宫颈癌中p53表达和病毒感染的研究

应用PCR对121例宫颈脱落细胞和组织分别检测HPV-16／18和HSV-2DNA。同时应用免疫组化S-P法检测76例宫颈组织中P53过度表达。结果发现,宫颈癌组织中HPV-16／18和HSV-2阳性率分别为61．3％和32．3％,慢性宫颈炎组HPV-16／18和HSV-2阳性率分别为22．5％和20．0％,与正常宫颈组比较均有显著性差异。宫颈癌中HPV-16／18和HSV-2混合感染率为16．1％。p53过度表达率在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈癌组织中呈梯度递增。另外,宫颈癌组织中P53过度表达与HPV-16／18、HSV-2的感染无相关性。提示：宫颈癌的发生与HPV-16／18关系密切,HSV-2可能与HPV-16／18协同作用导致宫颈癌的发生。宫颈组织中p53过度表达率与宫颈癌的进程有关,这在宫颈癌的防治方面有一定的临床意义。     

VEGF和p53蛋白在宫颈癌中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子VEGF和p53蛋白在宫颈癌及正常宫颈组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法检测VEGF和p53蛋白在55例宫颈癌、15对经放化疗前后的宫颈癌组织、18例正常宫颈组织中的表达情况。结果:VEGF和p53蛋白在宫颈癌中强阳性表达、正常宫颈组织中少量表达,两者之间有显著性差异(P<0.05);VEGF和p53的表达与宫颈癌临床分期显著相关(P<0.05),与分化程度显著相关(P<0.05),与放化疗前后相关(P<0.05);VEGF与p53蛋白在宫颈癌组织中阳性表达呈正相关(P<0.01)。结论:VEGF和p53蛋白在宫颈癌的演进中,尤其在宫颈癌的浸润和转移方面,很可能起着相互促进的作用。因此,联合检测VEGF和p53蛋白的表达可提高宫颈癌的转移及预测临床诊治的准确性。     

宫颈癌HPV-16感染对P53蛋白表达的影响

目的探讨宫颈癌HPV-16感染对P53蛋白表达的影响.方法采用免疫组化SP法分别检测75例宫颈癌和81例宫颈炎组织的HPV-16蛋白和P53蛋白表达情况.结果HPV-16蛋白在宫颈癌组织的表达率(73.3%,55/75)与宫颈炎组织(81.5%,66/81)差异无显著性;P53蛋白在宫颈癌组织的表达率(46.7%,33/75)高于宫颈炎组织(29.6%,24/81)(P＜0.05).宫颈癌组织HPV-16阳性组的P53蛋白阳性率(49.1%,27/55)高于HPV-16阴性组(40.0%,8/20)(P＜0.05);宫颈炎组织HPV-16阳性组的P53蛋白阳性率(36.4%,24/66)高于HPV-16阴性组(0%,0/15)(P＜0.05).宫颈癌和宫颈炎组织HPV-16蛋白与P53蛋白表达呈正相关(P＜0.05).结论HPV-16感染在宫颈癌和宫颈炎组织普遍存在,突变型P53蛋白的表达上调可作为宫颈癌发生的预警信号,HPV-16可能通过导致p53基因突变促使宫颈癌发生.     

人乳头状瘤病毒、单纯疱疹病毒2 型和巨细胞病毒感染与宫颈癌的相关性研究进展

宫颈癌是最常见的女性生殖道恶性肿瘤,人乳头状瘤病毒感染(HPV)是宫颈癌的主要致癌因素,此外其他病毒感染如单纯疱疹病毒2型(HSV-2)﹑人类巨细胞病毒(HCMV)也引起了人们的重视。作者对HPV﹑HSV-2﹑HCMV的感染途径,感染的人群,致癌机制与宫颈癌之间的相关性研究进展作一综述。     

广东食管癌中Epstein-Barr病毒感染与细胞增殖p53的关系

目的 :研究食管癌中 EB病毒感染情况 ,探讨其与肿瘤细胞增殖及抑癌基因 p5 3的关系。方法 :应用聚合酶链反应技术 (PCR)检测食管癌中 EB病毒 DNA的感染。用免疫组化方法检测其中 p5 3的表达及肿瘤细胞增殖。结果 :2 4例食管癌中 ,EB病毒 DNA阳性率为 95 .8% (2 3/2 4)。 2 3例阳性病例中存在 p5 3蛋白积聚者为 16例 ,积聚率为 6 9.6 % (16 /2 3) ;1例 EB病毒 DNA阴性者 ,p5 3蛋白染色阴性。 p5 3蛋白积聚与增殖细胞核抗原的表达密切相关 (P<0 .0 5 )。结论 :广东食管癌中普遍存在 EB病毒的感染。有 EB病毒感染的病例 ,亦存在 p5 3蛋白积聚。 EB病毒可能与 p5 3的改变有关 ,从而导致细胞增殖。     

