今夏进行重组鸡白血疫苗的野外试验

北里研究所、日生研公司宣布从5月底到6月进行两单位分别开发的基因重组鸡白细胞增多病疫苗的野外试验。 野外试验在地方自治体的畜产试验场进行,给(全体)2000多只鸡接种疫苗。北里研究所开发的疫苗“24HD”由北里研究所在茨城、静冈,崎玉进行实验,日本药局在广岛进行实验。日生研开发的疫苗“R7”由日生研,基因公司、微生物化学研究所分别在兵库、岐阜、奈良进行。化学及血清疗法研究所在熊本进行24HD和R7的试验。     

学术界强烈要求管理上的平衡

美国科学院理事会说,对计划用于环境和农业的所有遗传工程生物体,仅仅因为是由重组 DNA 产生的,因而被严格控制,是不合理的。理事会建议:对遗传修饰的生物体的管理应着重于生物体的性质及其释放的环境。由特设研究委员会准备的一份经理事会签署的白皮书说:“无论是重组 DNA 技术的应用,还是基因在没有亲缘关系的生物体之间的移动,没有证据可以说明它们有特殊的危害。”美国科学院理事会说,对计划大规模释放到环境中用于农业的遗传修饰的生物体需要     

日本血吸虫三价DNA疫苗pVIVO2 SjFABP/Sj26.SjGAPDH的构建及其免疫保护作用评价

目的:构建含有日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白(SjFABP),3-磷酸甘油醛脱氢酶(SjGAPDH),26kDa谷胱甘肽S转移酶(Sj26)的三价DNA疫苗,并通过药理实验评价其抗血吸虫感染的免疫保护作用。 方法:  以血吸虫成虫RNA为模板制备cDNA第一链,RT-PCR扩增得到抗原基因片段,再通过重组PCR技术,将Sj26和SjGAPDH融合为Sj26.SjGAPDH基因。将SjFABP和Sj26.SjGAPDH分别克隆入pVIVO2的mcs1和mcs2,获得重组质粒pVIVO2-SjFABP/Sj26.SjGAPDH。瞬时转染MCF-7细胞,通过逆转录PCR（RT-PCR）检测抗原基因在mRNA水平的表达,通过间接荧光免疫（IIF）检测抗原基因在小鼠体内抗原水平表达,验证了DNA疫苗的有效性;并免疫小鼠后进行免疫保护性初步试验。结果:  经过酶切、测序及体内外表达验证,该三价DNA疫苗pVIVO2-SjFABP/Sj26.SjGAPDH构建成功;该三价DNA疫苗在小鼠抗血吸虫感染中诱发减虫率和减卵率达到58.6%和59.8%。结论:  该三价DNA疫苗组具有比单价和双价DNA疫苗组更加良好的免疫保护作用,为日本血吸虫DNA疫苗的研制奠定了基础。     

日本通产省第一次审议了重组DNA技术工业化方针

据推测通产省6月公告的“重组 DNA 技术工业化指导方针”首先适用于制造限制酶、修饰酶、质体 DNA 等研究用试剂的制造厂。宝酒造,东洋纺、等试剂制造厂在8月中提出工业化方针的确认申请文件,通产省准备在9月召开的委员会上研讨。原预定8月中旬召开的委员会,因夏季停业等原因推迟到9月。申请的重组 DNA32业化方法大部分符合自体克隆。以往自体克隆不适合基因重组指导方针。因为首次适应通产省的工业化指导方针,所以这次作为第一次申请提出。在这次申请的试剂中,非基因重组制品有限制酶 PstI 和大肠菌与枯草菌的穿梭载体 pHB14两种。宝酒造     

重组鸡白细胞增多病疫苗获得认可

北里研究所宣布于94年5～6月进行基因重组鸡白细胞增多(leukocyto-zone)疫苗的野外试验。11月22日北里研究所为了作为治疗药制造基因重组鸡白细胞增多病疫苗,得到认可(适应指导方针)。 日本的鸡白细胞增多病是住血孢子虫类(目)Haemosporidia的Leucocytozoidae科的原虫Leucocytozooncaulleryi感染而致。针对原虫的基因重组动物用疫苗确认适合指导方针还是首次。     

