X盒子结合蛋白1对肾小管上皮细胞脂质代谢的影响研究

目的明确拼接型和非拼接型X盒子结合蛋白1对肾小管上皮细胞脂质代谢的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞,采用脂质体2000转染拼接型和非拼接型XBP-1质粒,培养48h后,免疫细胞化学和Western blot检测XBP-1表达,反转录PCR检测脂肪酸合成酶和乙酰辅酶A羧化酶mRNA表达,免疫细胞化学检测脂肪分化相关蛋白表达,油红O检测细胞内脂滴。结果 HKC细胞转染XBP-1拼接型和非拼接型质粒48h后,免疫细胞化学和Western blot证实XBP-1蛋白均明显升高。而拼接型XBP-1质粒转染上调了FASN和ACC mRNA表达,细胞内ADRP表达升高,细胞内脂滴增多。非拼接型XBP-1质粒对FASN、ACC mRNA,ADRP和细胞内脂滴未产生影响。结论拼接型XBP-1上调可导致肾小管上皮细胞脂质代谢关键酶升高和细胞内脂质沉积,可能是多种肾脏脂质沉积疾病的调控因子之一。     

氰酸盐诱导氧化应激促进肾小管上皮细胞上皮–间充质转化

该研究探讨氰酸盐(cyanate)诱导肾小管上皮细胞氧化应激损伤和促进肾纤维化的作用。氰酸盐作用HK-2肾小管上皮细胞后, CCK8法检测其对细胞活力的影响;倒置显微镜观察细胞形态的改变; DCFH-DA法检测细胞ROS水平;细胞免疫荧光和Western blot分别检测E-cadherin、Fibronectin、α-SMA的表达; Western blot检测TGF-β的表达水平。结果显示, 2 mmol/L氰酸盐明显下调HK-2细胞的活力(P<0.05),细胞形态变为长梭形。氰酸盐作用24 h后, HK-2细胞内ROS水平呈浓度依赖性升高。免疫荧光和Western blot结果均显示,氰酸盐作用24 h后, HK-2的Fibronectin、α-SMA表达升高, E-cadherin表达下降; TGF-β的表达水平随氰酸盐浓度升高而上调(P<0.05)。以上结果表明,氰酸盐诱导肾小管上皮细胞产生过量ROS,上调TGF-β水平促进细胞上皮–间充质细胞转化(epithelia-mesenchymal transition, EMT)。     

白介素-1β对高糖刺激的人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨炎症细胞因子白介素-1β（interleukin-1βIL-1β）对高糖刺激的人肾小管上皮细胞转分化的影响。-方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株（HKCs）,随机分为正常对照组（5.5 mmol/L normal glucose）;高糖组（30 mmol/L high glucose）;高糖＋IL-1β（5ng/ml）组。分别于处理后24h、48h、72h收集细胞,采用免疫细胞化学染色和Western蛋白印迹法检测细胞角蛋白-18（cytokeratin-18 CK-18）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actinα-SMA）水平。结果高糖能够诱导肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的合成增加,而肾小管上皮细胞的标志物CK-18的表达逐渐减少;IL-1β与高糖同时刺激可使肾小管上皮细胞α-SMA蛋白表达进一步增多,而其自身标志物CK-18的表达则明显下降。结论炎症因子IL-1β能增强高糖对肾小管上皮细胞转分化的作用。     

创伤性脑损伤后IL-1?茁在神经胶质细胞中经时定位表达的研究*

目的:探讨创伤性脑损伤(TBI)后白细胞介素-1β(IL-1β)在神经胶质细胞中的经时定位表达情况。方法:选择72只SPF级雄性小鼠分为假手术组(sham组)、TBI 6h组、TBI 12h组、TBI 1d组、TBI 4d组与TBI 7d组,每组12只,分别在脑损伤后6h、12h、1d、4d、7d时获取血清和脑组织并且制作切片。ELISA检测损伤后炎症因子IL-1β、白细胞介素-6 (IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。Western blot检测钙离子结合蛋白-1(IBA-1)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。应用免疫荧光双重染色技术观察炎症因子IL-1β在小胶质细胞和星形胶质细胞中的定位表达情况。结果:TBI后6h-7d时炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达量均高于sham组(P0.05)。Western blot结果显示,IBA-1的表达在损伤后6h-7d时高于sham组,GFAP的表达在损伤后1d-7d时高于sham组(P0.05)。免疫荧光双重染色技术显示,6h、12h时IL-1β主要表达在小胶质细胞中,IL-1β和IBA-1共表达细胞数量多于sham组(P0.05);1d、4d、7d时IL-1β主要表达在星形胶质细胞中,IL-1β和GFAP共表达细胞数量多于sham组(P0.05)。结论:TBI诱导了胶质细胞和炎症因子的表达,其表达随脑损伤的时间而变化,IL-1β早期定位表达于小胶质细胞,后期定位表达于星形胶质细胞中。     

