尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅱ与活化凝血因子Ⅹ的结合性质

皖南尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅱ（ACFⅡ）与活化凝血因子Ⅹ（FⅩa）在钙离子作用下形成了1∶1的复合物,从而延长凝血时间.这个复合反应是依赖于钙离子的,ACFⅡ在没有钙离子存在条件下不能与FⅩa形成复合物.ACFⅡ是凝血因子Ⅸ或凝血因子Ⅹ结合蛋白家族中一个新发现的成员,其相对分子质量为29 468.1.ACFⅡ分子中含有251个氨基酸残基,其氨基酸组成与这一家族中其他成员十分相似.ACFⅡ在抗凝血反应中存在一临界浓度（12 nmol/L）,只有在高于其临界浓度时,才表现出显著的抗凝血活性.     

凝血因子Ⅸ/凝血因子Ⅹ结合蛋白家族的研究进展

凝血因子Ⅸ/Ⅹ结合蛋白家族是近来发现的C型动物凝集素超家族中一个亚家族.它们存在于蝰科蛇毒中,不具有酶活性,通过与凝血因子Ⅸ或凝血因子Ⅹ结合来延长凝血时间.在钙离子存在下结合在凝血因子Ⅸ/Ⅹ分子中γ-羧基谷氨酸区域.它们彼此之间具有很高的序列同源性,都是由两条同源的肽链通过一对二硫键相连.两条肽链都具有C型糖识别区的二硫键构型,各含一个钙离子结合位点.其中habu凝血因子Ⅸ/Ⅹ结合蛋白的晶体结构已经测定,除掉相互交叠的中心环外,两条肽链都具有类似于鼠甘露糖结合蛋白的结构.     

凝血酶原复合物中影响激活凝血因子测定因素的探讨

含肝素的凝血酶原复合物（ＰＣＣ）用适量的硫酸鱼精蛋白中和后,作１：１０和１：１００稀稀测定激活凝血因子。肝素影响激活凝血因子测定,不同活性单位的ＰＣＣ对某些厂家生产的ＰＣＣ激活凝血因子测定无影响,但对有厂家生产的ＰＣＣ激活凝血因子测定有影响。对国内５家血制品生产单位生产的１５批ＰＣＣ进行激活疑血因子测定,凝血酶活性通过者激活凝血因子也能通过。     

人凝血酶原复合物在制备过程中凝血因子活性的检测和分析

目的对人凝血酶原复合物在制备工艺中凝血因子效价进行检测和分析。方法对PCC制备过程中的血浆、S/D病毒灭活、冻干工艺、干热病毒灭活前和后分别取样,检测分析凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ效价,分别分析S/D病毒灭活、冻干工艺、干热病毒灭活前和后凝血因子效价的变化情况。分析PCC干热病毒灭活后的样品中四种凝血因子的效价比例。结果三批血浆中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ的活性在0.8~1.2 IU/m L之间。S/D病毒灭活前后PCC冻干工艺前后PCC中四种凝血因子活性无明显变化,而干热病毒灭活后PCC中四种凝血因子活性均有明显下降。三批PCC中四种凝血因子的比例基本一致,但是凝血因子Ⅶ效价较低,凝血因子Ⅱ效价偏高。结论通过PCC制备工艺中凝血因子效价的检测和分析可实现良好的质量控制。     

