膜渗滤亲和层析法纯化腹水单克隆抗体

用膜渗滤亲和层析法纯化腹水单克隆抗体（McAb）.采用硝酸纤维素膜（NCM）作固相支持物吸附抗原,用负压使小鼠腹水渗滤NCM,在滤过的同时腹水中的McAb不断结合于NCM上吸附的抗原,再将McAb从NCM上解离,从而得到高纯度的McAb.用此法纯化抗白蛋白（Alb）McAb.结果提纯的Alb McAb纯度达PAGE电泳单条带,将此McAb点样NCM用于斑点免疫渗滤法（DIFA）检测Alb,其灵敏度比用腹水点样时高20倍.该法快速简便,可代替亲和层析柱用于纯化McAb.     

应用斑点金免疫渗滤试验快速同步检测抗HIV-1,HIV-2 IgG抗体

应用斑点金免疫渗滤试验(dotimmunogoldfiltration assay,DIGFA)建立了一种同步快速检测四种抗HIV-1/2IgG抗体的HIV诊断试纸.通过基因工程技术在大肠杆菌中表达了5种HIV抗原蛋白片段(P24,GP41,GP36,GP120V3,GP120C).这5种抗原蛋白首先被固定在硝酸纤维素膜上,然后滴加待测血清,其中的病毒抗体通过免疫反应与抗原结合,再加胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(SPA),待其渗过膜片后,洗涤,即可形成肉眼可见的红色斑点.用已确证的21份HIV阳性血清(其中包括1份HIV-1标准阳性血清和1份HIV-2标准阳性血清)和30份阴性血清进行了试验,结果表明该快速检测方法与ELISA方法无显著差异.该检测方法不需任何仪器,仅凭肉眼即可判定结果,整个检测过程不超过5分钟.与传统的的ELISA法相比,具有方便快速,成本低廉,应用范围广等优点.同时,此HIV快速诊断试纸可以同步检测并区分针对HIV-1和HIV-2感染的不同检测标志物(抗P24、GP41、GP120和GP36抗体),这对提高快速检测的灵敏度和准确性,以及对判断HIV感染者是否临近或已进入AIDS期有着较高的应用价值.     

应用斑点金免疫渗滤试验快速同步检测抗HIV-1，HIV-2 IgG抗体

应用斑点金免疫渗滤试验(dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA)建立了一种同步快速检测四种抗HIV-1/2IgG抗体的HIV诊断试纸。通过基因工程技术在大肠杆菌中表达了5种HIV抗原蛋白片段(P24,GP41,GP36,GP120V3,GP120C)。这5种抗原蛋白首先被固定在硝酸纤维素膜上,然后滴加待测血清,其中的病毒抗体通过免疫反应与抗原结合,再加胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(SPA),待其渗过膜片后,洗涤,即可形成肉眼可见的红色斑点。用已确证的21份HIV阳性血清(其中包括1份HIV-1标准阳性血清和1份HIV-2标准阳性血清)和30份阴性血清进行了试验,结果表明该快速检测方法与ELISA方法无显著差异。该检测方法不需任何仪器,仅凭肉眼即可判定结果,整个检测过程不超过5分钟。与传统的的ELISA法相比,具有方便快速,成本低廉,应用范围广等优点。同时,此HIV快速诊断试纸可以同步检测并区分针对HIV-1和HIV-2感染的不同检测标志物(抗P24、GP41、GP120和GP36抗体),这对提高快速检测的灵敏度和准确性,以及对判断HIV感染者是否临近或已进入AIDS期有着较高的应用价值。     

丙型肝炎病毒感染的体外培养细胞的抗原表达

建立丙型肝炎病毒（HCV）体外感染细胞模型,观察其感染细胞的HCV抗原表达,用抗HCV抗体和HCVRNA阳性及阴性血清感染MOLT-4细胞,制备细胞片进行免疫酶染色。结果显示HCV感染MOLT-4细胞4天和阴性对照HCV抗原均为阴性;感染后7天胞浆内可见HCV抗原阳性免疫反应产物;15天阳性细胞达到高峰,43天仍可见少量阳性细胞。结果表明HCV体外感染MOLT-4细胞胞浆内观察到HCV抗原表达。     

抗t-PA抗体水平和血栓的相关性研究

目的:研究自身免疫性疾病病人抗t-PA抗体水平和病人血栓形成之间的关系。方法:用酶联免疫吸附法(ELISA)检测原发性抗磷脂综合症和红斑狼疮患者(32例狼疮样抗凝物阳性,32例狼疮样抗凝物阴性)与40例健康对照的IgG类抗t-pA抗体的水平,用Pearson Chi-Square test的方法分析了病人体内IgG类抗t-PA抗体水平和血栓之间的相关性。结果:本试验研究的病人群体中IgG类抗t-PA抗体阳性的有13(20.3%)个,并且我们的研究表明IgG类抗t-PA抗体阳性和血栓病史显著相关(P=0.04)。结论:原发性抗磷脂综合症和红斑狼疮病人群体中有较高的IgG类抗t-PA抗体水平,它们可能和病人体内血栓的发生有关。     

