B淋巴瘤细胞条件液中促进CFU-Gm增殖放大活性的研究(简报)

在证实小鼠M 12.4.1-B淋巴瘤细胞条件液(M 12.4.1-CM)含有促进多向性造血祖细胞、粒单系祖细胞增殖放大活性的基础上,本实验对这种增殖放大活性做了进一步的研究。M 12.4.1-B淋巴瘤细胞株无血清培养过程中,条件液中促进CFU-Gm增殖放大活性随培养时间延长,呈逐渐增强趋势,促进CFU-Gm增长率在48小时达244.4±46.1;当延续至72小时后,其增殖放大活性不再明显增殖。     

IL-33转基因小鼠骨髓造血干／祖细胞向髓系细胞分化的能力增强

目的：利用IL-33转基因小鼠研究IL-33对造血干/祖细胞的增殖和分化影响。方法利用流式细胞仪分析IL-33转基因小鼠及同窝野生对照小鼠的外周血、脾脏、骨髓细胞的免疫表型及造血干细胞分化不同阶段细胞的数量变化;利用体外成克隆实验和细胞周期分析研究IL-33对于造血干细胞增殖能力的影响。结果与野生型小鼠相比,IL-33转基因小鼠B细胞和T细胞在外周血中都明显降低,粒细胞在外周血和骨髓中都有明显增加;IL-33转基因小鼠的骨髓造血干细胞和多能祖细胞数量减少,共同淋系祖细胞数量减少,共同髓系祖细胞和粒单系祖细胞数量增加;IL-33转基因小鼠的造血干细胞处于S-G2-M的细胞增多;体外单克隆实验发现IL-33转基因小鼠造血干细胞形成的集落数增加。结论 IL-33转基因小鼠造血干细胞增殖能力增强,更易向髓系细胞分化。     

人胎肝基质细胞培养上清液中造血生长因子的分析

采用人胎肝造血基质细胞的体外液体培养技术,结合造血干细胞和祖细胞的体外测试方法,研究了造血基质细胞所释放的造血生长因子与造血干细胞和祖细胞之间的相互作用。结果表明,在适宜的条件下,人胎肝造血基质细胞可在体外传代培养达100d之久。培养过程中,对不同时间收集的培养上清液进行测试的结果表明,这些贴壁细胞可以不断地释放多种造血活性物质。在100d培养过程中,上清液中始终都可以检出CFU-S增殖刺激物活性。培养第24天的上清液中还可检出BPF和GM-CSF活性。这些造血活性物质对CFU-S的生理状态和祖细胞的增殖与分化有着深刻的影响。但是在培养上清液中未检出IL-3样活性物质。     

重组IL－6与IL－3或／和GM－CSF合用对正常BN大鼠粒单系体外造血的调控效应

本研究探讨了重组人ＩＬ－６与大鼠ＩＬ－３和／或小鼠ＧＭ－ＣＳＦ结合对正常ＢＮ大鼠粒单系体外造血的调控效应。结果表明,ＩＬ－６在１０００－４０００Ｕ／ｍｌ呈剂量依赖性刺激粒系造血祖细胞集落形成及骨髓细胞的ＤＮＡ合成,集落以ＧＭ型为主,其刺激活性低于ＩＬ－３或ＣＭ－ＣＳＦ。ｌＬ－６与ＩＬ－３和／或ＧＭ－ＣＳＦ的结合对粒单系集落形成及ＤＮＡ合成无协同或相加作用,甚至出现拮抗效应,但却显著增大集落。提示ＩＬ－６可能具有双向调控作用,促进早期造血细胞的增殖,拮抗其它因子对晚期粒单系造血的刺激作用;具有重叠生物效应的这３种细胞因子在调控造血时,它们之间的相互作用应是顺序的而不是同时的。     

重组人白介素6对人骨髓粒单系祖细胞集落形成的影响

重组人白介素６对人骨髓粒单系祖细胞集落形成的影响赖春宁,任蕴芳,黎燕,沈倍奋（军事医学科学院基础医学研究所北京１００８５０）白介素６（ＩＬ－６）可作用于多能造血祖细胞,使ＣＦＵ－Ｍｉｘ形成增加,并且可提高白介素３（ＩＬ－３）对小鼠造血祖细胞的增殖活性...     

