流感病毒神经氨酸酶不同区域的作用

神经氨酸酶(NA)是流感病毒主要表面糖蛋白之一,属于Ⅱ型膜蛋白,其单体为蘑菇形状.由胞内域、极性跨膜区、柄部、头部4部分组成,在膜上以四聚体形式存在.神经氨酸酶在流感病毒中的功能是切去感染细胞和血凝素上的N-乙酰神经氨酸,以利于子代病毒离开感染细胞,继续感染新细胞.NA的不同区域在流感病毒生活周期中具有不同的作用.NA胞内域在流感病毒生活周期中具有控制病毒颗粒形状的作用;NA跨膜区在将NA转移至内质网中起信号作用和将NA固定在膜上的作用;NA柄部连接NA的头部与跨膜区,使NA 头部远离病毒膜,以利于NA与底物结合;NA头部包含有糖基化位点、NA酶活性中心和抗原位点.对这些不同区域功能研究的深入,将有利于对神经氨酸酶在流感病毒传播中的作用的了解,并对流感病毒的预防或治疗等具有实际意义.     

流感病毒神经氨酸酶抑制剂药物耐药现状及机制研究进展

流感病毒可引起急性呼吸道传染病,严重危害人们的身体健康。神经氨酸酶抑制剂(NAI)是以神经氨酸酶为靶点的药物,可以有效抑制甲型和乙型流感病毒复制,是目前流感预防和治疗的一线用药。然而由于NA或者HA的突变,导致病毒对该药耐药。不同亚型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的耐药情况也不同,不同的检测方法也对判断病毒是否耐药有影响。     

副粘病毒血凝素-神经氨酸酶蛋白结构与功能的研究进展

副粘病毒的血凝素-神经氨酸酶和融合蛋白具有重要的生物学活性,其中前者具有受体识别活性、神经氨酸酶活性和促进融合蛋白的细胞融合作用.本文对近年来血凝素-神经氨酸酶结构和功能方面的研究进展进行了综述.     

流感病毒神经氨酸酶的表达及其在药物筛选中的应用

A型流感病毒H5N1神经氨酸酶奥司他韦敏感型及耐药突变型基因经优化后,克隆于pcDNA4/TO 表达载体,并转染T-REx293 建立稳定细胞株,经四环素诱导能特异表达神经氨酸酶,其活性被特异性抑制剂奥司他韦所抑制。利用该稳定细胞株制备的神经氨酸酶,对3000多种天然产物和中药提取物进行了筛选,结果显示黄芩甙和黄芩素对奥司他韦敏感型神经氨酸酶和耐药型神经氨酸酶具有相似的抑制作用。该神经氨酸酶制备方法安全、简便、稳定,有利于建立神经氨酸酶抑制剂的高通量筛选方法。A型流感病毒H5N1神经氨酸酶奥司他韦敏感型及耐药突变型基因经优化后,克隆于pcDNA4/TO 表达载体,并转染T-REx293 建立稳定细胞株,经四环素诱导能特异表达神经氨酸酶,其活性被特异性抑制剂奥司他韦所抑制。利用该稳定细胞株制备的神经氨酸酶,对3000多种天然产物和中药提取物进行了筛选,结果显示黄芩甙和黄芩素对奥司他韦敏感型神经氨酸酶和耐药型神经氨酸酶具有相似的抑制作用。该神经氨酸酶制备方法安全、简便、稳定,有利于建立神经氨酸酶抑制剂的高通量筛选方法。     