复制缺陷型腺病毒载体介导的人凝血因子Ⅷ基因在体内外的高效转移和表达

为了构建含人凝血因子Ⅷ基因的重组腺病毒载体系统,首先构建了含ＦⅧ（Ｂ结构域缺失型）的载体质粒ｐＡｄ－ｈＦⅧ和插入内含子结构的ｐＡｄＩ－ｈＦⅧ,经脂质体介导,证明两质粒的目的基因均能在ＣＯＳ－７细胞中表达有凝血活性的ＦⅧ因子,其中经纯化的载体质粒ｐＡｄ－ｈＦⅧ与ｐＢＨＧ１０经脂质体介导,共转染至２９３包装细胞,经同源重组和Ｅ１蛋白反式互补,形成Ｅ１／Ｅ３缺失型重组腺病毒载体颗粒Ａｄ－ｈＦⅧ．ＰＣＲ检则到病理２９３培养液上清的病毒ＤＮＡ中具有目的基因扩增片段,证明病毒ＤＮＡ含有ＦⅧ基因．经扩增、纯化、滴度测定,用于感染离体细胞ＣＯＳ－７、Ａ５４９、Ｌ９２９、２９３．证实该病毒能在上述细胞中高效转移和表达目的基因,其表达量具有一定范围内的剂量依赖性．ＣＯＳ－７细胞中,ＭＯＩ＞１０００时,有细胞毒效应,表达量反而下降．经耳缘静脉注射Ａｄ－ｈＦⅧ至家兔后,１～４周能测到一定水平的ＦⅧ蛋白,１周内升至最高峰．免疫组化研究表明感染的离体细胞和家兔肝等组织均有ＦⅧ表达,其中肝脏表达最高．为甲型血友病的基因治疗开辟了新途径     

牛磺酸调节缺氧性肺、脑血管反应的机理研究

本实验从磷脂酶Ａ＿２（ＰＬＡ＿２）、前列腺素（ＰＧｓ）、白三烯（ＬＴｓ）和过氧化脂质（ＬＰＯ）方面探讨了牛磺酸调节肺、脑血管对急、慢性缺氧反应的机制。急性缺氧时狗出肺与出脑血中ＬＰＯ增加,ＰＬＡ,活性有升高趋势,但出脑与出肺（入脑）血相比无显著性差异。出肺与出脑血中ＬＴＣ＿４、ＴＸＢ＿２、６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１ａ）及ＴＸＢ＿２／６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１ａ）比值均升高。慢性缺氧大鼠肺、脑组织中ＰＬＡ＿２活性均升高。牛磺酸增加缺氧时６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１ａ）,减弱其它变化。提示牛磺酸对缺氧性肺缩血管反应的调节作用可能与降低缺氧时ＰＬＡ＿２活性,抑制脂质过氧化和ＬＴＣ＿４、ＴＸＡ＿２生成,降低ＴＸＡ＿２／ＰＧＩ＿２比值有关;而牛磺酸减弱缺氧性脑舒血管反应不是直接通过上述变化起作用的。     

小鼠卵受精和人工激活过程中胞质游离Ca^2＋变化及其在卵激活中的作用

休止于第二次成熟分裂中期（ＭＩ）的小鼠卵母细胞分别乙醇,钙离子载体Ａ２３１８７、电刺激或精子激活并用Ｃａ＾２＋特异荧光探针－Ｆｕｒａ２／ＡＭ测定细胞内游离Ｃａ＾２＋的变化。结果表明,受精诱导ＭⅡ卵内游离Ｃａ＾２＋浓度多次跃升（ｏｓｃｉｌｌａｔｉｏｎ）乙醇,钙离子载体及１次电刺激仅诱导胞内Ｃａ＾２＋１次升高,人工诱导激活的卵可象正常受精卵一样卵裂并发育至囊胚,用ＥＧＴＡ阻止受精和人工激活过程中卵内游     

PAF对肺内小动脉平滑肌细胞TXA_2，PGI_2乃Ca~（2＋）－ATPase的影响

本工作采用分离培养家兔肺内小动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣｓ），观察了外源性血小板活化因子（ｐｌａｔｅｌｅｔａｃｔｉｖａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＰＡＦ）、ＢＮ５２０２１（ＰＡＦ受体拮抗剂）、吲哚美辛、维拉帕米对ＰＡＳＭＣｓ产生血栓素Ａ_２（ＴｘＡ_２）、前列环素（ＰＧＩ_２）及对细胞膜Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力的影响。结果表明：（１）基础状态下ＰＡＳＭＣｓ存在花生四烯酸（ＡＡ）代谢。（２）外源性ＰＡＦ通过受体后途径激活环加氧酶促进ＡＡ代谢致ＴＸＡ_２及ＰＧＩ－２增加，ＴＸＡ_２／ＰＧＩ_２比值无明显变化。（３）外源性ＰＡＦ能直接抑制Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力。（４）维拉帕米可逆转ＰＡＦ抑制ＰＡＳＭＣｓ膜Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力的效应。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)cDNA的克隆与表达

