹方法检测了Bax/Bcl-2信号通路中基因和蛋白表达水平变化。结果表明,rhBNP可以提高I/R大鼠心肌细胞中SOD酶活性,同时使MDA含量降低,表明rhBNP能够保护心肌细胞,使细胞受损程度减小。与此同时本研究发现rhBNP处理后大鼠心肌细胞中Bax基因和蛋白的表达量显著下调,且Bcl-2基因和蛋白的表达显著上调,从而使I/R大鼠心肌细胞的凋亡数目减少,缩小心肌坏死的面积。本研究表明rhBNP可以通过调节Bax/Bcl-2信号通路、提高SOD酶活性使I/R大鼠心肌细胞内MDA含量减少,以及心肌细胞凋亡数目减少,从而有效地减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,以达到保护心肌细胞的目的。     

大鼠肢体缺血/再灌注后肝脏 HO-1表达的变化及其意义

目的:探讨肢体缺血/再灌注(I/R)致肝脏损伤时肝组织诱导型血红素氧合酶(HO-1)表达的变化及其意义.方法:夹闭大鼠双侧股动脉根部4 h、开放2～24 h,制备肢体I/R模型.RT-PCR检测肝组织HO-1 mRNA表达的变化,免疫组化染色法观察HO-1蛋白在肝内的生成与分布.对肢体I/R大鼠应用锌原卟啉抑制其体内HO-1活性后,光镜观察其肝组织的病理变化.结果:肢体I/R后肝组织HO-1 mRNA的表达水平显著高于各对照组,再灌12 h表达至峰值,至再灌24 h仍显著高于各对照组(P＜0.01).肢体I/R组肝组织内出现大量弥散分布的HO-1阳性肝细胞,抑制HO-1活性,使肢体I/R组肝组织损伤明显加重.结论:肢体I/R损伤可诱导肝细胞HO-1基因表达上调,所诱生的HO-1对肝细胞具有保护效应.     

川芎嗪-黄芪甲苷降低缺血/再灌注损伤的大鼠脑组织中IL-1β和Caspase-3基因的表达:实时定量PCR的研究(英文)

本文旨在运用实时荧光PCR技术建立大鼠脑缺血/再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)中IL-1β和Caspase-3基因绝对定量分析方法。成年雄性Sprague-Dawely大鼠被随机分成了5组:假手术组、I/R模型组、黄芪甲苷组、川芎嗪-黄芪甲苷组、尼莫地平组。除假手术组外,其余各组均进行脑I/R处理,然后通过腹膜内注射进行药物处理,时间为脑I/R后0h、12h、1d、2d直至7d。假手术组和I/R模型组注射生理盐水(5mL/kg),黄芪甲苷组中黄芪甲苷剂量为20mg/kg,川芎嗪-黄芪甲苷组中川芎嗪和黄芪甲苷剂量分别为10mg/kg和20mg/kg,而尼莫地平组中尼莫地平剂量为10mg/kg。通过常规RT-PCR克隆了大鼠的IL-1β和Caspase-3基因,运用TA克隆技术分别构建了重组质粒pTA2-IL1和pTA2-Casp3,重组质粒经过紫外分光光度计测定A260/A280比值,并计算拷贝数。以该质粒作为标准品,首先对实时荧光PCR反应的引物进行筛选和验证,然后进行反应退火温度的优化,最后定量检测各组损伤的脑组织中IL-1β和Caspase-3的基因表达情况。结果显示,从候选引物...     