流感病毒神经氨酸酶广谱抑制多肽的筛选研究

以纯化的流感病毒颗粒H1N1、H3N2为靶点对噬菌体展示的随机12肽库进行了筛选。经ELISA、神经氨酸酶抑制活性鉴定,获得52个阳性噬菌体克隆。根据测序和氨基酸序列分析,挑选出不同克隆间同源性最高的6条多肽进行化学合成。神经氨酸酶抑制活性实验显示,6条多肽中54-N1和69-N2的抑制活性最强,对N1、N2和乙型流感病毒三种流感病毒神经氨酸酶均有明显的抑制活性,54-N1的IC50值为7.486~14.693μmol/L,69-N2的IC50值为6.605~13.007μmol/L。同时,54-N1和69-N2可抑制流感病毒在MDCK细胞中的生长。病毒空斑抑制实验显示,54-N1和69-N2可明显抑制空斑形成的大小和数目。通过分析,54-N1的IC50值为18.38~31.76μmol/L,69-N2的IC50值为16.56~25.49μmol/L。两条多肽的浓度在高达10mmol/L时仍对细胞无任何毒性。54-N1和69-N2作为新的流感病毒神经氨酸酶抑制剂,与现有NA抑制剂Oseltamivir进行了比较和讨论,为进一步研制局部应用的广谱抗流感病毒的鼻腔喷雾剂奠定了基础。     

表达流感病毒神经氨酸酶基因的重组腺病毒的构建

通过RT-PCR方法扩增流感病毒神经氨酸酶基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pTrackCMV,此重组质粒与腺病毒DNA共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒。经PCR证实目的基因已整合至腺病毒基因组中,western blot检测到神经氨酸酶的表达。重组病毒经筋鼻和灌胃两种途径免疫小鼠,结果表明2次免疫后滴鼻组和灌胃组均产生明显的免疫应答反应,滴鼻组的免疫效果优于灌胃组。     

流感病毒神经氨酸酶抑制剂的筛选

以神经氨酸酶为药物靶点筛选神经氨酸酶抑制剂, 是研究和开发抗流感病毒药物的重要途径. 应用虚拟药物筛选方法, 从化合物数据库中选出部分待测化合物, 然后应用已建立的 神经氨酸酶抑制剂的高通量筛选模型, 检测了这些化合物的抑制活性, 从中发现了3个活性较高、结构新颖的化合物, 其IC50在0.1~3 μmol/L之间, 这些活性化合物的结构特点, 对于新型神经氨酸酶抑制剂的设计与开发, 将提供重要的信息指导. 流感病毒神经氨酸酶抑制剂的筛选结果表明, 虚拟筛选技术与高通量筛选技术的合理结合, 将有利于促进药物筛选与药物发现.     

甲型N9亚型流感病毒神经氨酸酶基因进化分析

通过对甲型N9亚型流感病毒神经氨酸酶(NA)核苷酸进化趋势的研究,进而探寻2013年新型H7N9亚型禽流感病毒产生的根源。本次研究选取美国国立生物技术信息中心(NCBI)的甲型N9亚型流感病毒的NA序列,采用生物软件ClustalX 2.0和MEGA 6.0建立进化树形图。对其欧亚分支,采用BEAST软件2.1.2和Datamonkey interface在线软件,计算和分析选择压力和进化速率。采用Bioedit软件对NA的氨基酸置换熵值计算并分析。系统进化树表明2013年新型H7N9亚型禽流感病毒可划分至现代欧亚分支之内,并且该分支的每位点每年核苷酸置换速率均值为3.8354×10-3,选择压力dN/dS均值为0.140413。16、19、40、53、81、84、112、256、335、359和401的氨基酸变异位点熵值0.5。研究分析表明2013年新型H7N9亚型禽流感病毒的NA片段基因可能来自甲型N9亚型流感病毒逐步进化的结果,最早可追溯到1996年的A/duck/Siberia/700/1996(H11N9)流感毒株,新型H7N9亚型禽流感病毒来源不是来自外界环境压力引起突变的结果。     

仙台病毒血凝素神经氨酸酶在哺乳动物细胞中的 …

仙台病毒的血凝素神经氨酸酶（ＨＮ）在ＣＯＳ－７细胞中得到了表达。将具有表达功能的质粒转入非洲绿猴肾细胞ＬＬＣＭＫ２中,在抗生素筛选压力下连续传代,获得了具有抗生素抗药性的细胞系,表明ＨＮ基因已整合到该细胞的染色体中。尽管核酸酶Ｓ１实验结果表明,这些抗药性细胞内有大量ＨＮ ｍＲＮＡ的转录,但非直接免疫荧光和放射性免疫沉淀的结果却显示,细胞表面和细胞内部的ＨＮ蛋白的表达量很低。而仙台病毒持续感染的ＬＬ     

Biological and Integrated Control of Botrytis Bunch Rot of Grape UsingTrichodermaspp.