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｒｅｌａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｉｎｇｌｉｇａｎｄ,ＴＲＡＩＬ）是新近发现的肿瘤坏死因子家族成员,亦称凋亡素２配体（Ａｐｏ２ｌｉｇａｎｄ,Ａｐｏ２Ｌ）［１,２］．由于ＴＮＦ参与机体的免疫调节和炎症反应,并发挥细胞毒作用,因而为世人所瞩目［３,４］．研究表明,ＴＲＡＩＬ与ＴＮＦ和Ｆａｓ／Ａｐｏ１配体一样,为典型的Ⅱ型跨膜蛋白,Ｃ端细胞外区域形成同源三聚体的亚结构,而Ｎ端１５～４０氨基酸为疏水区域并形成跨膜结…     

人FasL的研究进展

ＦａｓＬ（Ｆａｓ ｌｉｇａｎｄ）为Ⅱ型跨膜糖蛋白,属于肿瘤坏死因子（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ,ＴＮＦ）家族成员,与其它成员包括ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ３７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ等在结构上有一定的同源笥,但与这些成员（除ＴＮＦ外）诱导细胞分化,增殖的作用不同,ＦａｓＬ的主要生物学活性是诱导Ｆａｓ＾＋细胞的凋亡,因而在淋巴细胞的克隆选择,免疫耐受的形成以及一些疾病的发生过程中都有     

尖吻蝮蛇毒内一种新抗凝血因子ACFⅡ的纯化及特性

利用阴离子交换层析、凝胶过滤及阳离子交换层析三步方法,从皖南尖吻蝮蛇毒中分离纯化到一个新的抗凝血因子ＡＣＦⅡ（ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒⅡ）。纯化的ＡＣＦⅡ在ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＩＥＦ－ＰＡＧＥ图谱上均呈单一区带。ＡＣＦⅡ由两条分子量为１４．６ｋＤ的肽链通过二硫键连接在一起,其等电点为７．０。ＡＣＦⅡ具有显著的抗凝血活性,在体外延长ＰＰＴ时间的最终浓度为０．４ｍｇ／Ｌ。Ａ     

茶叶片阶段性返白过程中色素蛋白复合体的变化

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ盘状电泳从温敏型阶段性返白的安吉白茶完全复绿叶中分离出２条叶绿素ａ蛋白复合物（ＣＰⅠ）、２条叶绿素ａ／ｂ捕光蛋白复合物（ＣＰⅡ：ＬＨＣＰ１、ＬＨＣＰ２）和１条游离色素带,而全白期叶片中则未发现ＣＰⅠ和ＣＰⅡ,但有很少量ＣＰⅡ的脱辅基蛋白和游离色素。此类叶片开始得绿时,ＣＰⅠ、ＬＨＣＰ１和ＬＨＣＰ２同时出现,但寡聚形式（ＣＰⅠａ）的恢复稍迟些,各种色素蛋白复合体的含量均随绿逐步上升     

凝血因子重塑血管

血管的完整性对机体的血液运输至关重要。当血管受损时 ,纤维蛋白在伤口处聚集血小板形成血凝块而止血。通常认为 ,凝血酶对血小板的激活是通过与其表面表达的蛋白酶激活的Ｇ蛋白偶联受体 (ｐｒｏｔｅａｓｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄＧｐｒｏｔｅｉｎ -ｃｏｕｐｌｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ,ＰＡＲｓ)而实现的。圣佛朗西科加利福尼亚大学心血管研究中心的ＣｏｕｒｔｎｅｙＴ .Ｇｒｉｆｆｉｎ等报道 ,在胚胎发育中ＰＡＲ1在血管内皮细胞中表达 ,ＰＡＲ1缺陷的胚鼠有近半数在妊娠中期因出血不止而死 ;若用内皮细胞特异的启动子使ＰＡＲ1表达 ,则会减…     

加压素(4 -8)对大鼠脑内Ca2+/CaM依赖的蛋白激酶Ⅱ自身磷酸化的影响

大鼠皮下注射加压素（ＡＶＰ）（４－８）１ｈ后,大脑皮层中Ｃａ＾２＋／ＣａＭ依赖的蛋白激酶Ⅱ自身磷酸化程度与对照组比较增高１９２％,Ｐ〈０．００１;海马中增高４０％,Ｐ〈０．０５。ＣａＭＫⅡ的自身磷酸化程度依赖于Ｃａ＾２＋及ＣａＭ浓度。在用抗 ＣａＭＫⅡα单克隆抗体对给药１ｈ组样品和对照组样品进行免疫印迹检测时,发现皮下注射ＡＶＰ（４－８）１ｈ后,大脑皮层中ＣａＭＫⅡα亚基的蛋白量没有明显差异。ＡＶ     