P_(53)突变、表达及人乳头状瘤病毒感染与宫颈癌

利用免疫组化、聚合酶链反应(PCR)、单链构象多态性(SSCP)分析等方法, 对49例同一标本宫颈癌组织中p53蛋白、P53外显子7～8变异、HPV6、11、16、18-DN A进行检测,以探讨它们在宫颈癌形成中的作用、相互关系和临床意义.结果表明: a.P5 3基因外显子7～8突变率14.29％、p53蛋白阳性率48.98％、HPV-DNA阳性率87.76％.b.P53基因突变不一定伴有p53蛋白阳性,但P53基因突变而p53蛋白阴性的标 本必是HPV-DNA阳性;91.67％的p53蛋白阳性标本具有HPV-DNA阳性.c.HPV16-DNA阳 性率显著高于HPV6、11、18-DNA阳性率.证明：宫颈癌的发生主要与HPV16感染有关,其 次是P53基因突变所致;p53蛋白阳性由HPV感染和/或P53基因突变所致.     

人乳头状瘤病毒感染与肺癌关系的研究进展

近年越来越多的研究发现肺癌组织中有人乳头状瘤病毒（human papillomavirus,HPV）DNA和癌蛋白的检出,其检出率具有地域差异性,但不同地方HPV检出亚型具有高度的一致性,主要是高危型HPV-16和HPV-18。HPV可能主要通过血液循环从宫颈癌病灶等原发部位转移到肺,从而可能诱发肺癌的发生。HPV诱发肺癌的机制可能与影响p53的失活及端粒酶的激活等有关。     

P53 Codon 72 多态性、P53 表达与宫颈癌放疗敏感性 相关性的研究

目的:研究P53 Codon 72多态性、P53的表达与宫颈癌放疗敏感性的相关性.方法:Ib2期宫颈癌患者274例,术前192Ir腔内后装4次,A点放疗剂量2400cGy,一周2次,共2周.治疗后14d进行广泛性子宫切除.据术后病理放疗反应HE染色结果分为放疗敏感与放射抗拒两组.免疫组化SP法检测P53蛋白在治疗前宫颈癌组织中的表达,分析放疗敏感与放射抗拒两组P53蛋白表达差异有无显著性意义;采用PCR后测序的方法检测治疗前P53第72密码子的基因型频率多态性(P53Codon 72),分析放疗敏感与放射抗拒两组中各P53Codon72基因型的差异有无显著性意义.结果:放疗抗拒组与放疗敏感组相比,P53高表达的比例显著高于P53低表达的比例(P=0.00081).P53 Codon 72多态性分析,Pro/Pro与Arg/Arg、Pro/Pro与Arg/Pro在放疗敏感组与放疗抗拒组的分布差异显著(P值分别为P=0.009和P=0.032);Arg/Arg与Arg/Pro,在放疗敏感组与放疗抗拒组的分布无显著差异(P=0.503).结论:P53 Codon 72多态性和P53蛋白与宫颈癌放疗敏感性有相关性,可以作为早期宫颈癌放疗敏感性的预测指标.     

甲状腺肿瘤p53mRNA及p53蛋白表达的研究

本文采用原位杂交法、免疫组织化学方法分别检测了甲状腺癌ｐ５３ｍＲＮＡ、ｐ５３蛋白的表达,结果显示：２０例甲状腺癌ｐ５３ｍＲＮＡ、ｐ５３蛋白均呈阳性反应,８例甲状腺瘤仅１例呈弱阳性反应,８例Ｇｒａｖｅｓ病全部呈阴性反应。细胞质和细胞核ｍＲＮＡ、ｐ５３蛋白灰度检测发现,甲状腺瘤细胞质、核ｐ５３ｍＲＮＡ灰度值和ｐ５３蛋白灰度值均明显高于Ｇｒａｖｅｓ病,而甲状腺癌其细胞质、核ｐ５３ｍＲＮＡ灰度值和ｐ５３蛋白灰度值又明显高于良性甲状腺瘤,提示甲状腺癌ｐ５３ｍＲＮＡ和ｐ５３蛋白的高表达可能与甲状腺肿瘤细胞分化程度有关     