SOCS1在糖尿病小鼠肾小管间质病变中的作用

该文探讨了细胞因子信号传导抑制蛋白1(suppressors of cytokine sigmaling 1,SOCS1)在糖尿病小鼠肾小管间质病变中的作用。通过腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱发糖尿病小鼠模型,于成模后8周给予尾静脉快速注射p EF-FLAG-I/m SOCS1质粒(1 mg/kg),每隔7 d注射一次。于成模后12周收集标本,检测各组动物的血糖、24 h尿蛋白;应用RT-PCR检测肾组织中SOCS1、角蛋白18(cytokeratin,CK18)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)m RNA的表达;应用免疫组化或Western blot检测SOCS1、CK18、α-SMA和纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)的表达;酶联免疫吸附实验检测肾组织中白细胞介素-1β(interleutin-1β,IL-1β)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达;流式细胞术检测肾皮质中巨噬细胞标志蛋白CD68的表达。结果发现,与对照组相比,糖尿病小鼠肾组织中IL-1β、TGF-β1及FN的表达增强,巨噬细胞的数量增多;此外,肾小管上皮细胞自身标志蛋白CK18的表达减少而肌成纤维细胞标志蛋白α-SMA的表达增强。SOCS1质粒转染能降低24 h尿蛋白、抑制肾组织中CD68、IL-1β、TGF-β1和α-SMA的表达,同时部分恢复CK18的表达。结果表明,SOCS1可能通过抑制肾组织炎症反应和肾小管上皮细胞转分化从而缓解糖尿病小鼠肾小管间质病变。     

高糖对肾小管上皮细胞脂质代谢影响及罗格列酮的干预研究

目的探讨高糖环境中肾小管上皮细胞脂质代谢变化,以及罗格列酮对其干预作用。方法体外培养HKC细胞,随机分为正常糖组、高糖组、罗格列酮干预组,采用油红染色检测细胞内脂质,免疫细胞化学和WesternBlot检测固醇调节元件结合蛋白1(sterolregulatory element binding protein-1,SREBP-1)表达。结果与正常糖组比较,高糖培养的肾小管上皮细胞内出现明显脂滴;免疫细胞化学、WesternBlot检测发现固醇调节元件结合蛋白1表达于胞浆,12、24、48、72h固醇调节元件结合蛋白1前体和成熟体表达高糖组均高于正常对照组,差异有统计学意义,其中以48h表达量最大(前体2.334±0.045,成熟体1.082±0.040),罗格列酮组相对于高糖组,前体和成熟体表达均下降,脂滴形成有所减少。结论高糖可诱导肾小管上皮细胞固醇调节元件结合蛋白1前体和成熟体表达升高,进一步导致脂质合成增多;罗格列酮减少脂质合成可能是部分通过抑制固醇调节元件结合蛋白1表达而实现。     

BMP9通过调控AMPK信号通路抑制乳腺癌细胞脂质代谢及脂质利用

为研究骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)对乳腺癌脂质代谢的影响,该研究采用定量PCR、Western blot及中性脂肪酸试剂盒法检测过表达及干扰BMP9后乳腺癌细胞中脂质代谢关键因子表达、脂肪酸含量变化及AMPK通路活化情况。结果显示,过表达BMP9后,乳腺癌细胞中脂质代谢关键因子表达除激素敏感脂肪酶(HSL)外,均有显著减低(P0.05);细胞内中性脂肪酸含量减低,AMPK信号通路明显活化;干扰BMP9表达后,脂质代谢关键因子表达升高,细胞内中性脂肪酸含量同样呈升高趋势。该研究证明,BMP9可抑制乳腺癌细胞脂质代谢关键因子的表达,这一作用与AMPK信号通路的活化有关。     