白细胞介素-1β对骨髓基质细胞膜电位及细胞内Ca2+和pH的影响

采用荧光染料 Ｄｉ Ｂ Ａ Ｃ４（３）, Ｆｌｕｏ３／ Ａ Ｍ 和 Ｓ Ｎ Ａ Ｌ Ｆ Ｃａｌｃｅｉｎ／ Ａ Ｍ 分别标记小鼠骨髓基质细胞（ Ｂ Ｍ Ｓ Ｃ）,在激光扫描共聚焦显微镜下直接监测重组人白细胞介素１β（ Ｉ Ｌ１β）刺激后细胞膜电位,细胞内游离 Ｃａ２＋ 浓度和胞浆 ｐ Ｈ 的实时动态变化． 结果发现： Ｉ Ｌ１β加入测定体系后浓度依赖性地引起 Ｂ Ｍ Ｓ Ｃ 膜电位的迅速改变． 低浓度时发生去极化反应,高浓度时发生超极化反应． 非受体方式作用的 Ｉ Ｌ１β肽段 １６３１７１ 对膜电位无影响． Ｉ Ｌ１β不影响细胞内 Ｃａ２＋ 的浓度和胞浆ｐ Ｈ． 研究表明膜电位的变化为 Ｉ Ｌ１ 受体后早期事件,它与细胞内 Ｃａ２＋的浓度和胞浆 ｐ Ｈ 的调节无关．     

HeLa细胞的反式作用因子CTF／NF－1与其顺式作用元件的特异性作用

本文运用凝胶延迟反应（ＧｅｌＲｅｔａｒｄａｔｉｏｎＡｓｓａｙ）和足迹法（Ｆｏｏｔｐｒｉｎｔｉｎｇ）研究了ＨｅＬａ细胞核蛋白中的反式作用因子ＣＴＦ／ＮＦ－１与其对应的顺式作用元件的特异性作用。研究结果表明ＨｅＬａ细胞的ＣＴＦ／ＮＦ－１包含有不同分子量的组分,它们均能特异性结合于特异位点ＡＴＡＴＴＧＧＣＴＴＣＡＡＧＣＣＡＡＡＡＴＧＧＡ序列,形成至少５种不同分子量形式的因子－元件复合物。这一结果对阐明ＣＴＦ／ＮＦ－１复杂多样的调控机制及其组成种类有重要意义。此外,本文还建立了一种制备核蛋白提取物的新方法,有效地解决了因反式作用因子含量极低带来的研究上的困难。     

牛磺酸对血管紧张素Ⅱ改变培养心肌细胞内游离Ca^2＋深度作？…

目的和方法：用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光显示测定细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度（〖Ｃａ＾２＋〗ｉ）的方法,我们研究了牛磺酸（Ｔａｕ）对血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）引起的培养心肌细胞（〖Ｃａ＾２＋〗ｉ）变化的影响。结果：在有Ｃａ＾２＋和无Ｃａ＾２＋的缓冲液中,ＡｎｇⅡ（１,１０,１００,１０００ｎｍｏｌ／Ｌ）引起的〖Ｃａ＾２＋）ｉ和蔼同。在含Ｃａ＾２＋的缓冲液中,Ｔａｕ（１０,２０ｍｏｌ／Ｌ）可隽浓度地抑制Ａｎｇ     