P53 Codon 72多态性、P53表达与宫颈癌放疗敏感性相关性的研究

目的：研究P53 Codon 72多态性、P53的表达与宫颈癌放疗敏感性的相关性。方法：Ib2期宫颈癌患者274例,术前192Ir腔内后装4次,A点放疗剂量2400cGy,一周2次,共2周。治疗后14d进行广泛性子宫切除。据术后病理放疗反应HE染色结果分为放疗敏感与放射抗拒两组。免疫组化sP法检测P53蛋白在治疗前宫颈癌组织中的表达,分析放疗敏感与放射抗拒两组P53蛋白表达差异有无显著性意义;采用PCR后测序的方法检测治疗前P53第72密码子的基因型频率多态性（P53 Codon 72）。分析放疗敏感与放射抗拒两组中各P53 Codon 72基因型的差异有无显著性意义。结果：放疗抗拒组与放疗敏感组相比。P53高表达的比例显著高于P53低表达的比例（P=O．00081）。P53 Codon 72多态性分析,Pro／Pro与Arg／Arg、Pro／Pro与Arg／Pro在放疗敏感组与放疗抗拒组的分布差异显著（P值分别为P=0．009和P=0．032）;Arg／Arg与Arg／Pro,在放疗敏感组与放疗抗拒组的分布无显著差异（P=O．503）。结论：P53Codon72多态性和P53蛋白与宫颈癌放疗敏感性有相关性,可以作为早期宫颈癌放疗敏感性的预测指标。     

胃粘膜损伤中EB病毒感染与P53抑癌基因突变的研究

为了探讨EB病毒（EBV）感染与胃癌发生的关系,应用PCR技术对166例胃粘膜损伤标本的EBVDNA进行检测．其中66例应用银染PCR－SSCP分析技术检测了p53exon5～8突变情况,10例应用直接法原位PCR技术检测了EBV在组织中的感染情况。结果166例标本中EBV感染率为30．1％;EBV在细胞中感染大体是弥散型,主要存在于细胞核。66例标本中p53基因突变率为54．5％。对比分析,EBV阳性标本中p53基因突变率为75％（21／28）,EBV阴性标本中p53基因突变率为39．5％（15／38）。结果表明,EBV对胃粘膜组织细胞具有易感性,p53基因突变在胃粘膜病变中是一个常发事件,EBV感染与p53基因突变之间存在着高度相关性．对癌症的发生具有重要作用。     

HSP70 和P53 蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达 及其与临床病理特征的关系

目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)和P53蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:应用免疫组织化学Envision法检测35例甲状腺乳头状癌组织、15例甲状腺良性病变组织及15例正常甲状腺组织中HSP70和P53蛋白的表达,分析HSP70和P53蛋白的表达与甲状腺乳头状癌临床病理学特征的关系。结果:甲状腺乳头状癌组织中HSP7O和P53阳性表达率明显高于甲状腺良性病变组织及正常甲状腺组织(P<0.01)。HSP7O在甲状腺乳头状癌组织中的表达与是否有颈部淋巴结转移、浸润深度以及AJCC分期密切相关(P<0.01),而与年龄、性别、肿瘤的大小以及分化程度无关(P>0.05)。P53在PTC组织中的表达与组织分化程度、是否有淋巴结转移、浸润深度以及AJCC分期密切相关(P<0.01),而与年龄、性别、肿瘤的大小无关(P>0.05)。HSP70和P53蛋白在PTC组织中的表达呈正相关性(r=0.679,P<0.01)。结论:HSP70和p53蛋白在PTC中均呈高表达,并有协同作用,两者可作为预测PTC的生物学行为和预后的参考指标。     

p53 cDNA的克隆及在CV-1细胞中的表达

构建了可在哺乳动物细胞表达人p53基因的重组质粒pSV2neo-p53,并通过脂质体lipofectin介导转染猴肾细胞CV-1,用新霉素类抗生素G418筛选出阳性克隆。用原位杂交法检测转化细胞中的p53 mRNA;用免疫组化ABC法证明转化细胞的胞核中有p53蛋白表达。     

HSP70和P53蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的：探讨热休克蛋白70（HSP70）和P53蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法：应用免疫组织化学Envision法检测35例甲状腺乳头状癌组织、15例甲状腺良性病变组织及15例正常甲状腺组织中HSP70和P53蛋白的表达,分析HSP70和P53蛋白的表达与甲状腺乳头状癌临床病理学特征的关系。结果：甲状腺乳头状癌组织中HSP70和P53阳性表达率明显高于甲状腺良性病变组织及正常甲状腺组织（P〈0．01）。HSP70在甲状腺乳头状癌组织中的表达与是否有颈部淋巴结转移、浸润深度以及AJCC分期密切相关（P〈0．01）,而与年龄、性别、肿瘤的大小以及分化程度无关（P〉0．05）。P53在PTC组织中的表达与组织分化程度、是否有淋巴结转移、浸润深度以及AJCC分期密切相关（P〈0．01）,而与年龄、性别、肿瘤的大小无关（P〉0．05）。HSP70和P53蛋白在PTC组织中的表达呈正相关性（r=0．679,P〈0．01）。结论：HSP70和p53蛋白在PTC中均呈高表达,并有协同作用,两者可作为预测PTC的生物学行为和预后的参考指标：     