小鼠LAK细胞对粒-单系祖细胞增殖的影响

在小鼠粒单系祖细胞(CFU-GM)集落培养体系中加入LAK细胞能显著增强CFU-GM增殖,LAK∶BMC为8时,CFU-GM数比对照增加194.4%。LAK细胞条件液也有类似co-CSF的活性,单独LAK细胞条件液不能刺激CFU-GM增殖。LAK细胞和BMC共孵育4小时后再进行CFU-GM培养,低浓度LAK细胞仍能增强CFU-GM增殖,而高浓度LAK细胞则显著抑制CFU-GM增殖,LAK∶BMC为8时,CFU-GM仅为对照的27.6%。作者认为小鼠LAK细胞能通过分泌某些co-CSF增强CSF的活力,而LAK细胞对CFU-GM又有接触杀伤的活性。     

粒单系造血祖细胞(CFU-GM)琼脂半固体培养的原位固定及鉴定染色

用粒单系造血祖细胞（CFU－GM）体外琼脂半固体培养法,琼脂块原位固定,Wright染色与细胞化学和免疫细胞化学技术,对培养人的骨髓CFU－GM进行集落性质鉴定,结果表明：Wright染色能区别集落的性质及细胞的分化程度：CFU－GM的细胞中PAS、POX呈阳性反应;CD14、CD15分别在单核细胞和粒细胞的胞浆或胞膜上表达。该方法对鉴定细胞集落类型、集落中细胞的分化与成熟程度是简便可靠的手段。     

重组IL—6与IL—3或／和GM—CSF合用对正常NB大鼠粒单系体外…

本研究探讨了重组人ＩＬ－６与大鼠ＩＬ－３和／或小鼠ＧＭ－ＣＳＦ结合对正常ＢＮ大鼠粒单系体外造血的调控效应。结果表明,ＩＬ－６在１０００－４０００Ｕ／ｍｌ呈剂量依赖性刺激粒系造血祖细胞集落形成及骨髓细胞的ＤＮＡ合成,集落以ＧＭ型为主,其刺激活性低于ＩＬ－３或ＧＭ－ＣＳＦ。ＩＬ－６与ＩＬ－３和或ＧＭ－ＣＳＦ的结合对粒单系集落形成及ＤＮＡ合成无协同或相加作用,甚至出现拮抗效应,但却显著增大集落,提示ＩＬ     

影响人骨髓CFU-C产率某些因素的分析

在CFU-C(粒系或单核-巨噬细胞集落生成单位)体外琼脂培养中,只有在CSF(细胞集落生成刺激因子)的作用下粒系祖细胞才能增殖、分化,生长成为细胞集落。CSF来源广泛,其刺激活力文献报告不一。此外,CFU-C产率波动较大,影响因素甚多。本文在相同的实验条件下,比较了不同来源的CSF刺激活力,并对影响CFU-C产率的某些因素进行了分析。     

检测重组细胞因子生物活性的细胞培养方法的探讨

目前有关造血的基因重组的细胞因子不断出现,如EPO、TPO、G-CSF、SCF及多种白介素等等。如何评价这些细胞因子的生物活性,已成为重要研究课题,基中对造血祖细胞的增殖分化的影响是一个重要的技术途径。本文就常用的几种体外培养体系及方法作一探讨,以提供检测基因重组细胞因子活性的有效方法。 ①培养体系的选择,大致分为二大类:琼脂培养法主要用于粒-巨噬系祖细胞CFU-GM;培养甲基纤维素法,用于CFU-E、BFU-E、     

巨核细胞生成与调控的研究进展

巨核细胞由骨髓造血干细胞分化为巨核系祖细胞,再经过渡细胞的增殖分化,成熟后生成血小板。这一过程受到巨核细胞集落刺激因子和血小板生成素的特异性刺激,白细胞介素３,粒单系集落刺激因子,白细胞介素６和红细胞生成素等细胞因子的非特异性刺激,及血小板蛋白因子、β转化生长因子和干扰素的抑制,以及辅助骨髓细胞的调控。     

