铜锌超氧物歧化酶对几种羟自由基产生系统的影响

应用脱氧核糖降解法研究了ＣｕＺｎ－ＳＯＤ对几种·ＯＨ产生系统的作用机理．结果证明：ＳＯＤ对Ｆｅ（３＋）·Ｏ·Ｈ２Ｏ２系统中·ＯＨ的产生有明显的抑制作用,而失活ＳＯＤ或ＢＳＡ对它的抑制作用不大;在Ｆｅ（２＋）·Ｈ２Ｏ２和ＣＵ（２＋）·Ｈ２Ｏ２系统中,ＳＯＤ、失活ＳＯＤ和ＢＡＳ均能抑制·ＯＨ的产生;在Ｆｅ（２＋）·Ｏ系统中,ＳＯＤ对·ＯＨ产生作用不大,而失活ＳＯＤ或ＢＳＡ对它有明显的抑制作用．由此推测ＳＯＤ对·ＯＨ形成可能有三方面的影响：１．对Ｏ的清除作用,阻断Ｈａｂｅｒ－Ｗｅｉｓｓ反应;２．对金属离子的络合作用,降低·ＯＨ的产额;３．促进Ｈ２Ｏ２的积累,加快Ｆｅｎｔｏｎ反应．     

.OH在博莱霉素A5介导的DNA断链反应中的作用

利用ＥＳＲ技术研究了博莱霉素Ａ５（ＢＬＭＡ５）、Ｆｅ＾２＋,Ｏ２体系中．ＯＨ的产生。并用ＴＢＡ反应检测了该系对ＤＮＡ的断链作用。以Ｆｅ＾３＋,Ｃｕ＾＋或Ｃｕ＾２＋替换Ｆｅ＾２＋,则体系中无．ＯＨ产生,同时也失去对ＤＮＡ的断链作用;一定浓匠．ＯＨ清除剂可完全清除．ＯＨ,地对ＤＮＡ断链影响甚微;还原剂可淬灭体系中的．ＯＨ,却能促进ＤＮＡ的断链反应;ＳＯＤ可清除体系中的．ＯＨ,失活的ＳＯＤ夫此功能,但两     

氧化修饰使HDL促动脉平滑肌细胞胆固醇流出减少

为了研究氧化修饰对高密度脂蛋白（ＨＤＬ）转运细胞胆固醇地＾３Ｈ－胆固醇负荷的培养人动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）分别与天然ＨＤＬ及Ｃｕ＾２＋ａｋｇ ＨＯＣｌ氧化修饰的ＨＤＬ在３７℃温育不同时间后,分别测定细胞＾３Ｈ－胆固醇清除率。结果发现,温育２４ｈ后,经Ｃｕ＾２＋或ＨＯＬｌ氧修饰后的ＨＤＬ其细胞胆因醇清除率分别较天然ＨＤＬ下降了３０．０％和４３．１％（ｐ〈０．０１）。结果还发现,Ｃｕ＾２＋或ＨＯＣｌ氧     

根霉超氧化物歧化酶同工酶类型的鉴别

利用ＫＣＮ、Ｈ２Ｏ２睡ＳＤＳ的选择性反应引起的ＳＯＤ同工酶谱带变化即可鉴别精 抽提液中的ＳＯＤ同工酶类型,用这种方法对五株不同种根霉的鉴别实验表明,它们均不同程度地含有Ｃｕ,Ｚｎ型和Ｍｎ型两各ＳＯＤ,前者约点８０％左右,后者只占２０％左右,用邻苯三酚自氧化法对样品中ＳＯＤ活性测定结果与在同工酶谱上的鉴别结果基本一致。     

近江牡蛎铜锌超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

经６５℃加热,硫酸铵分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和ＤＥ－５２柱层析,从近江牡蛎（ＯｓｔｒｅａｒｉｖｕｌａｒｉｓＧｏｕｌｄ）软体部分提纯了铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ）．对其理化性质鉴定表明,用此法纯化的酶纯度均一．该酶系由两个相同亚基组成的二聚体,分子量２７．９ｋＤ．该酶的紫外吸收峰在２７２．５ｎｍ,红外光谱表现出其氨基酸组成特征,与猪血ＳＯＤ存在差异．该酶在不同的升温速率下及经不同浓度的Ｈ２Ｏ２处理后的稳定性与猪血ＳＯＤ不同．其氨基酸组成与不同来源的同类酶存在差异．     

