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双杂交系统:新兴的检测蛋白———蛋白交互作用的有力工具 总被引:2,自引:0,他引:2
蛋白--蛋白交互作用(protein-protein interaction)是生命辞去持续的最基本的根据,细胞内的信号传导也是研究细胞的发育、分化及疾病的生理反应所要了解地最终目标。国际上出现一种直接于细胞内检测蛋白--蛋白交互作用且灵敏高很高的遗传学新方法,酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system),可迅速鉴别新的信息传递蛋白。本文综述了双杂交系统的原理、发展概况、应用范 相似文献
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氧还蛋白Ref-1是一种双功能蛋白质,在细胞氧还调控和DNA无嘌呤/无嘧啶损伤修复中起重要作用。发寻找与它相互作用的蛋白Rips(Rer-1 interacting proterns),用Ref-1氧还功能域进行了酵母双杂交库的筛选,得到了5种阳性克隆。其中Rip3经测序证实为泛蛋白连接酶Ubc9。Hela细胞中共过表达Ubc9可以明显抑制Ref-1对AP-1报告系统的增强作用。Western印迹 相似文献
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酵母PHO85结合蛋白PAP1基因的克隆和表达 总被引:3,自引:3,他引:0
酵母调探因了PHO85是一个依赖于细胞周期蛋白(cyclin)的蛋白酶(CDK),参与对细胞周期和酸性磷酸酯酶基因表达的调控。冯PHO85为靶分子,利用酵母的染色体基因文库中克隆到了一个新的与PHO85相结合的蛋白因子的基因,利用酵母双杂交(two-hybrid)系统从酵母的染色体基因文加中克隆到了一个新的与PHO85相结合的蛋白因子的基因,将此蛋白质命名为PAP1(PHO85associated 相似文献
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蛋白-蛋白的结合是病毒与宿主细胞相互作用的分析基础。随着酵母双杂交系统等研究蛋白-蛋白结合新技术的广泛应用,人们对病毒复制的本质及致病机制有了更新的认识,本文综述了丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白C及非结构蛋白5A(NS5A)与宿主蛋白相互作用的进展,并讨论了它们在HCV致病中的作用。 相似文献
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铁效应元件结合蛋白2的特性李昕权,郑敏(华西医科大学附属二院血液研究室,成都610041)关键词铁效应元件结合蛋白2铁效应元件结合蛋白(ironresponsiveelementbindingprotein,IRE-BP)在细胞内铁代谢平衡的转录后调... 相似文献
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KyoT是一种LIM结构域蛋白,是以RBP-J为诱饵蛋白通过酵母双杂交系统得到的新分子,KyoT2可以抑制RBP-J介导的转录,以KyoT2为诱饵蛋白,通过酵母双杂交筛选得到了人类紧密连接蛋白2(ZO-2),的一种新的剪接体ZO-2-i3,序列分析表明,新的剪接体有19个外显子,与已发表序列比较,见ZO-2-i3分子的激酶后区发生了改变,为排除酵母双杂交实验的假阳性,实验首先在酵母中验证KyoT2与ZO-2-i3的体外直接相互作用并得到阳性结果,进而在大肠杆菌中原核表达纯化带有His标签的KyoT2蛋白,使用抗His标签的抗体,通过GST pull-down assay验证KyoT2与ZO-2-i3的体外直接相互作用,也获得阳性结果,并通过酵母实验初步确定了其作用位点,即KyoT2通过LIM2结构域与ZO-2-i3相互作用,本实验验证了KyoT2与Z-2-i3的相互作用,并初步确定其相互作用位点,对探讨KyoT的功能具有重要意义。 相似文献
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植物LEA蛋白的结构与功能 总被引:2,自引:0,他引:2
植物LEA蛋白的结构与功能汤学军,傅家瑞(中山大学生命科学学院,广州510275)关键词LEA蛋白,结构,功能种子发育是高等植物生活史中的重要阶段。在种子(胚胎)发育后期会产生一些小分子特异多肽,即LEA蛋白(late-embryogenesis-a... 相似文献
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作为第二信使的三磷酸肌醇(inositol-1,4,5-trisphosphate,InsP3)主要经2种途径形成:G蛋白偶联受体和酪氨酸激酶偶联受体。两类受体激活各自相应的磷脂酶C(phospholipaseC,PLC)而水解磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate,PtdIns4.5P2)形成InsP3和二酯酰甘油(diacylglycerol,DG)。InsP3形成后动员储存钙和促进外源性钙内流。近年来的研究证实,Gq是调节PLC-β1活性的特导性G蛋白,Gq系列α亚单位包括Gαq、Gα11、Gα14、Gα15和Gα16。高血压的重要病理基础是动脉血管壁的痉挛和增殖,许多血管活性物质可以促使血管平滑肌细胞的收缩和增生,同时伴有细胞内InsP3产生增加.但高血压并不能造成Gq量的持续改变。 相似文献