Field trials were carried out in upstate New York in 1990, 1992, 1993, and 1994 and in Chile in 1992–1993 and 1993–1994 in order to evaluate the ability of various strains ofTrichodermaspp. to control bunch rot of grape, to assess the compatibility and possible additive effects of selected biocontrol fungi and dicarboximide fungicides, and to determine factors affecting biocontrol efficacy. In 1990, three strains ofTrichodermaspp. were evaluated for their biocontrol ability, and all provided significant control ofBotrytis cinerea.As few as two late applications of the biocontrol fungi were nearly as effective as up to five applications throughout bloom and fruit development. Trials in New York in 1992 and in Chile in 1992–1993 indicated thatTrichoderma harzianumcould replace some applications of iprodione or vinclozolin with little reduction in efficacy. In New York in 1993, we found that applications ofT. harzianumat bloom and early fruit development followed by a tank-mix application ofT. harzianumand half rates of iprodione gave extremely effective control of bunch rot. In 1994, less effective control was obtained than in earlier years. Addition of a nutritive adhesive (Pelgel, a mixture of carboxymethyl cellulose and gum arabic) applied with the biocontrol agent tended to improve results. Thus, biological control of bunch rot of grape withT. harzianumcan be an effective method of management of this disease.     

毛竹PeSCL3基因表达特征及其启动子活性研究

为探讨毛竹(Phyllostachys edulis)SCL3基因的表达特征及其启动子活性,采用同源克隆的方法从毛竹中分离到SCL3同源基因Pe SCL3的编码区(ORF)和上游启动子序列(Pe SCL3p)。序列分析表明,Pe SCL3的ORF为1335 bp,推测编码含444氨基酸的蛋白,该蛋白与水稻(Oryza sativa)的SCL3同源性高达93.9%。Pe SCL3p长度为1358 bp,含有脱落酸(ABA)应答元件ABRE、赤霉素(GA3)应答元件GARE-motif和P-box、干旱诱导MYB结合位点等多种作用元件。实时定量PCR分析结果表明,Pe SCL3在毛竹叶中的表达丰度最高,其次是茎和根,而鞘中的最低;Pe SCL3的表达受GA3的抑制,受ABA、Na Cl和干旱的诱导。转Pe SCL3p∷GUS拟南芥(Arabidposis thaliana)的GUS染色结果表明,根尖、顶端生长点和子叶叶柄均被染成蓝色,尤其根尖的染色最深。这表明Pe SCL3对毛竹的生长发育,尤其是根系,可能起着重要的调控作用。     

甘菊ClHSP70与ClHSP90基因的克隆及表达分析

该研究以甘菊(Chrysanthemum lavandulifolium)为实验材料,通过RT-PCR方法从甘菊转录组数据中分离出热激蛋白合成相关基因,命名为ClHSP70和ClHSP90。序列分析表明,ClHSP70基因ORF全长为2 559bp,编码852个氨基酸,蛋白功能区预测表明含有典型的HSP70蛋白NBD和SBD保守结构域;ClHSP90基因ORF全长为2 094bp,编码697个氨基酸,含有HATPase结构域和HSP90保守结构域。生物信息学分析表明,甘菊ClHSP70与大豆(Glycine max)和烟草(Nicotiana tomentosiformis)HSP70蛋白有较高的一致性,ClHSP90基因编码的氨基酸序列与紫茎泽兰(Ageratina adenophora)HSP90高度相似;实时荧光定量表达分析表明,在42℃处理不同时间,甘菊叶片中ClHSP70和ClHSP90基因表达均在0.5h时显著增加,1h达到最大值,2h后缓慢下降;不同组织表达分析表明,甘菊在42℃处理1h后,ClHSP70在成熟叶中的表达量显著高于嫩叶和根等其他组织;ClHSP90在成熟茎中的表达量最高。研究说明,ClHSP70和ClHSP90基因具有热激蛋白特征,参与了甘菊热胁迫应答过程,该研究结果为以后深入研究其基因功能奠定了基础。     