金属硫蛋白清除自由基及其对自由基引起的核酸损伤保护作用的研究

通过化学反应体系产生ＯＨ＾－和Ｏ＾－２自由基,采用荧光和化学发光检测体系,比较研究了不同亚型及不同结合金属的金属硫蛋白（ＭＴ）清除自由基能力的大小。结果表明,对于同一亚型,Ｚｎ结合ＭＴ清除自由基的能力大于Ｃｄ结合ＭＴ;同一结合金属的ＭＴ,ＭＴ１清除自由基的能力大于ＭＴ２。通过比较ＺｎＭＴ１与谷胱甘肽（ＧＳＨ）及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）清除自由基的能力大小发现,ＺｎＭＴ１清除ＯＨ的能力是ＧＳＨ的１０     

贻贝（Perna viridis）超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

采用５５－６０℃热处理,硫酸铵分级深沉和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱层析将贻贝Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ纯化到均一程度。每１００ｇ鲜贻贝肉可得到ＳＯＤ制品,总活力３６８９ｕ,比活力７８２ｕ／ｍｇ,回收率为２１％。测得该酶分子量为３２ｋＤ,亚基分子量约为１６．４ｋＤ,最大紫外吸收波长为２６８ｎｍ,,贻贝Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ具有一定的耐热性,较强的抗酸、抗碱及抗脲性。     

根霉超氧化物歧化酶同工酶类型的鉴别

利用ＫＣＮ、Ｈ_２Ｏ２和ＳＤＳ的选择性反应引起的ＳＯＤ同工酶谱带变化即可鉴别粗抽提液中的ＳＯＤ同工酶类型;用这种方法对五株不同种根霉的鉴别实验表明,它们均不同程度地含有Ｃｕ,Ｚｎ型和Ｍｎ型两种ＳＯＤ,前者约占８０％左右,后者只占２０％左右。用邻苯三酚自氧化法对样品中ＳＯＤ活性测定结果与在同工酶谱上的鉴别结果基本一致。     

氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞细胞周期蛋白D_1基因表达的影响

动脉平滑肌细胞（ｓｍ ｏｏｔｈ ｍ ｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ,ＳＭＣ）是动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＡＳ）斑块中的主要细胞,它的增殖在ＡＳ形成过程中极其重要．利用体外培养的人主动脉ＳＭＣ,观察了天然高密度脂蛋白（ｎａｔｉｖｅ ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ,Ｎ－ＨＤＬ）及氧化修饰ＨＤＬ（ｏｘｉｄｉｚｅｄ ＨＤＬ,ＯＸ－ＨＤＬ）对培养人主动脉ＳＭＣ ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１（细胞周期蛋白Ｄ１）基因转录表达的影响．结果表明：（１）Ｎ－ＨＤＬ对ＳＭＣｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因表达无影响（Ｐ＞ ０．０５）;（２）ＯＸ－ＨＤＬ使ＳＭＣｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因表达显著增强（Ｐ＜０．０１）,其表达量随时间（２、１２、２４ ｈ）延长而增加．上述结果表明,ＯＸ－ＨＤＬ的致ＡＳ作用可能与其刺激ＳＭＣｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因表达增加有关．     

渗透胁迫下水稻幼苗中叶绿素降解的活性氧损伤作用

水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）幼苗在渗透胁迫下,随着胁迫强度的增加及时间的延长,Ｃｈｌ降解加剧,活性氧Ｏ－·２ 、Ｈ２Ｏ２ 及脂质过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）含量明显增加,抗氧化剂抗坏血酸（ＡｓＡ）还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）及胡萝卜素（ＣＡＲ）含量显著降低,叶绿素蛋白复合体（Ｃｈｌ－Ｐｒｏ）结合度松弛． Ｃｈｌ含量的降低和Ｏ－·２ 、Ｈ２Ｏ２ 及ＭＤＡ 含量呈显著的负相关,与ＡｓＡ、ＧＳＨ及ＣＡＲ含量的下降呈良好的正相关性．ＡｓＡ、α－生育酚（ＶｉｔＥ）及甘露醇预处理可使胁迫诱导的ＭＤＡ 增多及Ｃｈｌ降解延缓,而Ｆｅ２＋ 、Ｈ２Ｏ２ 及Ｆｅｎｔｏｎ 反应则刺激ＭＤＡ 增加． Ｆｅｎｔｏｎ 反应可加速Ｃｈｌ降解． 渗透胁迫下水稻幼苗Ｃｈｌ的降解可能主要是由Ｏ－·２ 和Ｈ２Ｏ２ 的代谢产物·ＯＨ氧化损伤之故     