维甲酸X受体介导的氧化应激通路在大鼠肺缺血/再灌注损伤中的调控作用

本研究旨在探讨维甲酸X受体(retinoid X receptor, RXR)介导的氧化应激通路对大鼠肺缺血/再灌注损伤(pulmonary ischemia/reperfusion injury, PIRI)的干预作用及机制。选取雄性Sprague Dawley (SD)大鼠77只,随机分为7组(n=11):正常对照组(Control组)、假手术组(Sham组)、假手术+9-顺式维甲酸(9-cis retinoid acid,9-cRA,RXR激动剂)组(Sham+9-cRA组)、假手术+HX531 (RXR抑制剂)组(Sham+HX531组)、缺血/再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)组、I/R+9-cRA组、I/R+HX531组。采用大鼠在体左侧肺门夹闭30 min再灌注180 min方法制备肺缺血/再灌注(I/R)模型。I/R+9-cRA组和I/R+HX531组大鼠于开胸前腹腔注射9-cRA和HX531。再灌注结束后取左肺组织,评估肺组织损伤,用试剂盒检测肺组织氧化应激等相关指标,用HE染色法和透射电镜分别观察肺组织形态和肺泡上皮细胞超微结构,用免疫荧光标记法观察肺组织RXRα的表达情况,用Western blot检测核因子E2相关因子(nuclear factor E2-related factor 2, Nrf2)蛋白表达情况。结果显示,与Sham组相比,I/R组肺组织出现明显损伤,SOD活性下降,MDA含量和MPO活性升高,Nrf2蛋白表达水平显著降低;与I/R组相比,I/R+9-cRA组肺组织损伤减轻,SOD活性升高,MDA含量和MPO活性下降,RXR和Nrf2蛋白表达水平明显上调。9-cRA的上述改善作用可被HX531逆转。上述结果提示,激动RXR可有效减轻大鼠肺I/R损伤,对肺组织有一定的保护作用,具体机制可能与其激活Nrf2信号途径,增强抗氧化水平,减轻氧化应激反应有关。     

孕酮对全脑缺血/再灌注损伤大鼠学习记忆及海马P2X7受体表达的影响

目的:研究孕酮(PROG)对全脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠学习记忆及海马P2X7受体表达的影响。方法:雄性SD大鼠48只,随机分成4组(n=12):正常组、假手术组、I/R组和I/R+PROG组。采用改良Pulsinelli’s 4血管闭塞法建立全脑缺血/再灌注损伤动物模型,Y-型迷宫检测学习与记忆成绩;免疫荧光法观察海马区P2X7受体蛋白表达;羟胺氧化法测定海马组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性;硫代巴比妥酸法测定海马组织中丙二醛(MDA)含量。结果:正常组和假手术组学习记忆成绩、海马区P2X7阳性表达细胞数、海马组织中SOD活性和MDA含量差异无显著性;与假手术组相比,I/R组学习记忆成绩显著降低(P<0.01);与I/R组相比,I/R+PROG组学习记忆成绩显著升高(P<0.05)。与假手术组相比,I/R组海马区P2X7阳性表达细胞数显著增多(P<0.01);与I/R组相比,I/R+PROG组海马区P2X7阳性表达细胞数显著减少(P<0.01)。与假手术组相比,I/R组海马组织中SOD活性显著降低(P<0.01),而MDA含量显著升高(P<0.01);与I/R组相比,I/R+PROG组海马组织中SOD活性显著升高(P<0.05),而MDA含量显著降低(P<0.01)。结论:PROG可明显改善全脑缺血/再灌注损伤大鼠学习与记忆能力,其作用机制可能与下调海马区P2X7受体蛋白表达和清除氧自由基有关。     

缺血预处理通过激活自噬保护肾缺血-再灌注损伤

目的:探讨缺血预处理对缺血-再灌注所致急性肾损伤的保护作用与可能机制。方法:将健康雄性SD大鼠18只随机分为三组:假手术组(Sham组)、肾缺血组(I/R组)、实验组,Sham组大鼠开腹后游离左侧肾蒂血管,不夹闭,观察60 min关闭腹部。I/R组大鼠开腹后切除右肾,左肾蒂血管分离,观察15 min后用无损伤动脉夹持续夹闭左肾蒂血管45 min后,关闭腹部,恢复左肾血流。实验组开腹后切除切除右肾,左肾蒂血管分离,行4个循环夹闭左肾蒂血管1 min/再灌注4 min预处理后,无损伤动脉持续夹闭45 min,关闭腹部,恢复左肾血流。比较各组大鼠术后尿素氮值(Burea nitrogen,BUN)与肌酐值(Serum creatinine,SCR)水平,肾组织病理学评分及微管相关蛋白轻链3(Microtubule-associated protein l light chain 3,LC3)和自噬基因Beclin-1的表达。结果:所有大鼠在实验过程无死亡。I/R组、实验组再灌注后4 h、24 h的BUN与SCr值显著高于Sham组(P0.05),肾脏组织病理学评分显著高于Sham组(P0.05),实验组以上指标均显著低于I/R组(P0.05);I/R组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin-1相对表达量显著高于Sham组(P0.05),实验组以上指标均显著低于I/R组(P0.05)。实验组大鼠再灌注后24h LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin-1相对表达量与肾组织病理学评分、BUN、SCr值呈显著相关性(P0.05)。结论:缺血预处理可能通过激活自噬,减轻缺血-再灌注所致急性肾损伤,并改善肾功能。