Degradation and Utilization of Xylans by the Rumen AnaerobePrevotella bryantii(formerlyP. ruminicolasubsp.brevis) B14

Freshly harvested whole cells from cultures ofP. bryantiiB₁4 grown with oat spelt xylan (OSX) as an energy source showed less than 25% of the enzyme activity against OSX, and less than 15% of the activity against birchwood xylan (BWX) and carboxymethylcellulose, that was detectable in sonicated cell preparations. This indicates that much of this hydrolytic activity is either periplasmic, membrane-associated or intracellular and may be concerned with the processing of transported oligosaccharides.P. bryantiiB₁4 cultures were able to utilise up to 45% and 51% of the total pentose present in OSX and BWX, respectively, after 24 h, but could utilize 84% of a water-soluble fraction of BWX. Analysis of the xylan left undegraded after incubation withP. bryantiishowed that while xylose and arabinose were removed to a similar extent, uronic acids were utilized to a greater extent than xylose. Predigestion of xylans with two cloned xylanases from the cellulolytic rumen anaerobeRuminococcus flavefaciensgave little increase in overall pentose utilization suggesting that externalP. bryantiixylanases are as effective as the clonedR. flavefaciensenzymes in releasing products that can be utilised byP. bryantiicells. The xylanase system ofP. bryantiiis able to efficiently utilise not only xylo-oligosaccharides but also larger water-soluble xylan fragments.     

昌邑海洋保护区柽柳灌丛枝干生物量估算方法

柽柳属植物(Tamarix spp.)是我国沙漠干旱地区和滨海盐渍化地区的重要树种,具有较高的生态价值。在滨海地区,柽柳是一种典型灌木,分枝多、可塑性高,以往对柽柳生物量模型的研究,多以直立枝基径和长度作为自变量,此方法虽有较高精度,但工作繁琐。因此,研究以昌邑海洋生态保护区的柽柳林为对象,分别以株高冠幅组合、冠幅为自变量,以一元线性、幂函数、二次多项式等形式建立柽柳枝干鲜重的回归方程,并进行验证比较,目的是建立准确高效且适合滨海地区的柽柳生物量估测方法。结果表明:(1)对滨海地区柽柳林,冠幅和株高是较好的测树因子,以此建立回归方程,简便易行、准确可靠,应用前景较好;(2)综合方程的准确性和稳定性,无论以冠幅株高组合,还是单以冠幅作为自变量,均确定幂函数形式的回归方程为最优,经验证与实测值的偏差分别为-2.22%和2.92%;(3)基于冠幅的方程虽预测精度稍差,但由于冠幅面积可从高分辨遥感影像上直接提取,因而有极好应用前景;(4)R2~是评价模型优劣的重要标准,但仅以此为标准并不严谨,还需结合其他验证方法;(5)测区柽柳的株高、冠幅、鲜重的均值分别为(215.2±41.4)cm,(2.49±2.21)m~2,(4.15±5.80)kg,建议通过人工管理的方式提高林分质量。     

Natural Enemies ofTrapaspp. in Northeast Asia and Europe

Trapa natansis an aquatic plant native to the Old World. In the late 1880s this plant was found to be naturalized in the eastern United States where it has become an important weed. To evaluate the potential of biological control to reduce this weed, surveys for natural enemies ofTrapaspp. were made in Northeast Asia and Europe. In addition, populations ofTrapa japonicain South Korea were monitored for one season to evaluate the occurrence and impact of insect natural enemies. Among the insects found, the leaf beetleGalerucella birmanicawas the most common and damaging species in Asia. It can cause complete defoliation of whole populations of plants. Nymphuline pyralid moths were also common and at times damaging. Both the beetle and the moths feed and develop on unrelated plants and so have no potential as biological control agents ofT. natansin North America. TwoNanophyesweevils were found in Asia which feed in petiole floats of the leaves. They are thought to be specific toTrapabut were not observed to be damaging. Low level populations of polyphagous Homoptera were common. Chironomid midges were also frequently associated with the plants, but for the most part were filter feeders, not herbivores. The greatest impact on the monitored plants in South Korea was by the leaf beetleG. birmanicawhich defoliated most of the plants, causing the mats of plants to sink. In Europe, a similar and related insect fauna was found, but none of the insects was very damaging to the plants. One Italian weevil,Bagous rufimanus,feeds within the fruit stems and might be more damaging at higher than observed population levels. Some diseases were seen on some plants in both regions. European populations ofT. natanshave declined significantly, stimulating conservation efforts. Literature records ofTrapainsects from warm areas are presented. These could be of interest ifT. natansspreads into warmer areas of North America.     

