碱性磷酸酶钙-钴法染色的不同包埋方法比较

目的探讨石蜡切片、冰冻切片及碳蜡(聚乙二醇)包埋切片在碱性磷酸酶染色中的应用,综合分析几种组织处理方法的优缺点,以便在病理诊断及科研工作中能找到更适合的碱性磷酸酶染色方法。方法取新鲜乳腺组织及肝组织,每份标本各取3块组织,根据包埋方法的不同,分为3组:石蜡切片碱性磷酸酶染色、冰冻切片碱性磷酸酶染色、碳蜡包埋切片碱性磷酸酶染色。结果 3组切片均可见黑色碱性磷酸酶的存在,其中肝组织内显示碱性磷酸酶呈黑色,沿胆小管分布;乳腺组织内显示碱性磷酸酶呈黑色沉淀弥漫分布于乳腺间质中。结论碳蜡包埋切片在碱性磷酸酶染色中,具有冰冻切片和石蜡切片的优点,并弥补了常规冰冻切片和石蜡切片染色的缺点和局限性,在病理诊断及科研工作中具有一定的应用价值。     

肺隐球菌病标本在六胺银染色中的最佳温育时间

目的探索肺隐球菌在六胺银染色中的最适当温育时间,以期获得最佳染色效果,提高病理标本肺隐球菌病的诊断率。方法收集厦门大学附属第一医院病理科2017年1月—2017年12月确诊的30例肺隐球菌感染病例,每例病例选取最具代表意义的一个蜡块连续切片3张,不同蜡块为区组因素,将每个蜡块切取的3张切片简单随机化分为3组,每组1张,通过区组随机化将90张切片随机分为A、B、C 3组,A组切片在六胺银染液步骤中采用水温箱60℃温育20～25min,B组切片在六胺银染液中温育30～35min,C组切片在六胺银染液中温育40～50min。以10分制对90张六胺银染色片进行评分,比较3组切片得分情况、显微镜下的染色效果与诊断准确率。结果 B组切片镜下显示:隐球菌染成空心黑色,细胞核呈蓝色,周围肺纤维组织呈淡棕色至棕色,隐球菌与周围肺纤维组织染色对比清晰,染色效果显著高于A组与C组。结论在六胺银染色中,采用六胺银染液在水温箱60℃温育30～35min,病理切片六胺银染色评分结果得分更高、六胺银染色效果更好、肺隐球菌病的诊断准确率更高。     

常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片的制作

目的探索一种结合常规染色与特殊染色的多种肌组织混合切片的制作方法。方法取实验动物狗的平滑肌、心肌、骨骼肌。所有组织均采取单一包埋制作蜡块。另取心肌组织块,制作显示心肌闰盘的特殊块染标本的蜡块。将四种蜡块切片的蜡带进行组合粘片,同时粘在一张载玻片上。对除心肌闰盘外的三种肌组织切片进行苏木素伊红染色。再将所有切片浸入二甲苯,最后共同封片。结果获得常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片。可在一张混合切片上分别观察到平滑肌、心肌、骨骼肌、心肌闰盘四种结构。不同标本的形态结构保存完好,对比非常清晰。结论采取单一包埋与不同蜡带的组合粘片法,过程简单,操作容易,适合制作常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片。     

一种用于DAPI染色的方法--Steedman's wax包埋切片法

以植物的胚珠和子房为实验材料,介绍一种用Steedman's wax 包埋对组织切片中的细胞核进行DAPI染色的方法.Steedman's wax 作为一种低熔点多酯蜡,具有与石蜡相似的性质,切片方法同常规石蜡切片,适合于切成厚度大于5 μm的连续切片.Steedman's wax包埋的切片能成功地进行DAPI染色.与用压片法和Technovit 7100或GMA包埋切片法进行的DAPI染色相比,用Steedman's wax 包埋切片法进行的DAPI染色具有廉价、操作简便、可进行连续切片、图象清晰等优点,特别在植物细胞程序化死亡(PCD)的研究中及细胞核DNA含量测定方面,有着较大的应用价值和潜能.     