IL-18通过调节TRPV4/Smad7信号通路促进皮肤鳞状细胞癌的增殖

目的:探讨白介素18(Interleukin-18,IL-18)对皮肤鳞状细胞癌(Cutaneous Squamous Cell Carcinoma,CSCC)增殖的影响及可能分子机制。方法:采用外源性IL-18刺激皮肤鳞状细胞癌A431细胞和Colo-16细胞24 h、48 h和72 h,通过CCK-8检测细胞的增殖能力;48 h后qRT-PCR和Western blot检测刺激前后瞬时感受器电位离子通道家族蛋白4(Transient Receptor Potential Vanilloid 4,TRPV4)和Smad7以及p-Smad7的表达。外源性IL-18刺激皮肤鳞状细胞癌A431细胞和Colo-16细胞12 h后,采用TRPV4激动剂G3给药处理A431细胞和Colo-16细胞36 h,通过MMT检测细胞增殖能力,qRT-PCR和Western blot检测刺激前后TRPV4的表达和Smad7以及p-Smad7的表达。结果:外源性IL-18刺激A431细胞和Colo-16细胞可显著促进其增殖,抑制TRPV4的表达而激活p-Smad7的表达;TRPV4激动剂G3可以部分抵消外源性IL-18对A431细胞和Colo-16细胞的增殖作用。结论:IL-18可能通过下调TRPV4激活Smad7信号通路促进皮肤鳞状细胞癌增殖作用。     

核呼吸因子1调控NF-κB介导LPS诱导的小鼠急性肺损伤

本文旨在研究核呼吸因子1 (nuclear respiratory factor 1, NRF1)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的肺上皮细胞炎症应答中关键分子核因子-κB (nuclear factor kappa B, NF-κB)的影响,以阐明NRF1对肺上皮细胞炎性应答的调控作用及机制。在体内水平上,雄性BALB/c小鼠经呼吸道转染NRF1小干扰RNA,LPS (4 mg/kg)或生理盐水经呼吸道雾化给药,48 h后取肺组织。采用免疫印迹(Western blot, WB)及real-time PCR法检测肺组织NRF1、NF-κB p65及其靶基因表达变化,免疫荧光染色法检测NRF1及NF-κB p65核转位情况。体外培养L132肺上皮细胞,转染NRF1小干扰RNA,或给予BAY 11-7082 (5μmol/L)处理24 h后,给予1 mg/L LPS刺激6 h,用real-time PCR法检测NRF1、NF-κB p65及其靶基因表达变化。采用染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay, Ch...     

肺泡上皮细胞应对烟曲霉感染过程中胞内双特异性磷酸酶表达规律的研究

目的研究肺泡上皮细胞应对烟曲霉感染过程中双特异性磷酸酶(dual specificity phosphatases, DUSPs)的表达规律和炎症因子释放规律。方法在烟曲霉感染肺泡上皮细胞过程中,应用ELISA方法检测细胞上清中炎症因子的释放情况;应用Western blot检测胞内DUSP2、DUSP6和DUSP8的表达规律以及p65、ERK1/2和p38的表达规律和磷酸化水平。结果烟曲霉B5233孢子感染肺泡上皮细胞过程中,细胞上清中炎症因子TNF-α、MCP-1、IL-12p40、IL-1β、IL-6、IL-8的含量均逐渐显著升高;胞内DUSP2的表达逐渐显著升高,DUSP6的表达逐渐显著下降,而DUSP8的表达无明显变化;ERK1/2和p65磷酸化水平显著升高。结论肺泡上皮细胞应对烟曲霉感染过程中显著上调胞内DUSP2的表达,抑制DUSP6的表达,而对DUSP8的表达无显著影响,同时胞内NF-κB信号和MAPK信号均被激活,释放多种炎症因子。     