兼具SOD和GPX活力的双功能酶的制备及性质研究

用苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）和Ｈ２Ｓｅ相继处理铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ）,将酶分子中的丝氨酸（Ｓｅｒ）转化为硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ）,从而引入了谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基因,使其在ＳＯＤ酶活性大部分保留的情况下,具有ＧＰＸ活性,其ＧＰＸ活力是ＰＺ５１活力的３０倍,研究了双功能酶的最佳制备条件,包括ＰＭＳＦ的剂量、反应最适温度及Ｈ２Ｓｅ处理时间等,并用电子能谱、ＤＴＮＢ等方法     

高密度脂蛋白体外氧化修饰动力学研究

在体外ＨＤＬ在Ｃｕ＾２＋诱导下可发生氧化修饰,为了探讨体外务浆高密度脂蛋白（ＨＤＬ）氧化修饰中几种产物的动力学改变,用Ｃｕ＾２＋与ＨＤＬ保温２￣２４ｈ,分别观察了ＨＤＬ氧化修饰过程中硫代巴比妥酸反应物质（ＴＢＡＲＳ）,脂氢过氧化物（ＬＯＯＨ）、共轭二烯（ＣＤ）及相对电泳迁移率（ＲＥＭ）等的变化。结果显示,ＬＯＯＨ和ＣＤ两个指标动力学变化相似,呈现延滞期,扩增期和下降期三个时相,而ＴＢＡＲＳ和ＲＥＭ     

蚕豆种子超氧物歧化酶的纯化及性质

蚕豆种子粗提液经乙醇－氯仿混合物处理、丙酮沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素层析和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ层析,获得比活性为２８５２单位ｍｇ－１蛋白的超氧物歧化酶．经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明酶已纯化到均一程度．该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２敏感,说明它为Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ．酶分子量和亚基分子量分别为３１０００和１４４００,说明它是由两个相同亚基组成。该酶在７０℃以下和在ｐＨ５—９条件下稳定．紫外区最大吸收峰为２７３．５ｎｍ。     

人铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆和乳酸乳球菌中的表达

采用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人肝总ＲＮＡ中分离扩增了０．４５ｋｂ的人铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ）基因的ｃＤＮＡ序列,首先克隆至大肠杆菌表达质粒ｐＥＴ２３ｂ,进行了序列测定和超高表达,将Ｃｕ／Ｚｎ,ＳＯＤｃＤＮＡ亚克隆至乳酸乳球菌表达载体ｐＭＧ３６ｅ,用电穿孔法将重组质粒ｐＭＧ３６ｅｓｏｄ转化到乳酸乳球菌,获得Ｃｕ／Ｚｎ ＳＯＤ的组成型表达,其表达量约占乳酸乳球菌可溶性蛋白的５％以上,活性染色表     

几种氨基酸─铜（Ⅱ）配合物的超氧化物歧化酶活性

用四氮唑蓝光化学还原法对所合成的ＫＣｕ（ＩＤＡ）（Ｓｅｒ）·２Ｈ２Ｏ、ＫＣｕ（ＩＤＡ）（Ａｌａ）·Ｈ２Ｏ、Ｃｕ（ＩＤＡ）（ｅｎ）、ＫＣｕ（ＩＤＡ）（Ｇｌｙ）·Ｈ２Ｏ和Ｃｕ（ＩＤＡ）·２Ｈ２Ｏ（ＩＤＡ＝Ｎ（羧基甲基）－甘氨酸,Ｓｅｒ＝丝氨酸,Ａｌａ＝丙氨酸,ｅｎ＝乙二胺,Ｇｌｙ＝甘氨酸）等５种氨基酸─铜（Ⅱ）配合物进行了活性测定,发现它们均具有天然超氧化物歧化酶活性,其活性依次为０．３４、０．４５、０．５０、０．５４、０．７２Ｃｕμｍｏｌ·Ｌ－１。     