Expression of the p53 Gene and Activation of p53-Dependent Transcription in Melanoma Cell Lines

Malignant melanoma has poor prognosis because of its high metastatic potential and resistance to chemotherapy. A possible approach to more effective therapy is induction of p53-dependent apoptosis. This approach is promising, since the wild-type _p53 is expressed in most melanomas. An attempt was made to estimate the functional activity of p53 in several malignant melanoma cell lines. Most lines were characterized by a high protein level and nuclear localization of p53. All cell lines expressing the wild-type p53 showed stabilization of p53, its translocation into the nucleus, and activation of several target genes in response to DNA-damaging agents, suggesting that p53 was functionally active. A high-molecular-weight protein localized in the cytoplasm and mimicking a p53 epitope was found in several cell lines. It was shown that the DO-1 epitope is not derived from p53, ruling out cytoplasmic retention of p53 in melanoma cell lines. A mechanism of camptothecin-induced stabilization of p53 by decreasing the level of the HDM2 mRNA was described for melanoma cells but not for normal melanocytes, suggesting a differential effect of camptothecin on tumor-derived and primary cells.__________Translated from Molekulyarnaya Biologiya, Vol. 39, No. 3, 2005, pp. 445–456.Original Russian Text Copyright © 2005 by Razorenova, Agapova, Chumakov.     

含p53保守结合位点的microRNA表达载体的构建及应用

目的:构建含p53保守结合位点的microRNA(miRNA)表达载体,促进相关miRNA在具有野生型p53蛋白细胞中的高效表达。方法:改构miRNA表达载体pCMV-miR,在其多克隆位点前插入p53保守结合位点,分别将miR-138、miR-34a和miR-21前体序列pre-miR-138、pre-miR-34a和pre-miR-21插入上述改构的载体pCMV/p53-miR,将构建的pCMV/p53-miR-138、pCMV/p53-miR-34a和pCMV/p53-miR-21表达载体转染具有野生型p53的HeLa细胞和不表达p53的H1299细胞,分析p53对上述miRNA表达调控的影响。结果:转染改构的miRNA表达载体后,HeLa细胞中miR-138、miR-34a和miR-21的表达水平明显提高,它们对应的已知靶基因Cyclin D3、CDK2和PTEN的表达同时被显著下调。结论:在p53转录调控作用下,具有p53保守结合位点的miRNA表达载体能够更加有效地提高miRNA的表达水平;构建的载体不但可用于促进相关miRNA的表达,也能用于miRNA是否受p53调控的检测。     

p53蛋白多肽片段在大肠杆菌中的表达

在所有研究过的人体肿瘤组织或细胞中,ｐ５３似乎是突变频率最高的一个基因,研究和检测ｐ５３基因及其编码产物的变化将具有重要的意义。我们将野生型ｐ５３基因编码区３’端７０３ｂｐ的ｃＤ－ＮＡ片段插入到大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０中,得到了一个重组体表达质粒ｐＲＲ３３,经热诱导表达,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法证实ｐ５３蛋白多肽在大肠杆菌中得到了表达,它不仅可用于抗ｐ５３蛋白抗体的制备,而且也可用于对ｐ５３蛋白羧基端多肽功能的研究。     

湖南地区汉族人群p53 基因第72 位密码子多态性与宫颈鳞癌的相关性

目的:探讨宫颈组织p53基因第72位密码子的多态性及分析第72位密码子的多态性与湖南地区汉族人群宫颈鳞癌的相关性。方法:采用PCR方法扩增101例正常宫颈和150例宫颈鳞癌石蜡组织p53基因第72位密码子基因,回收目的片段进行测序。采用SPSS 11.5软件分析p53基因第72位密码子的多态性。结果:p53第72位密码子基因测序结果显示,在宫颈鳞癌组织中Arg/Arg、Pro/Pro、Arg/Pro所占比例分别为40.66%、16.67%、42.67%;在正常宫颈组织中Arg/Arg、Pro/Pro、Arg/Pro所占比例分别为47.53%、7.92%、44.55%。统计学分析结果显示,Arg/Arg和Arg/Pro基因型在宫颈鳞癌和对照组中的表达差异没有统计学意义(P>0.05);Pro/Pro基因型在宫颈鳞癌组中所占比例显著高于正常宫颈组织(P<0.05)。结论:p53基因第72位密码子Pro/pro基因型是湖南地区女性发生宫颈鳞癌易感因素。