一种用于DAPI染色的方法Steedman＇s wax包埋切片法

以植物的胚珠和子房为实验材料,介绍一种用Steedrnan‘s wax包埋对组织切片中的细胞核进行DAPI染色的方法。Steedrnan‘s wax作为一种低熔点多酯蜡,具有与石蜡相似的性质,切片方法同常规石蜡切片,适合于切成厚度大于5μm的连续切片。Steedrnan‘s wax包埋的切片能成功地进行DAPI染色。与用压片法和Technovit 7100或GMA包埋切片法进行的DAPI染色相比,用Steedrnan‘s wax包埋切片法进行的DAPI染色具有廉价、操作简便、可进行连续切片、图象清晰等优点,特别在植物细胞程序化死亡(PCD)的研究中及细胞核DNA含量测定方面,有着较大的应用价值和潜能。     

脂肪冰冻切片锇酸快速染色介绍

脂肪冰冻切片锇酸快速染色介绍＠梁化印￥解放军第２５２医院病理科脂肪冰冻切片锇酸快速染色介绍梁化印（解放军第２５２医院病理科，保定０７１０００）脂肪染色方法较多，传统的方法步骤繁琐需漂染，不易掌握。近年来，国内将微波应用于免疫组织化学、石蜡切片及特殊染色等方...     

不同因素对包埋质量的影响

目的 改良包埋操作细节,以期提升包埋质量。方法 比较采用不同包埋模具温度、不同第一次注蜡量、冷台添加水与否、不同加盖包埋底盒方式、不同二次注蜡角度在组织包埋合格率、撬出蜡块甲级率、HE切片组织结构完整性、细胞显示效果、免疫组织化学染色效果的差异。结果 通过预热包埋模具至70℃、减少第一次注蜡量、在冷台上加入少量的水、待模具侧壁的石蜡稍凝固后再加盖包埋底盒、二次注蜡时将包埋模具连同包埋盒倾斜10°～25°等条件可显著提高包埋合格率、蜡块质量甲级率、切片组织结构完整性、细胞显示效果和免疫组化染色优良率。结论 通过在包埋过程中延缓或加速石蜡凝固,控制注蜡量、调整注蜡角度等可显著提升包埋质量。     

病理快速冷冻切片染色的质控切片制备

目的探索一种较佳的病理快速冷冻切片染色质控片的制备方法。方法随机抽取60例快速冷冻组织,每例取2块组织,随机分为A、B二组,在-25℃速冻后,A组(标准组)切片放入AAF液(由95%乙醇A、乙酸A、甲醛F按85:5:10的比例配制而成)固定30s后立即进行HE染色,B组切片放入AAF液固定30s后取出室温晾干后放进冷冻切片机内过夜。余下的A组及B组组织进行后续2种不同的操作。C组:得到A组切片后的组织不做任何处理,直接放冷冻切片机机箱内,并将冷冻切片机箱体温度调高至-10℃,第二天上午再次调至-25℃;D组:得到B组切片后的组织于组织上加包埋剂覆盖后放冷冻切片机机箱内,余操作同C组。C、D两组于第二天上午8点再次进行冷冻切片后同B组一同进行HE染色,以十分制评定切片有无裂隙、皱褶或冰晶,染色后组织结构、细胞核着色和核质对比清晰度等6项指标的得分,分别与A组的染色片进行比较。结果 A、B两组切片质量评价指标得分无明显差别,C组切片无裂隙指标得分低于A组,D组无冰晶指标得分低于A组;B、C两组的组织结构清晰、细胞核鲜艳、核质对比清晰指标得分与A组比较无显著差异;D组组织结构清晰、细胞核鲜艳、核质对比清晰指标得分均低于A组。结论新鲜的组织冷冻切片后,切片立即放入AAF液固定30s,随后取出,常温晾干后再次放进冷冻切片机机箱内过夜直至第二天上午放入全自动染色机内进行HE染色,观察染液的染色力,适用于每天快速冷冻切片工作开展前的全自动染色机的染色质控。     

植物石蜡切片包埋、修蜡过程的改进

传统的石蜡切片包埋、修蜡操作过程耗时费力。采用金属框替代纸质包埋盒进行组织包埋,将蜡块冷水冷却改为自然冷却,趁蜡块未完全变硬之前进行快速修整。该方法不仅提高了实验效率,而且修出的蜡块工整一致,同时对后面的切片过程无任何影响。     

四格小孔径包埋盒在常规病理技术中的应用改进

目的探讨四格小孔径包埋盒应用于胃肠镜活检组织病理标本取材和石蜡包埋过程中的改进方法,以提高制片效率和质量。方法将胃肠镜活检组织随机放入四格小孔径包埋盒内作为对照组,包埋盒上不记录(对照组A)或记录(对照组B)每例活检组织的数量;改进组对四格小孔径包埋盒的四个分区重新定义为I-IV四个象限,取材时将1-4个活检组织分别对应放入I-IV四个象限的小格中。对照组和改进组标本均进行常规石蜡包埋、切片以及HE染色,比较3组间病理组织取下后放入包埋盒内的耗时、石蜡包埋过程中收集标本的耗时以及显微镜观察标本数与实际标本数的符合率。结果改进组平均每例标本取材后放置标本和包埋收集标本耗时均显著短于对照组B;与对照组A相比,改进组放置标本耗时无显著差异,而收集标本耗时显著缩短。改进组镜检标本数量符合率为100%,显著高于两个对照组。结论对四格小孔径包埋盒的四个小格重新定义并赋予特定的数量关系,将该规则应用于病理组织取材过程和常规石蜡包埋过程中可提高胃肠镜活检组织的制片效率和质量。     