用轮状病毒抗原包被固相以ELISA法检测粪便中IgA

<正>本文介绍了ELISA方法,并报道了用此法得知的粪IgG的一些特征。 材料和方法 抗原:人轮状病毒“Wa”株在加胰酶的MA104细胞上增殖后,聚乙二醇浓缩,再用CsCl密度梯度离心法纯化。收集内衣壳形成的带(密度,1.38g/Cm~3),4℃保存待用。     

SLE患者血清中SARS-CoV抗体阳性原因分析

为了探讨严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(SARS-CoV)抗体测定在系统性红斑狼疮(SLE)患者中的假阳性问题,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量RT-PCR技术检测了66例正常对照和31例SLE患者血清中SARS-CoV抗体的阳性率。结果,66例正常对照中,IgM抗体均阴性,IgG抗体的阳性率为3.0%(2/66);31例SLE患者中,IgM抗体和IgG抗体阳性率分别为29%(9/31)和58.1%(18/31),IgG抗体和IgM抗体同时阳性为22.6%(7/31)。经RTPCR检测,上述阳性病例均为阴性。结论:用非纯化抗原制备的ELISA试剂盒测定SLE患者的SARS-CoV抗体,可能出现假阳性,两种抗体同时测定可降低诊断的假阳性率,提高诊断的特异性。在SLE患者中出现假阳性的原因可能与包被的抗原有关。     

小鼠神经生长因子直接竞争酶联免疫检测方法的建立

目的:利用小鼠神经生长因子(mNGF)和纯化的兔抗mNGF IgG,建立mNGF直接竞争酶联免疫检测方法。方法:以亲和纯化兔抗mNGF IgG作为包被抗体,封闭、洗涤后加入用稀释液稀释的不同浓度的标准mNGF或样品液和生物素标记的mNGF混合液,于37℃孵育80 min或室温孵育120 min,洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的链酶亲和素,洗涤后加入显色液显色,测定D450nm值,通过标准曲线计算待测样品中mNGF含量。结果与结论:建立了mNGF直接竞争酶联免疫检测方法;该方法的灵敏度约20 ng,变异系数为批内≤10%、批间≤15%,回收率为85%～115%;利用该方法检测了3批样品中mNGF的含量。     

用生物素—亲和素酶染色法检测流行性出血热病人血清抗体

目前,生物素—亲和素系统在微生物方面的应用主要局限于ELISA法。我们用生物素一亲和素酶染色法(BAPS)检测流行性出血热(EHF)患者血清抗体,获得满意结果。 用BAPS法检测10份EHF患者的抗体及滴度,用兔抗76-118血清作为已知阳性对照,同时以20份非EHF患者血清为阴性对照。首先分别将感染了流行性出血热病毒陈株、A9株、R22株的Verc-E6细胞固定于含12个憎水漆圈的载玻片上,于此三种抗原片上分别滴加上述待检血清,37℃湿盒30分钟,PBS-     

斑点ELISA法检测幽门螺旋菌感染的研究

用幽门螺旋菌(HP)的超声粉碎物为抗原,建立了斑点ELISA法检测人血清中抗HP—IgG方法。该法敏感性为94.4％,特异性为87.5％,阳性预测值为97.1％,阴性预测值为77.8％。对271例儿童抗HP抗体调查,发现HP感染与儿童性别无关(P>0.05)。1月以内新生儿抗体检出率59.4％,1～12月婴儿抗体检出率最低(29.1％),1岁后开始逐渐上升,2岁后即可达到50％以上,接近成年人水平。结果表明,我国HP感染年龄早,感染率高。     