SOD对骨髓造血祖细胞在4°C条件下保存损伤的防护作用

为了探讨抗氧化剂对造血干细胞在低温条件下损伤的防护作用,将小鼠骨髓细胞置于４℃条件下保存,观察在保养液中加入不同浓度的Ｃｕ、Ｚｎ、ＳＯＤ对细胞死伤的防护效果和马血清对细胞回收率的影响。结果表明,含２０％的马血清保养液中加入ＳＯＤ１．６５Ｕ或０．１６５Ｕ／ｍｌ,保存３天,ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－Ｍｅｇ、ＣＦＵ－Ｍｉｘ的产率分别为对照组（不加ＳＯＤ）的６．２、２．６、２．９、４．０和５．１倍,明显提高了造血祖细胞的活存率,其中ＣＦＵ－ＧＭ和ＣＦＵ－Ｍｉｘ达到保存前水平。ＳＯＤ的有效作用机理不是对造血祖细胞增殖调控作用,而是防护了细胞的死亡。这可能与其清除过氧自由基的抗氧化作用有密切关系。     

NMR法研究天花粉蛋白TDK肽片段的溶液构象

用ＨＮＭＲ法测定ＴＤＫ肽在Ｈ２Ｏ（ＨＯＤＫ）,５０％六氟丙醇（ＦＰＤＫ）和２ｍｏｌ／ＬＧｕ．ＨＣｌ（ＧＵＤＫ）溶液构象。在ＨＯＤＫ和ＦＰＤＫ中,ＴＤＫ肽的两段序列Ａｓｐ０－Ｉｌｅ４,Ｓｅｒ９－Ｉｌｉ１７分别具有较稳定的α－螺旋含量;而ＧＵＤＫ的ＳＡＬＳ序列仍能检测到有序残存结构。并假设ＳＡＬＳ序列是肽链形成二级结构的原始核心。     

金属硫蛋白清除自由基及其对自由基引起的核酸损伤保护作用的研究

通过化学反应体系产生ＯＨ－和Ｏ自由基,采用荧光和化学发光检测体系,比较研究了不同亚型及不同结合金属的金属硫蛋白（ＭＴ）清除自由基能力的大小。结果表明,对于同一亚型,Ｚｎ结合ＭＴ清除自由基的能力大于Ｃｄ结合ＭＴ同一结合金属的ＭＴ,ＭＴ１清除自由基的能力大于ＭＴ２。通过比较ＺｎＭＴ１与谷胱甘肽（ＧＳＨ）及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）清除自由基的能力大小发现,ＺｎＭＴ１清除ＯＨ的能力是ＧＳＨ的１００倍,清除Ｏ自由基的能力分别是ＧＳＨ和ＳＯＤ的２５和０．０１倍。即ＭＴ是一种很好的ＯＨ自由基清除剂。以ＯＨ对核酸（ＤＮＡ）的损伤为例,研究了ＭＴ对核酸损伤的保护作用,其变化规律与上述结果相一致。     

用顺磁共振及自旋标记研究活性氧对铜锌超氧化物歧化酶结构的影响

用抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）或过氧化氢为活性氧体系分别作用于牛红细胞铜锌超氧化物歧化酶（ＣｕＺｎ－ＳＯＤ）,发现酶活性降低的同时,其活性中心中Ｃｕ（Ⅱ）被还原成Ｃｕ（Ⅰ）。进一步用抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）或过氧化氢作用于马来酰亚胺标记ＣｕＺｎ－ＳＯＤ,用ＥＳＲ测定的结果表明酶分子亚基的缔合受到影响。结果提示酶的失活与活性中心中Ｃｕ（Ⅱ）的还原及酶构象的变化有关。     

SOD对骨髓造血祖细胞在4℃条件下保存损伤的防护作用

为了探讨抗氧化剂对造血干细胞在低温条件下损伤的防护作用,将小鼠骨髓细胞置于４℃条件下保存,观察在保养液中加入不同浓度的Ｃｕ、Ｚｎ、ＳＯＤ对细胞死务的防护效果和马血清对细胞回收率的影响。结果表明,含２０％的马血清保养液中加入ＳＯＤ１．６５Ｕ或０．１６５Ｕ／ｍｌ,保存３天,ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－Ｍｅｇ、ＣＦＵ－Ｍｉｘ的产率分别为对照组的６．２、２．６、２．９、４．０和５．１倍。明显提高了造