冰冻切片的H&E和LFB染色技术的优化及其在自身免疫疾病中的应用

该文旨在探讨基于冰冻切片样品进行苏木素–伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和快蓝(luxol fast blue,LFB)染色方法的优化及其在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)组织病理分析中的应用。取正常及EAE建模后的C57BL/6小鼠脊髓样品各5份,每份脊髓样品一分为二,分别制成冰冻切片和石蜡切片样品,通过设置不同优化条件对这两组切片进行HE和LFB染色,比较两组切片染色的结果。石蜡切片经过HE染色和LFB染色后细胞的形态结构和组织结构清晰,冰冻切片HE染色和LFB染色后细胞结构清晰度几乎和石蜡切片一致,进一步将该方法应用于分析β-arrestin2基因敲除对于小鼠EAE发生中的病理变化,发现能够很好地重复出基因敲除加重EAE疾病这一现象。冰冻切片染色优化后,基于冰冻切片进行HE染色和LFB染色可以达到石蜡切片类似的效果,并且实验过程简洁快速,大大缩短了实验时间,提高了效率,可以较好地应用于分析自身免疫疾病病理变化,该优化方法将在自身免疫疾病特别是多发性硬化动物模型的研究中有广泛的应用。     

脂肪组织石蜡切片制作方法探讨

目的探讨脂肪组织石蜡切片制作方法,改善和提高其切片质量。方法将送检的脂肪组织切开固定于中性甲醛液中;取材后将标本放入脱水机中,调整脱水机设置程序,在常规方法的基础上适当增加组织再固定及脱水、透明时间;包埋时采取挤压组织等改进方法。结果通过改进和调整后制作的脂肪组织蜡块平整无塌陷,石蜡切片优良,厚薄均匀,完整,无空洞、无挤压、镜下组织结构完整清晰,细胞无挤压、重叠等现象。细胞形态清晰,着色均匀艳丽。结论通过上述方法的改进,能尽可能多地减少脂肪组织的脂滴,增加脂肪组织的硬度,使组织和石蜡能很好的融合在一起,有利于切出完整的厚薄均匀的石蜡切片,提高制片质量。     

肥胖、2型糖尿病过程中大鼠肝脏形态结构变化的比较

目的:探讨在肥胖、糖尿病过程中大鼠肝脏形态结构的变化.方法:Wistar雄性大鼠,随机分为:普通饮食组,高脂饮食组,高脂饮食+链脲佐菌素组.第0周随机抽取6只大鼠处死后取肝脏进行石蜡包埋,HE染色,制成切片.在饲养过程中选取不同时间点,各组随机处死2只大鼠,取肝脏进行石蜡包埋,HE染色,切片,镜下观察,比较各组差异.结果:与对照组相比,肥胖组大鼠肝脏组织中脂肪细胞数目增多、体积变大,随肥胖程度的增加而加剧,导致肝发生中、重度脂肪变性.肝细胞肿胀,肝窦间隙变窄,可见炎性细胞浸润增多,凋亡细胞增多.糖尿病组大鼠,肝脏组织中脂滴形成,出现大的脂囊.肝细胞出现细胞核固缩,凋亡细胞增多,有炎性细胞浸润,以淋巴细胞为主,未见巨噬细胞增多.血管壁硬化、玻璃样变性.结论:在肥胖/糖尿病发生、发展过中,大鼠肝脏中有脂肪的异位储存(肝脂肪样变性),并伴随有炎性细胞的浸润.     