质粒DNA抗原芯片检测抗双链DNA抗体的初步研究

目的:建立以质粒DNA作为抗原的检测血清中抗双链DNA(dsDNA)抗体的芯片方法,并与酶联免疫吸附实验比较,初步探讨用芯片法检测抗dsDNA抗体的临床价值。方法:将原核表达载体质粒pcDNAⅡ用质粒DNA快速抽提试剂盒提取纯化DNA后按1∶2稀释,用点样仪点在经3-氨丙基三乙氧基硅烷(APES)修饰的玻片上,温孵后用含有1%小牛血清白蛋白和2.5%蔗糖的PBST封闭,以Cy3标记的人IgG为二抗,建立检测dsDNA抗体的芯片方法,并与德国欧蒙公司生产的抗双链DNA检测ELISA试剂盒做比较,对包括58例系统性红斑狼疮(SLE)、25例干燥综合征(SS)、10例皮肌炎(DM)和7例类风湿关节炎(RA)在内的病人和60例健康人对照进行了抗dsDNA的对比检测。结果:对阳性标本的检测,与现用常规检测方法ELISA相比,芯片检测抗dsDNA的灵敏度为91.3%,特异度为90.7%,阳性预测值为89.3%,阴性预测值为92.5%;对健康对照的检测,2种方法均为阴性,符合率为100%。结论:与ELISA相比,用质粒DNA作为抗原建立的芯片方法的灵敏度和特异度较高,为今后建立同时检测多个自身抗体的芯片奠定了基础。     

SLE患者血清中SARS—CoV抗体阳性原因分析

为了探讨严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(SARS—CoV)抗体测定在系统性红斑狼疮(SLE)患者中的假阳性问题,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量RT—PCR技术检测了66例正常对照和31例SLE患者血清中SARS—CoV抗体的阳性率。结果,66例正常对照中,IgM抗体均阴性,IgG抗体的阳性率为3．0％(2／66);31例SLE患者中,IgM抗体和IgG抗体阳性率分别为29％(9／31)和58．1％(18／31),IgG抗体和IgM抗体同时阳性为22．6％(7／31)。经RT—PCR检测,上述阳性病例均为阴性。结论：用非纯化抗原制备的ELISA试剂盒测定SLE患者的SARS—COV抗体,可能出现假阳性,两种抗体同时测定可降低诊断的假阳性率,提高诊断的特异性。在SLE患者中出现假阳性的原因可能与包被的抗原有关。     

猪和牛轮状病毒抗原和抗体的检测

应用ELISA直接双抗体夹心法检查轮状病毒抗原,24份仔猪和29份犊牛的腹泻粪样,分别有12和16份阳性。用病毒RNA电泳分析检查阳性粪样,各出现两种病毒RNA电泳型,用中和试验检查17份成年牛和16份成年猪血清,分别有16和15份病毒抗体阳性。将其与ELISA间接法和结合法进行了比较。     

肿瘤患者血清中SARS-CoV抗体阳性原因分析

探讨SARS冠状病毒(SARS—CoV)抗体在SARS病原学诊断中的特异性及其在肿瘤患血清中的假阳性问题。应用ELISA和荧光定量RT-PCR技术检测了111例正常对照和40例肿瘤患血清中SARS—CoV抗体的阳性率。在111例正常对照中,IgM抗体均阴性,IgG抗体的阳性率为3．6％(4／111);IgG抗体诊断SARS的特异性为96．4％,两种抗体同时阳性诊断SARS的特异性为100％。40例肿瘤患中,IgM抗体均阴性,IgG抗体阳性率17．5％(7／40)。经RT—PCR检测,上述肿瘤患阳性病例均为阴性。结果表明,同时测定SARS—CoV的两种抗体可降低诊断的假阳性率,提高诊断的特异性。用非纯化SARS—CoV抗原制备的ELISA试剂盒测定肿瘤患的SARS—CoV抗体,可能出现假阳性。在肿瘤患中出现假阳性的原因可能与包被的抗原有关。     

膜芯片检测A组轮状病毒的初步研究

建立表面带正电荷的尼龙膜为基片的基因芯片,采用RT-semi-nested PCR方法,对A组轮状病毒RNA实现高度扩增,并通过5'端带地高辛标记的上游引物实现扩增产物的标记.通过同膜芯片上探针的杂交和免疫显色,实现对A组轮状病毒的检测.结果表明,膜芯片对探针的固定效果、杂交吸脱和检测结果可靠,空白对照和阴性对照均为阴性,探针均显示为阳性信号,并且信号强弱与探针浓度关系不大,而主要与探针本身同互补链的结合相关.以上结果说明已经初步建立了快速检测A组轮状病毒的膜基因芯片检测技术.     