JNK在血糖波动的糖尿病大鼠肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的:探讨血糖波动的糖尿病大鼠发生肾小管上皮细胞凋亡的信号转导机制。方法:健康SD大鼠随机分为正常对照组(A)、糖尿病稳定高血糖组(B)和糖尿病波动高血糖组(C),采用链脲佐菌素(STZ)65 mg/kg腹腔注射诱发糖尿病,血糖波动组每天定时腹腔注射速效胰岛素,并错时给予葡萄糖,造成一天中血糖浓度大幅度波动模型。制模12周后,采用比色法检测肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,免疫组化法和Western blot检测肾脏Nox4和JNK蛋白表达,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测肾脏细胞凋亡。结果:与A组比较,B组和C组肾组织MDA含量增加、SOD活性下降,肾小管上皮细胞Nox4表达增加,肾小管磷酸化JNK(P-JNK)蛋白表达上调,细胞凋亡率明显增加,且C组的以上变化均较B组更加明显(P<0.05,P<0.01)。结论:波动性高血糖较稳定性高血糖更易促进糖尿病肾小管上皮细胞凋亡,其机制与JNK信号转导通路激活有关。     

黄芪多糖对炎性微环境中BMSCs的IL-6R、TNFR及肿瘤相关基因表达的影响

该文旨在观察黄芪多糖(astragalus polysaccharide, APS)对IL-6和TNF-α所致炎性微环境中骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)白介素-6受体(IL-6 receptor, IL-6R)、肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor, TNFR)表达的影响,探讨IL-6和TNF-α导致BMSCs炎性损伤的可能物质基础。首先运用100 ng/mL IL-6和50 ng/mL TNF-α建立炎性微环境。设立对照组(control组)、模型组(D组)和50μg/m L黄芪多糖干预组(H组)。之后,应用ELISA法检测s IL-6R的表达水平。免疫荧光法检测IL-6R、gp130、TNFR I、TNFR II的表达水平。Western blot技术检测抑癌基因P53、PTEN和原癌基因Ras、C-myc的蛋白表达水平。检测结果显示,与对照组比较,模型组细胞上清液中的s IL-6R含量降低,模型组细胞IL-6R、gp130、TNFR I、TNFR II、Ras、C-myc表达均升高, P53、PTEN表达均降低。与模型组比较,黄芪多糖组细胞上清液sIL-6R含量升高,细胞IL-6R、gp130、TNFR I、TNFR II、Ras、C-myc表达均下降,而P53、PTEN表达均升高。结果提示,黄芪多糖能够减弱炎性微环境对刺激BMSCs表达IL-6R、TNFR的影响作用,并且维护肿瘤相关基因表达的相对稳定性。     

雷公藤甲素致小鼠肝损伤的机制研究

本文研究雷公藤甲素致肝损伤作用机制。将雌性C57BL/6小鼠20只随机分为2组,并以雷公藤甲素造模,通过检测血清中谷丙转氨酶(ALT)水平变化,以及观察小鼠肝脏组织切片HE染色结果,了解肝脏损伤情况;RT-PCR法检测小鼠肝脏中白细胞介素(IL)-17、IL-6、维甲酸孤儿核受体(ROR-γt)mRNA表达水平,ELISA法检测IL-17、IL-6蛋白表达水平,Western blot法检测小鼠肝脏中TLR4蛋白表达水平。与对照组比较,雷公藤甲素模型组小鼠血清ALT水平显著升高(P0.005),HE染色切片显示较多的肝细胞坏死和炎症细胞浸润,IL-17、IL-6、ROR-γt mRNA表达水平和IL-17、IL-6蛋白表达水平显著升高(P0.005),此外,TLR4蛋白表达水平显著升高(P0.005)。结果表明,雷公藤甲素所导致的肝损伤可能通过激活TLR4信号,增加IL-17、IL-6的表达,影响Th17特异性转录因子ROR-γt,进而促进Th17细胞活化,增强其致炎功能。     

重症肺炎儿童血清IL-17B升高及其介导人支气管上皮细胞表达IL-6的免疫机制研究

IL-17B是IL-17家族中的一员,参与了多种炎性疾病,但其在肺部炎症疾病中的研究较少。该研究检测了重症肺炎儿童血清中IL-17B的浓度,发现其较健康对照组显著升高。为进一步研究IL-17B与肺部炎症的关系,将IL-17B作用于人支气管上皮细胞。结果发现,经IL-17B刺激后, HBEC表达IL-6的水平明显升高,且具有时间和剂量依赖性;随后,通过信号通路抑制剂筛选以及Western blot检测细胞内信号通路蛋白磷酸化水平进行验证,发现IL-17B是通过活化P38 MAPK、ERK、JAK、NF-κB信号通路,进而上调人支气管上皮细胞表达IL-6。最后,再次检测了重症肺炎儿童血清中IL-6的水平,其浓度显著高于健康对照组;此外,还对其进行了相关性分析,发现重症肺炎儿童的IL-17B和IL-6水平呈显著正相关。以上结果表明,肺部炎症感染时, IL-17B能通过激活相关信号通路上调IL-6水平,进而促进免疫应答。研究IL-17B在肺部炎症感染中发挥的免疫效应有助于了解肺部感染免疫的进程,进而为临床提供有效的治疗策略。     