日本试验猪伪狂犬病疫苗

日本疫苗公司等3家公司进行野外试验的猪伪狂犬病疫苗是1990年底农林水产省批准引进的,由共立商事申请制造.经中央药事审议会动物用生物学制剂调查会审议后,有可能在今夏批准使用.日本疫苗公司和??(国际兽药公司)产品是利用基因重组方法使病毒基因部分缺失.如得到批准,这将是日本第一个实用化的重组动物活疫苗. 猪伪狂犬病是由于疱疹病毒引起的急性传染病.对仔猪的危害甚大,有时会致死,成猪     

NRC告诉管理部门:重组DNA是安全的

美国国家研究委员会(NRC)提交一份题为《遗传工程生物体的野外试验:决策纲领》的报告,以作为联邦官员的工作指南。该报告作出如下结论:经重组DNA改造的生物体除了效率更高之外,与经典育种方法大同小异,并且遗传工程本身并不能对环境构成危胁。这份报告为野外试验申请的审批工作提供了理论指导。报告宣称,目前审查重组植物     

美国人计划给人进行基因治疗

一个科学家小组上周请求美国主管遗传工程安全事务的监护人允许将一个合成基因导入人体。它的发起人说:给政府检查人员介绍的第一次人体试验是一次“演习”。这程序将不治疗疾病,但是,它将试验把外源基因插入人体的方法。它也将有助于逐渐地缓和将有争论的技术应用到实际的争议。主要的实验发起人——W·French Anderson 和必须审查该提案的国家卫生研究院正尝试期待非议。上周,Anderson 将十公斤左右的文件呈递给 NIH 的重组 DNA 咨询委员会时     

国外科技简讯

“废弃”DNA 可能具有重要功能 据美国Biotech Reporter1994年8月报道:美国衣阿华州立大学的分子生物学家施纳贝尔及其同事,现正在定位玉米DNA中频繁地进行重组的区域或热点。他们不仅研究染色体中基因的构建和行为,而且也研究处于基因与基因之间的DNA。施纳贝尔说:“在植物中,基因与基因之间存在着大量的DNA,有人把这些DNA称之为废弃DNA。鉴于在进化的历史长河中,这些DNA并未被自然选择所淘汰,因此我们认为,它们可能具有重要的功能。”     

结核杆菌抗原85A与小鼠白细胞介素21共表达DNA疫苗的构建及其免疫效应研究

目的:利用真核表达质粒pRSC,构建结核杆菌抗原85A(Ag85A)与小鼠白细胞介素21(mIL21)共表达重组体pRSC-mIL21-Ag85A,为研究新型结核杆菌DNA疫苗提供新的策略。方法:从质粒pcDNA3.1-mIL21中经PCR扩增出mIL21基因,并插入质粒pRSC中构成pRSC-mIL21;再从pIRES-Ag85A质粒中经PCR扩增出Ag85A基因,构建于pRSC-mIL21重组质粒上,成为共表达DNA疫苗pRSC-mIL21-Ag85A。结果:经酶切、基因测序证实,该疫苗构建正确并能成功表达目的基因。共表达DNA疫苗免疫小鼠后,CTL活性、特异性淋巴细胞增殖水平及小鼠血清特异性抗体均呈有意义的提高。结论:结核杆菌Ag85A与mIL21共表达DNA疫苗能诱导小鼠免疫反应,为进一步研究DNA疫苗抗结核杆菌攻击的免疫防护效应奠定了基础。     

Calgene公司就卡那霉素抗性基因提出质问

美国Calgene公司向美国食品与药物管理局(FDA)申请评价加入食品的卡那霉素抗性基因(Kan)的安全性.这是在食品上应用基因重组技术得到批准的第一步.公司发言人Daniel Wagster说:“公司要求FDA对这种标记基因提出见解.”这项申请涉及培育重组番茄、油菜、棉花使用的7种基因对棉籽油或动物饲料的安全性问题. Wagster说:“Kan基因是培育重组植物的重要标记基因.将来会进入更多的重组食物     