脑内血管紧张素Ⅱ系统在穹窿下器升压反应中的作用

文献报道脑内存在血管紧张素Ⅱ系统。与此一致,本工作用氨基甲酸乙脂麻醉、箭毒制动、人工呼吸的大鼠观察到：（１）穹窿下器（ＳＦＯ）、室旁核（ＮＰＶ）或ＮＰＶ的投射区：延髓头端腹外侧区（ＲＶＬＭ）、导水管周围灰质（ＰＡＧ）、蓝斑（ＬＣ）内注入血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）均引起升压反应;（２）ＳＦＯ升压反应可被双侧ＮＰＶ或ＲＶＬＭ内预先注入［Ｓａｒ１,Ｔｈｒ８］ＡⅡ（ＳＴＡⅡ,ＡⅡ拮抗剂）明显衰减,ＮＰＶ升压反应也可被ＲＶＬＭ内注入ＳＴＡⅡ削弱;（３）双侧ＰＡＧ用ＳＴＡⅡ预处理后,ＡⅡ引起的ＮＰＶ或ＳＦＯ升压反应均明显减小;（４）ＮＰＶ升压反应还可被双侧ＬＣ内预先注射ＳＴＡⅡ衰减,但ＳＦＯ升压反应不受影响。结合我们以往工作曾显示兴奋ＰＡＧ或ＬＣ均可作用于ＲＶＬＭ引起升压反应,目前的结果表明：ＳＦＯ内的ＡⅡ能神经元通过ＮＰＶ内ＡⅡ能神经元,不仅可直接作用于ＲＶＬＭ引起升压反应,而且还可间接通过ＰＡＧ作用于ＲＶＬＭ起升压作用,但ＬＣ不参与ＳＦＯ升压反应。     

神经节苷脂（Gangliosides）对人红细胞膜Ca~（2＋）－Mg~（2＋）ATPase的影响

神经节苷脂（Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ）是红细胞膜Ｃａ~（２＋）－Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ的一种激活剂,这种激活作用也是依赖于Ｃａ~（２＋）存在。在２００μｍｏｌ／ＬＣａ~（２＋）存在的反应体系中,１００μｇ／ｍＬＧａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ对Ｃａ~（２＋）－Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ的激活作用最大,为基本酶活性的１５０％以上。实验还发现ＣａＭ拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）、粉防已碱（Ｔｅｔ）等也同样抑制Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ的这种激活作用。其抑制的ＩＣ_（５０）值为２５μｍｏｌ／Ｌ和３０μｍｏ１／Ｌ;而此浓度下抑制剂存在的反应体系中,对Ｃａ~（２＋）－Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ的基本活性影响不大。     

人食管鳞状上皮癌糖复合物表达的研究

凝集素可与其相对应的糖复合物特异性结合。在癌症形成过程中细胞表面经历着显著的变化,本文用十种生物素化凝集素即ＵＥＡ－Ｉ、ＲＣＡ－Ｉ、ＤＢＡ、ＰＳＡ、ＰＮＡ、ＢＳＬ、ＬＣＡ、ＷＧＡ、ＣｏｎＡ和ＳＢＡ作为探针,对正常食管上皮和食管鳞状上皮癌进行研究,以确定正常食管上皮和食管鳞状上皮癌中糖复合物的改变,结果发现,ＰＮＡ和ＰＳＡ在正常食管和食管鳞状上皮癌中均无反应,ＲＣＡ－Ｉ、ＤＢＡ、ＢＳＬ、ＬＣＡ、ＣｏｎＡ和ＳＢＡ受体在正常和癌组织中有着特征性变化,ＢＳＬ和ＤＢＡ在食管中无反应,ＬＣＡ、ＳＢＡ和ＲＣＡ－１正常食管和食管鳞状上皮癌中反应方式不同,ＣｏｎＡ和ＷＧＡ则在同一癌组织的不同部位都显示出不同的反应。尽管ＵＥＡ－Ｉ在正常食管和食管鳞状上皮癌均呈阳性反应,但似乎未表现出有意义的变化。上述结果提示食管癌的发生与含α－Ｄ－ＧａｌＮＡｃ（ＤＢＡ和ＳＢＡ）、β－Ｄ－Ｇａｌ／β－Ｎ－ａｃｅｔｙｌ－Ｄ－Ｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ（ＲＣＡ－Ｉ）、α－Ｄ－Ｇｌｃ／α－Ｄ－Ｍａｎ（ＬＣＡ和ＣｏｎＡ）、［β－（１－４）－Ｄ－ＧｌｃＮＡｃ］２／ＮｅｕＮＡｃ（ＷＧＡ）和α－Ｄ－Ｇａｌ（ＢＳＬ）等的糖复合物的改变有较为密切的关系。