幽门螺杆菌致炎症微环境促进结肠癌SW620细胞发生EMT

该文探讨了幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, HP)炎症微环境对结肠癌SW620细胞发生上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)的影响。使用ELISA方法检测HP干预U937细胞后上清中炎症因子MIF、IL-1β等的变化;采用RT-PCR方法检测MIF、IL-1β、NF-κB基因水平的变化;细胞划痕实验检测炎症上清处理SW620细胞后SW620细胞的侵袭迁移能力; CCK-8方法检测HP处理U937细胞后炎症上清对SW620细胞增殖活性的影响;免疫荧光实验检测炎症上清处理SW620细胞后SW620细胞EMT相关蛋白Vimentin的荧光变化; Western blot实验检测脂多糖(LPS)上清干预SW620细胞后EMT相关蛋白Vimentin、E-cadherin和N-cadherin的变化; Western blot实验检测HP干预U937细胞后NF-κB蛋白,炎症上清处理SW620细胞后EMT相关蛋白Vimentin、E-cadherin和N-cadherin的变化。结果显示, HP干预U937细胞后引起巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、白细胞介素-1β(IL-1β)和NF-κB等相关炎症因子及基因表达升高; CCK-8结果表明HP干预U937细胞后, U937细胞毒性增强;划痕实验结果表明在12 h、24 h、36 h时,随着时间点的推移, SW620细胞的侵袭迁移能力有所增强;免疫荧光实验结果显示SW620细胞Vimentin绿色点状聚集显著增加; Western blot结果显示在16 h、24 h时间点U937细胞NF-κB蛋白表达明显升高; LPS上清干预SW620细胞后Vimentin蛋白表达无明显变化,N-cadherin蛋白24 h组表达减少, E-cadherin蛋白增多, HP炎症微环境上清干预SW620细胞后12 h、24 h、36 h时,随着时间点推移SW620细胞Vimentin蛋白表达显著增加, E-cadherin和N-cadherin蛋白表达显著减少。该实验研究结果表明,幽门螺杆菌致炎症微环境可以促进SW620细胞发生EMT。     

肺炎支原体Msr B经MAPK/NF-κB通路抑制脂质相关膜蛋白诱生促炎细胞因子

蛋氨酸亚砜还原酶B(methionine sulfoxide reductase, MsrB)是一种重要的氧化还原蛋白。该文探究了肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae, Mp) MsrB对Mp脂质相关膜蛋白(lipidassociated membrane proteins, LAMPs)刺激的人髓系白血病单核细胞(THP-1细胞)分泌促炎细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的调节及相关信号通路,以进一步了解Mp的免疫逃避机制。论文构建了pET28a(+)-msr B重组质粒,诱导表达、鉴定、纯化重组蛋白(rMsrB)并制备了多克隆抗体; Western blot检测MsrB、TLR1、TLR2、TLR6和MyD88蛋白表达水平及NF-κB p65、P38、ERK和JNK的总蛋白和磷酸化蛋白水平;间接免疫荧光分析NF-κB核转位; ELISA测定TNF-α和IL-1β分泌水平。结果显示Msr B可表达于Mp胞质和胞膜。rMsrB预处理可抑制LAMPs刺激的THP-1细胞合成TNF-α和IL-1β。Mp rMsrB可抑制LAMPs刺激的TH...     