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核糖体灭活蛋白及相关毒素的生物学活性研究进展 总被引:3,自引:0,他引:3
核糖体灭活蛋白及相关毒素的生物学活性研究进展奚正德综述马宝骊审阅(上海第二医科大学免疫学教研室,上海市免疫学研究所基础免疫一室200025)核糖体灭活蛋白(ribosome-inactivatingproteins,RIPs)是一类能抑制蛋白质生物合... 相似文献
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胆固醇流出调节蛋白与胆固醇逆向转运 总被引:3,自引:0,他引:3
高密度脂蛋白(HDL)能从外周细胞摄取我余胆固醇并运输至肝脏排出,防止其在血管壁沉积。外周细胞内胆固醇流向HDL的机制一直是人们积极探索但尚未弄清的问题。新近发表在《Nature Genetics》上的三篇论文在这个环节上取得了重大突破,他们通过对Tangier病的研究,发现由ATP-binding-cassette transporter 1基因编码的胆固醇流出调节蛋白(cholesterol- 相似文献
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在白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)的信号转导过程中,酪氨酸激酶Jak3起着至关重要的作用。它不但参与Jak-Stat通路的传递,而且通过与一些未知的信号分子相互作用调节一些原癌基因的表达,如c-fos,c-myc等。由于目前越来越多的证据表明在信号转导过程中两个蛋白质之间的相互作用需要磷酸酪氨酸的存在,为此构建了酪氨酸磷酸化相关原酵母双杂交系统,以进一步阐释Jak3在IL-2 相似文献
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三种蜘蛛丝蛋白组成分析 总被引:2,自引:0,他引:2
本文应用高压液相色谱(HPLC)法分析了岳麓山的大腹园蛛Araneus ventricosus(C.Koch,1878),机敏漏头蛛Agelena difficlis (Fox,1937),白额巨蟹蛛Heteropoda venatoria (Linnaeus,1757)的丝蛋白的氨基酸组成,以SDS-PAGE法测定了大腹园蛛不同丝腺体的未成丝的可溶性丝蛋白的分子量。实验结果表明蛛丝蛋白中占优势的 相似文献
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本文报道PHO2蛋白能被一种未知的蛋白激酶磷酸化PHO2蛋白的第230-233位氨基酸残基组成一个可能被p34相关的蛋白激酶识别的一致序列(SPIK),用点突变的方法将Ser-230变成Ala可导致PHO2蛋白激活PHO5表达能力的完全丧失。进一步的研究显示,将Pro-231突变成Ser同样可导致PHO2的矢活,而Ser-230突变成Asp则不影响PHO2的活力。由于PHO2(Asp-230)突变体通过在第230位残基引入了一个负电荷,可以看成Ser-230被磷酸化的状态,由此推测PHO2蛋白可能需要在Ser-230被磷酸化后才会具有激活PHO5基因转录的能力。体外磷酸化分析的结果表明,大肠杆菌表达的GSTI-PHO2(野生型)融合蛋白能够被酵母YPH499总蛋白抽提物磷酸化,如果以SPIK(230-233)一致序列被破坏的GST-PHO2(Pro-231→Ser)突变体作为底物,则观察不到该融合蛋白被酸磷化标记。结果表明PHO2在细胞内是一种磷骏化蛋白,第230位Ser的磷酸化是该转录因子较制PHO5基因表达的活性所必需。 相似文献
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溶菌酶通过降解细菌细胞壁的肽聚糖裂解细菌,利用此特性,构建温度敏感的内源裂解系统,达到高效释放和回收重组蛋白的目的。构建了温度敏感的T4溶菌酶基因表达质粒pSC-lys(pSC101复制子)和p15A-lys(p15A复制子),质粒与工程菌构成了新型内源裂解系统,系统可以与高拷贝复制子(如pMB1,ColE1)的重组蛋白表达擀粒兼容。结果表明,裂解系统的量适裂解条件由三个要素构成:pSC-lys- 相似文献
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部分裸子植物叶片总蛋白分析 总被引:1,自引:0,他引:1
采用SDS- PAGE 技术, 分析了红豆杉科(Taxaceae) 植物南方红豆杉( Taxus chinensisvar- mairei (Lemee et Levl-) Cheng et L-K-Fu) 、穗花杉( Amentotaxus argotaenia (Hance) Pil ger) 、云南穗花杉( A- yunnanensis Li) 、白豆杉( Pseudotaxuschienii(Cheng) Cheng) 以及三尖杉科(Cephalotaxaceae) 、植物三尖杉( Cephalotaxus fortunei Hook-f-) 、粗榧( C-sinensis (Rehd-etWils-) Li) 、海南粗榧( C-hainanensis Li) 、篦子三尖杉( C-oliveri Mast-) 和罗汉松科(Podocarpaceae) 、植 物罗汉松 ( Podocarpus macrophyllus ( Thunb- ) D-Don) 、鸡毛 松( P-imbricatus Bl-) 、竹柏( P- nagi(Thunb-) Zoll) 、陆均松( Dacrydium pierrei Hickel) 共12 种植物的叶片蛋白, 在蛋白质水平上采用 相似文献