重组石竹的商品化

三得利公司向重组石竹的商品化迈出了一大步。在11月17日召开的科学技术会议生命科学部会重组DNA技术分会批准了三得利公司申请的货架期长的重组石竹的非封闭式温室实验。 这种重组石竹是在海外具有野外试验成绩的所谓的引进重组植物。是澳大利亚Florigene公司(旧公司名称:Calgene Pacific公司)开发的。用trans witch技术(Co-suppression技术)导入有义基因抑制乙烯合成关键酶1-已环丙烷-1-香芹酮酸合成酶(ACC合成酶)的表达。因此,比普通的石竹货架期长,不易折断。估计在澳大利亚大致完成了野外试验,最近商品化。     

人乳头瘤病毒(HPV)58型DNA疫苗免疫原性的初步分析

为了检测HPV 58型不同L1基因的DNA疫苗的免疫原性,以pcDNA3.1为载体分别构建含HFV 58型不同L1基因的DNA疫苗,命名为L1h、L1h△c、L1S、L1SM和L1wt.用免疫印迹法检测各DNA疫苗的体外表达情况;各重组质粒与pcDNA3.1-h58L2和pcDNA3.1-GFP共转染293FT细胞,检测其形成假病毒的能力;并将各DNA疫苗肌肉注射免疫小鼠,利用假病毒中和实验检测中和抗体水平,用ELISPOT检测细胞免疫情况.结果显示,本实验成功构建了五种DNA疫苗,L1h△c的体外表达量最高,L1S和L1SM的表达量次之,L1wt没有表达;重组质粒L1S能够形成假病毒,而其他四种重组质粒均不能形成假病毒.L1S和L1h均可在小鼠体内诱导中和抗体,但L1S诱导的中和抗体的平均滴度为1:6 400,明显高于L1h诱导的中和抗体水平(平均滴度为1:48),而其他疫苗在小鼠体内未产生中和抗体.对五种疫苗均未检测出特异性的细胞免疫反应.结果提示,体外能够组装成假病毒的DNA疫苗在免疫动物后可诱导高滴度的中和抗体,为今后DNA疫苗的筛选提供参考.     

重组玉米获准田间试验

美国BioTechnica公司由美国农业部获准基因重组玉米的田间试验.试验已在美国衣阿华州Lisbon近郊开始.玉米是被认为是难以进行基因重组的植物,该公司没有发表重组玉米的培育方法.这次进行试验的玉米是只导入标记基因的,目的是获得其在野外生长方面的数据和为今后试验有关的环境数据.研究者正在试验将高产赖氨酸的基因导入玉     

进行重组牛疫活疫苗的野外试验

日本生物科学研究所主任研究员山内一也等和英国 AFRC Institute for Animal Health 小组在室内确认了使用两公司共同开发的牛痘病毒的基因重组牛疫活疫苗的有效性和安全性。预计1～2年以内开始野外试验。由于该小组同印度兽医研究所共同研究这种疫苗,野外试验很可能在印度进行。目前,印     

汉坦病毒疫苗研制进展

本文从脑组织灭活疫苗、培养细胞单双价灭活疫苗、基因重组疫苗、DNA疫苗、减毒活疫苗、佐剂、灭活方法、免疫策略等方面概述了汉坦病毒疫苗研制近况.     