研究: 多不饱和脂肪酸饮食对载脂蛋白E缺失小鼠含载脂蛋白B100脂蛋白代谢的影响

探讨不同多不饱和脂肪酸饮食对载脂蛋白E(apoE)缺失小鼠含apoB100脂蛋白代谢的影响．2月龄雄性载脂蛋白E缺失小鼠添加2%紫苏籽油或红花油饮食干预6周,检测其血脂和血清apoB100水平;测定肝脏组织中HMG-CoA还原酶活性;使用实时定量PCR分析肝组织中含apoB100脂蛋白代谢相关基因表达;蛋白质印迹(Western blot)检测PPARα蛋白表达;油红O染色检测肝细胞中脂质积累．结果显示,紫苏籽油饮食干预可降低血清LDL-C和apoB100水平,降低肝组织中HMG-CoA还原酶活性以及apoB100、FAS、HMG-CoAR、ACAT2、LRP、LDLR和SREBP-1c基因mRNA的表达,显著升高转录因子PPARα的mRNA和蛋白质水平,明显降低肝脏中脂质沉积．而红花油饮食干预后升高了小鼠血清甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇以及肝脏apoB100的mRNA表达水平,降低PPARα的mRNA和蛋白质水平,明显促进肝脏中脂质积累．结果提示在饮食中添加紫苏籽油可有效降低含apoB100脂蛋白的代谢,对动脉粥样硬化以及脂肪肝等疾病有更好的保护作用,对于正常人群以及家族性Ⅲ型高脂蛋白血症患者的日常膳食提供理论依据．     

球形孢子丝菌刺激小鼠树突状细胞表达前炎症细胞因子的研究

目的本研究旨在观察分离于新疆的球形孢子丝菌临床株刺激小鼠树突状细胞(Dendritic cells,DCs)后不同炎症因子分泌表达的特征,初步预测这些炎症因子的功能。方法菌株来源于淋巴管型孢子丝菌病患者。将该菌配置成不同浓度的菌悬液(1×10~4个/mL～1×10~7个/mL),刺激小鼠DC(细胞悬浮液浓度1×10~6细胞/mL),分别收集6 h、24 h、48 h、72 h时细胞培养上清液,采用酶免法检测IL-1β、IL-6、IL-4、TNF-α、IFN-γ的含量表达。结果以最低浓度菌液(1×10~4个/mL)刺激DC,被刺激后的DC分泌了IL-1β、IL-6和TNF-α,不同时间点分泌量分别为:IL-1β(6 h:21.26±3.03;24 h:24.04±4.25;48 h:24.90±4.31;72 h:27.29±6.09)、IL-6(6 h:44.38±3.73;24 h:101.72±12.28;48 h:133.10±8.67;72 h:180.38±13.84)、TNF-α(6 h:860.36±20.64;24 h:356.03±11.46;48 h:457.43±17.39;72 h:1454.53±19.46),但是IFN-γ和IL-4未见分泌表达。IL-1β和IL-6分泌水平有随时间和剂量依赖而逐渐增高,但是TNF-α释放量呈现不规律表达。结论 DC参与了球形孢子丝菌感染的天然免疫应答,分泌的关键炎症因子是IL-1β、IL-6、和TNF-α,表达量为TNF-α IL-6 IL-1β。其中IL-1β和IL-6分泌表达量具有时间和剂量依赖性。     

脂多糖对新生小鼠肺血管内皮细胞的影响及机制探讨

该文旨在探讨脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)对新生小鼠肺血管内皮细胞的影响及机制。将分离培养的肺血管内皮细胞随机分为空白对照组和LPS组;用10μg/mL的LPS处理细胞后分别于0 h、6 h、12 h、24 h、48 h时间点收集细胞标本进行检测;采用划痕实验观察LPS对肺血管内皮细胞迁移的影响;用荧光定量PCR(Real-time PCR, RT-PCR)检测白介素-1β(IL-1β)、巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA水平变化; Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)及核因子κB(nuclear factor kappa-B, NF-κB)相关蛋白P65水平的变化。结果显示,体外分离培养的肺血管内皮细胞成鹅卵石样排列, VIII因子相关抗原和CD31表面抗原荧光染色阳性。划痕实验中, LPS组细胞在12 h的迁移高于对照组(P0.001);荧光定量PCR检测到LPS组分泌的炎症因子IL-1β、TNF-α和趋化因子MIP-1α、MCP-1的mRNA表达明显高于对照组(P0.001); Western blot显示, LPS组与对照组相比, VEGF蛋白表达在24 h、48 h处降低(P0.05), VEGFR2蛋白表达在各时间段都明显降低(P0.001),同时, NF-κB相关蛋白P65活性显著升高(P0.05)。研究表明,脂多糖诱发的炎症反应影响肺血管内皮细胞的发育,其机制可能与NF-κB通路激活,诱导炎症因子、趋化因子表达升高和VEGF/VEGFR2表达下降有关。