用固相放射免疫方法分析流行性乙型脑炎病毒抗原

用固相放射免疫方法对3株流行性乙型脑炎病毒(JEV)进行了抗原分析,其中日本分离的2株(中山予研株,Mie 44-1株),中国分离的1株(A_2株)。为了纯化抗原,先将3株病毒的小鼠免疫血清分别加入到聚脂纤维柱,进行免疫亲合层析,对照抗原同样处理。固相放射免疫测定是将纯化病毒抗原与对照抗原先用超声波(10kc30秒)处理,使之均质化。铁珠(直径为4.2mm)计数后,放入4单位抗原悬液中,4℃下作用60分钟,然后将抗原包被的铁珠加入稀释的小鼠抗血清中,4℃下作用60分钟,用磁性     

念珠菌血症时甘露聚糖抗原及其IgG抗体检测诊断价值的临床研究

目的评价念珠菌甘露聚糖抗原（M抗原）及甘露聚糖IgG抗体（M-IgG抗体）检测诊断念珠菌血症的价值。方法收集2013年5月～2014年1月我院住院患者及健康体检人群共107例,包括念珠菌血症组（念珠菌血培养阳性患者）13例、危险因素组（临床诊断侵袭性念珠菌病或接受化疗恶性疾病、留置深静脉置管等侵袭性念珠菌病感染高危患者）63例和对照组（健康体检人群）31例。通过ELISA方法检测甘露聚糖抗原及甘露聚糖IgG抗体,比较3组人群检测阳性情况及持续时间,计算两种方法的灵敏度、特异度、阴性预测值、阳性预测值、ROC曲线下面积及Kappa值。结果白念珠菌和光滑念珠菌为念珠菌血症的主要念珠菌病原,均为5例。念珠菌血症的7／14菌株（1例患者合并2种念珠菌感染）来自重症医学科,其次为感染内科（2／14株）。除1例死亡病例外,余12例患者进行了M抗原和M—IgG抗体监测。首次M抗原检测中,4例阳性,1例可疑阳性;首次M-IgG抗体检测中,11例阳性,1例可疑阳性。经抗真菌治疗,监测14d,M-IgG抗体持续阳性时间长于M抗原。甘露聚糖抗原在诊断念珠菌血症的敏感度41．7％,特异度98．8％,阴性预测值92．4％,阳性预测值100％。甘露聚糖IgG抗体在诊断念珠菌血症的敏感度91．7％,特异度52．8％,阴性预测值100％,阳性预测值27．5％。M抗原、M抗原并M—IgG抗体作为念珠菌血症时诊断实验的ROC曲线下面积均为0．708（95％CI：0．517—0．900）,两者的Kappa值分别为0．520和0．559。结论甘露聚糖抗原在诊断念珠菌血症时的特异度较高,甘露聚糖IgG抗体在诊断念珠菌血症的敏感性较高,两者的联合检测可以适当提高检测的敏感度及特异度,有助于念珠菌血症的诊断。     

斑点ELISA检测感染华支睾吸虫兔血清抗体

许多报道表明,斑点ELISA用于单克隆抗体Ig型别和IgG亚类的鉴定及寄生虫病的检测,不仅有较好的敏感性及特异性,而且快速、简便。我们以此法试用于人工感染华支睾吸虫兔血清抗体的检测,结果如下。材料及方法硝酸纤维素膜:浙江黄岩人民化工厂产。华支睾吸虫抗原:冻干成虫可溶性抗原,1:200。检测血清:(1)华支睾吸虫兔血清:采自经口感染华支睾吸虫囊蚴后40—50天粪检虫卵阳性之兔;(2)免疫兔血清:以华支睾吸虫抗原免疫。方法按余等(1982)皮内免疫法进行。血清IgG提纯按北京医学院微生物学教研组(1980)方法分别用50%和33%饱和度(NH4)2SO4盐…     

猴B病毒抗体ELISA检测方法的建立和应用研究

目的　建立猴B病毒抗体ELISA检测方法。方法　采用方阵滴定法 ,比较不同血清稀释度、3种酶结合物、2种抗原对检测结果的影响 ,与国外同类参比实验室进行检测结果的比较 ,确定ELISA法的最佳实验条件。结果　HSV抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为 1∶2 0 0 0时 ;或B病毒抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为1∶4 0 0 0时 ,阴性血清和阳性血清的A值差距最大。与国外B病毒检测专业实验室的检测结果符合率分别为98 0 2 %和 97 5 2 %。结论　建立了猴B病毒抗体的ELISA检测方法 ,提高了检测方法的准确性。     

快速斑点免疫结合试验的研究进展

快速斑点免疫结合试验（ＤｏｔＩｍｍｕｎｏｂｉｎｄｉｎｇＡｓａｙＤＩＢＡ）是８０年代中期发展起来的固相标记免疫测定技术,其原理是以微孔滤膜为载体,通过渗滤或毛细管作用,使抗原抗体快速进行反应检测数分钟完成,阳性结果在膜上出现着色斑点。近年来,利用微孔滤膜的过滤性能或毛细管作用,创造了各种简便快速的ＤＩＢＡ,如斑点酶免疫渗滤试验,斑点金免疫渗滤试验,斑点免疫层析试验,本文对其原理、反应模式、质量控制、发展趋势及应用作一简要综述