共表达PRRSV GP5蛋白和CSFV E2蛋白的“自杀性”DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答

为了获得新型双价"自杀性"DNA疫苗,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratorysyndrome virus,PRRSV)GP5基因克隆于此前构建的表达猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因的甲病毒复制子载体疫苗pSFV1CS-E2中.为了增强免疫效果,在密码子优化的GP5基因中插入了泛DR表位(PADRE),在CSFV E2基因后融合伪狂犬病病毒(PrV)UL49基因,获得了6种重组质粒.间接免疫荧光试验显示,PRRSV GP5和CSFV E2基因在瞬时转染的293T细胞中得到同时表达,将6种重组质粒和空载体pSFV1CS分别免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA方法检测血清抗体水平,通过基于CSFE/WST-8的淋巴细胞增殖试验和细胞因子ELISA评价疫苗诱导的细胞免疫.结果显示,除pSFV1CS组外,从各疫苗组小鼠血清中均可检测到低水平的针对GP5和E2蛋白的抗体;各疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后均能诱导特异性的淋巴细胞增殖:部分疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后可分泌较高水平的IFN-γ和IL-4;引入UL49的疫苗组细胞免疫应答显著高于其它疫苗组.结果表明,这些共表达GP5和E2蛋白的自杀性DNA疫苗可以诱导体液免疫和细胞免疫,PrV UL49可以增强其细胞免疫应答.     

稳定携带山羊痘病毒DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建

为构建质粒稳定型山羊痘DNA疫苗,采用PCR与限制性酶切技术去除真核表达质粒pcDNA3.1(+)的氨苄抗性bla基因启动子序列,构建改良质粒pmcDNA3.1(+),然后插入山羊痘病毒P32基因,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-P32,通过TSS法将其转化至减毒沙门氏菌中,构建成功携带山羊痘DNA疫苗的重组减毒沙门氏菌SL7207(pmcDNA3.1-P32);体内和体外试验结果表明,重组质粒pmcDNA3.1-P32在沙门氏菌中的稳定性显著高于pcDNA3.1-P32。这为下一步减毒沙门氏菌介导的山羊痘DNA免疫研究奠定了基础。     

美开发利用重组细菌的作物疫苗并计划进行用于水稻的野外试验

美国作物遗传国际公司向美国农业部和美国环境保护署(EPA)两机关提出申请,要求批准该公司开发的作物用疫苗“Incide”用于水稻的野外试验。1988年公司已对玉米进行了Incide的野外试验,决定今年还要在内布拉斯加州、伊利诺斯州、明尼苏达州进行玉米的试验。“Incide”是CGI公司与USDA的研究者共同开发的一种微生物农药。CGI公司把已用作微生物农药的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的BT毒素基因导入寄生在水稻的细菌Clavibacter xylicylnodontis。CGI公司把这种重组微生物利用高压封入玉米和水稻的种子内。随着作物生长,这种菌在导管等植物组织内增殖。估计导入了Incide的水稻     

尼帕病毒融合蛋白和受体结合蛋白基因DNA免疫的研究

构建了表达哺乳动物密码子优化的NiV囊膜蛋白F和G基因的真核表达质粒pCAGG-NiV-F和pCAGG-NiV-G.细胞融合试验表明,重组NiV融合蛋白F和受体结合蛋白G在pCAGG-NiV-F、pCAGG-NiV-G共转染BHK细胞中获得表达,并具有良好生物学活性.真核表达质粒pCAGG-NiV-F、pCAGG-NiV-G和pCAGG-NiV-F pCAGG-NiV-G DNA分别按100μg/只的剂量肌肉注射免疫6周龄BALB/c小鼠,间隔4周加强免疫,第二次加强免疫3周后采血,分离血清备用.分别以重组杆状病毒感染Sf9细胞表达的重组NiV融合蛋白(rNF)和受体结合蛋白(rNG)为包被抗原,应用间接ELISA检测上述质粒DNA免疫血清中的特异性抗体,具有较高的敏感性和特异性.另外,中和试验结果表明,DNA免疫小鼠产生的特异抗体可有效中和NiV囊膜蛋白F和G介导的伪型VSV重组病毒侵入NiV易感宿主细胞的感染性,并且受体结合蛋白G基因DNA诱导中和抗体的滴度高于融合蛋白F基因DNA.结果表明,DNA疫苗具有防制尼帕病毒性脑炎的潜力.