不同处理方式及试剂盒对石蜡包埋组织提取DNA影响

目的:比较石蜡包埋组织三种不同的前处理方式用不同试剂盒提取DNA效果,以期达到能根据各自实验室条件差异,选择合适的样本处理方式及相应的试剂盒,获得高质量DNA。方法:在提取DNA前,对石蜡块包埋的组织分别进行三种前处理,形成三种组织形式:切片机连续切片,手动刮取石蜡组织块后获得手刮片和切片后烤片制成的玻片,用Qiagen和Tiangen试剂盒提取DNA,并用琼脂糖电泳,PCR扩增和测序进行鉴定。结论:如果样本是玻片形式的石蜡包埋组织,可以选择改良过的Qiagen试剂盒提取DNA;样本如果是石蜡块包埋的组织,有切片机的,切片之后用Tiangen试剂盒提取DNA;而没有切片机的实验室可以选择用刀片刮取石蜡块组织,用Tiangen试剂盒提取DNA。     

超声快速石蜡切片在脱落细胞学诊断中的应用

目的 探讨新型环保超声处理试剂配合超声快速组织处理仪应用于脱落细胞学诊断中的可行性.方法 收集湖北省中西医结合医院病理科2020年3月到2021年3月之间临床送检的胸水、腹水的脱落细胞学标本各30例.每例标本取材2块,同时进行超声快速石蜡处理(快蜡组)和常规石蜡处理(常规组).分别将其石蜡切片进行HE染色、免疫组织化学...     

木材制片技术的改进

木材制片是植物制片的一个分支。由于材料高度木质化,主要手段就是利用滑走切片机直接切取已经软化的木材,然后再进入漂白、染色、脱水、封片。对于质地松软的木材,有时也采用软化、石蜡或碳蜡包埋、石蜡切片的方法(在此不作介绍)。在国内出版的植物制片论著     

人类胚胎三叉神经运动核的定位研究

目的:探讨人类胚胎三叉神经运动核的位置及细胞分布特征。方法:选用非疾病死亡的引产胚胎标本4例,胎龄20-26周(根据胎儿B超检测和孕妇末次月经日期来计算并获得胎龄),在获取标本1-4小时内,对标本进行灌流固定。其中,2例标本在手术显微镜下开颅取出脑干,石蜡包埋、冰冻切片、HE染色、光学显微镜下观察、照相,其余2例标本在手术显微镜下开颅、分离三叉神经根,注入DiI结晶体、在37℃恒温箱内保存3个月,取出脑干、明胶包埋、冰冻切片,在荧光显微镜下观察、照相。结果:(1)胚胎三叉神经运动核位于脑桥三叉神经根连脑水平;(2)三叉神经运动核为多级细胞、胞体较大、位于三叉神经根入脑桥的一束纤维的腹内侧;(3)三叉神经运动核呈椭圆形,神经核细胞呈大小不等,体积较大,胞体呈多角形。结论:人类胚胎三叉神经运动核为大型的多级细胞成群所形成的核团,位于脑桥三叉神经根连脑水平。     

振荡法在组织石蜡制片中的应用

本文成功地把振荡法应用于组织石蜡制片中,采取鸡的各种组织,用常规、加温、振荡三种方法进行固定、脱水、透明和浸蜡,然后常规切片染色试验比较。结果表明,用振荡法从固定到浸蜡仪用2小时20分钟,提高功效10倍以上。具有传统方法所不及的简便、快速、切片薄及质量好等优点,尤其适用于临床病理检验的快速诊断。完全可以代替一般的快速石蜡切片和冰冻切片。     

果蝇胚胎石蜡切片制作方法的改良

探索一种不用在卵壳上手工打孔、适用于果蝇胚胎石蜡切片制作的方法。实验前期对果蝇胚胎进行渗透化处理,后期用琼脂糖、明胶、石蜡3种包埋辅佐剂对胚胎进行聚集、包埋、切片,最后进行HE及PASM染色。渗透化处理后的胚胎用琼脂糖或石蜡聚集并包埋后所制切片HE染色均显示胚胎形态结构正常,背景干净,而琼脂糖聚集法所制切片PASM染色背景呈灰色,明胶聚集法所制切片HE染色和PASM染色背景均显杂色且胚胎出现形变。3种包埋辅佐剂中,琼脂糖和石蜡均适于果蝇胚胎结构的保存,石蜡聚集法所制切片2种染色背景均无杂色,因此最适合做包埋辅佐剂。渗透化处理和石蜡聚集法结合后的改良方法适合于大样本且高脂含量的果蝇胚胎石蜡切片的制备。     

石蜡包埋植物材料在去除石蜡之前的番红──快绿染色法

石蜡包埋植物材料在去除石蜡之前的番红──快绿染色法染色步骤：ＦＡＡ固定液固定植物材料,乙醇一正丁醇系列脱水,植物材料呈透明体状态被包埋,切片厚度１０微米。用蛋白或明胶粘片剂粘贴蜡带,切片放在４０～４５℃烫板上烘干。不脱蜡直接进行染色,过程如下：（１）...