秦岭地区华北落叶松人工林地土壤养分和酶活性变化

以秦岭地区不同林龄(5年生、10年生、20年生、30年生和40年生)华北落叶松人工林为研究对象,采用野外调查采样和室内分析相结合的方法,研究了不同林龄华北落叶松人工林地土壤剖面p H值、有机质养分和酶活性的变化。结果表明:土壤p H值随着林龄有降低趋势,随着土层深度的增加有升高趋势。土壤有机质和土壤速效氮、速效磷和速效钾在近熟龄期显著高于幼龄期。土壤中的磷酸酶、脲酶、蔗糖酶和过氧化氢酶活性随着林龄都呈"高—低—高"的趋势,幼龄期的土壤蔗糖酶活性显著高于近熟龄的,而磷酸酶、脲酶和过氧化氢酶活性是近熟龄期的显著高于中幼龄。土壤速效养分和酶活性都随着土层深度的增加有显著的降低。相关分析表明磷酸酶活性与有机质、速效氮、速效磷、速效钾和脲酶活性呈极显著的正相关性(P0.01),脲酶与有机质、速效氮和速效钾呈极显著正相关。蔗糖酶与过氧化氢酶活性显著负相关(P0.05),与p H值有一定的正相关性。秦岭地区华北落叶松人工林进入近熟林之后土壤肥力有一定的恢复,而在中幼龄阶段土壤养分比较缺乏,尤其是氮磷。     

Genome Analysis inNeurospora crassa;Cloning of Four Lociarginine-1(arg-1),methionine-6(met-6),unknown-7(un-7), andribosome production-1(rip-1) and Associated Chromosome Walking

We have cloned fourNeurospora crassagenes by complementation analysis. Cloned genes include thearginine-1(arg-1),methionine-6(met-6),unknown-7(un-7), andribosome production-1(rip-1) loci. Chromosome walks were initiated in ordered cosmid libraries from the cloned loci. A total of about 700 kb of theNeurosporagenome is covered in these walks.     

综述与专论：生物钟Bmal1基因与慢性代谢性疾病及其运动干预研究进展

脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1基因（brain and muscle arnt-like 1,Bmal1）是生物钟的核心基因,在机体生命活动中发挥重要调控作用。生物钟的紊乱通常伴随Bmal1的异常表达,进而诱发一系列慢性代谢性疾病。运动可上调Bmal1表达,减缓慢性代谢性疾病的发病进程。本文主要对生物钟Bmal1在慢性代谢性疾病中的作用及其运动干预研究进展进行综述,提出Bmal1在运动改善慢性代谢性疾病中的可能作用机制,以期为运动通过生物钟基因防治慢性代谢性疾病提供新视角。     

赤桉ACT1和ACT2基因的克隆与生物信息学分析

为了解赤桉(Eucalyptus camaldulensis)肌动蛋白(Actin)在生长发育过程中的功能,根据赤桉幼苗转录组数据库中的肌动蛋白基因序列,从赤桉嫩叶中克隆了2条Actin基因片段,并利用RACE技术获得Actin基因的全长cDNA,分别命名为ECACT1和EC-ACT2基因。生物信息学分析表明,这两条基因的全长cDNA分别为1533 bp和1387 bp,均含有1个编码377个氨基酸的开放阅读框。经比对分析,赤桉Actin蛋白的氨基酸序列与其他植物Actin蛋白的具有较高的相似性,并且具有Actin蛋白特有的保守序列和相关特征。因此推测这两条基因对桉树的生长发育具有一定的调控作用。