小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液及其超滤组分对粒巨噬系祖细胞生长的影响

本研究通过传代培养小鼠骨髓内皮细胞系细胞,收集无血清条件培养液(mBMECCM),将其作多级串联超滤,获得分子量大于10、3～10、1～3、05～1kD和小于05kD超滤组分。进行粒巨噬系造血祖细胞集落形成试验,检测了它们的作用。mBMECCM和3～10kD组分对粒巨噬系祖细胞(CFUGM)生长未见明显影响,而分子量大于10kD和05～1kD组分促进CFUGM的增殖,分子量1～3kD和小于05kD组分则抑制CFUGM的增殖。这4种超滤组分对CFUGM生长的效应均有剂量依赖性。这些结果提示,在体外培养条件下,小鼠骨髓内皮细胞分泌若干种活性成分,分别对CFUGM的生长起促进或抑制作用     

琼脂扩散盒及琼脂平皿法培养粒系祖细胞性质异同的初步探讨

将异丙肾上腺素直接加入培养体系或先与骨髓细胞孵育1小时后再作培养,能显著促进CFU-D 增殖。此效应能被心得安阻断。异丙却不能使 CFU-C 产率增加,证明 CFU-D 在具有β-受体似多能造血干细胞而 CFU-C 无β-受体。CFU-D 与 CFU-C 的 Ara-C 自杀率和增殖动态基本相同,表明 CFU-D 和 CFU-C 是性能相似但又处于不同分化阶段的粒系祖细胞。     

人胎肝中低分子抑瘤物的分离纯化、结构鉴定及其对肿瘤细胞生长的选择性抑制

在胎儿组织中存在一类低分子肿瘤抑制物,胎肝细胞的甲醇－丙酮提取物中保留有大部分抑瘤活性,用体外液体培养条件下对人急性粒系白血病细胞系（HL－60）的抑制作用为指标,跟踪指导分离过程,提取物经反相C18中压液相色谱,Sephadex LH-20凝胶色谱及氨基键合相高效液相色谱分离得到一纯活性物质。经NMR和MS鉴定为7－酮基胆固醇（7－ketocholesterol,7-KC)。体外琼脂培养条件下7－KC对小鼠WEHI－3和S－180细胞较对正常小鼠骨髓粒－巨噬系祖细胞有更强的抑制增殖及集落生成作用,7－KC对HL－60细胞增殖较对正常人骨髓CFU－GM有更强的抑制作用。     

小分子化合物Me6TREN促进小鼠骨髓中造血干/祖细胞的增殖

目的:探讨小分子化合物Me6TREN对小鼠骨髓中造血干/祖细胞的增殖作用。方法:采用细胞计数、细胞集落形成能力检测、流式细胞术检测细胞表面标志等实验技术,观察Me6TREN对小鼠骨髓细胞的影响。结果:皮下注射Me6TREN 12 h后,Me6TREN组的集落形成能力、造血干/祖细胞表面标志lin-Sca-1+c-Kit+的比例均明显高于对照组;在体外分离培养的小鼠骨髓单个核细胞,4 d后Me6TREN组细胞的集落形成能力及造血干/祖细胞的增殖能力均高于对照组。结论:Me6TREN对小鼠骨髓造血干/祖细胞有一定的促增殖作用。     

人红细胞生成素的分离、纯化及鉴定

 用自制的苯基-琼脂糖CL-4B和羟基邻灰石等层析材料,从再生障碍性贫血病人尿中分离、纯化制得了红细胞生成素(EPO)。用多血小鼠红细胞~(56)Fe参入法测定该制品在体内的生物活力。用小鼠与人骨髓红系祖细胞培养法测其在体外的生物活力。实验结果说明,我们自制的EPO制品,不仅能用于动物,也能用于人骨贿红系祖细胞的培养。用Azocoll法测该制品中蛋白水解酶活力为阴性。     

rhGM—CSF对人骨髓粒单祖细胞集落形成及U937细胞分化的影响

本文应用造血祖细胞体外培养技术研究了重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ—ＣＳＦ）对正常人骨髓粒单祖细胞集落（ＣＦＵ—ＧＭ）形成的影响,结果表明ｒｈＧＭ—ＣＳＦ在体外能促进细胞集落的形成,此种效应在一定范围内呈剂量依赖关系,与ＬＥＵＣＯＭＡＸ各剂量组相比无显著性差异。采用ＮＢＴ还原试验和ＡＰＡＡＰ法观察了ｒｈＧＭ—ＣＳＦ对Ｕ９３７细胞分化的影响,结果显示ｒｈＧＭ—ＣＳＦ能抑制Ｕ９３７细胞的增殖,促进其分化,部分细胞具有ＮＢＴ还原能力,ＣＤ１１６阳性细胞数增加。     

低氧对CD34~ 造血干/祖细胞增殖分化及其对细胞因子依赖性的影响

采用免疫磁珠法分离脐血CD34 造血干 /祖细胞 ,进行低氧和常氧条件下单个核细胞 (MNC)及CD34 细胞的半固体及液体培养 ,计细胞总数和集落产率 ,并通过流式细胞仪检测细胞表型和细胞周期 ,以探讨造血干/祖细胞在低氧环境下增殖分化性能的改变及其对细胞因子反应性的变化。结果显示 :CD34 细胞在低氧条件下生成的BFU E集落数 ( 32 4 8± 41 4/10 4 细胞 )明显增多 (对照为 191 2± 34 5 /10 4 细胞 ,P <0 0 1) ;在无细胞因子存在的液体培养体系中 ,低氧组的BFU E产率 ( 15 2 4± 2 2 6 /10 4 细胞 )明显高于常氧组 ( 74 2± 9 3/10 4 细胞 ,P <0 0 1) ;低氧培养细胞中CD34 细胞的比例高于对照 2 5± 1 2倍 (P <0 0 5 )。但MNC生成的BFU E在常氧和低氧条件下无显著差异。这些结果表明 :体外低氧环境能显著增加CD34 造血干 /祖细胞形成红系祖细胞的产率 ,且使其对细胞因子的依赖性降低 ,并对早期红系祖细胞的维持有增强作用 ,但对粒系祖细胞的增殖则有抑制作用     

人胎肝中低分子抑瘤物的分离纯化、结构鉴定及其对肿瘤细胞生长的选择性抑制作用

在胎儿组织中存在一类低分子肿瘤抑制物。胎肝细胞的甲醇－丙酮提取物中保留有大部分抑瘤活性。用体外液体培养条件下对人急性粒系白血病细胞系（ＨＬ－６０）的抑制作用为指标,跟踪指导分离过程。提取物经反相Ｃ１８中压液相色谱、ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０凝胶色谱及氨基键合相高效液相色谱分离得到一纯活性物质,经ＮＭＲ和ＭＳ鉴定为７－酮基胆固醇（７－ｋｅｔｏｃｂｌｅｓｔｅｒｏｌ,７－ＫＣ）。体外琼脂培养条件下７－ＫＣ对小鼠ＷＥＨ１－３和Ｓ－１８０细胞较对正常小鼠骨髓粒一巨噬系祖细胞有更强的抑制增殖及集落生成作用。７－ＫＣ对ＨＬ－６０细胞增殖较对正常人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ有更强的抑制作用。     

裂变中子照射狗血清集落刺激因子的变化

利用体外半固体琼脂培养骨髓粒单系祖细胞的方法测定狗血清中集落刺激因子(CSF)活力。狗受1.3、1.7和2.0Gy裂变中子照射后1～15d,受照射动物血清CSF持续上升。2.0Gy照射动物死前血清CSF活力可为照射前7～20倍。1.3Gy及1.7Gy照射活存狗照射后13～30d CSF活力直线下降。γ线3.5和2.5Gy照射狗早期血清中CSF活力变动呈波动性,5～10d后持续上升的幅度也不如中子照射动物。 实验结果证明,血清CSF活力和外周血白细胞数的变化呈负相关。本文对中子照射动物血清CSF活力升高的机理和CSF在中子照射动物造血恢复中的意义进行了探讨。