裂褶菌培养基形态学观察和DNA序列分析

目的通过观察裂褶菌在5种培养基上的生长状态、扫描电镜及DNA序列分析,了解该菌形态学及分子生物学等方面的特征。方法菌落转种于沙氏培养基(SDA),麦芽浸膏琼脂(MEA),马铃薯葡萄糖琼脂(PDA),玉米粉琼脂(CMA)和察氏琼脂(CZA)平皿培养基,27℃和37℃培养2周,观察菌落生长情况,进行扫描电镜检测及DNA序列分析。结果菌落在SDA,MEA和PDA上生长状态较好,呈蓬松白色羊毛状;尿素酶试验阳性,放线菌酮耐受试验阴性。光镜下见分支分隔菌丝、侧生的钉状突起及类水母体变异子实体。扫描电镜见菌丝分隔处闭锁联合、侧生钉状突起和泪滴状球形分泌物。经26S rDNAD1/D2区序列分析证实该菌株为裂褶菌。结论裂褶菌只有丝状型一种菌落形态;分支分隔菌丝及分隔处闭锁联合,侧生钉状突起和泪滴状球形分泌为其形态学特征;孢子由类水母状子实体产生。     

丛生丝孢酵母菌的生物学特性观察

探讨了丛生丝孢酵母菌的生物学鉴定特性。采用真菌培养法观察丛生丝孢酵母菌的培养特性、同化试验;耐受试验测定对放线菌酮的耐受性;体外双相形态转换试验确定霉菌相及酵母相;微量稀释法进行抗真菌药物敏感试验;温度耐受性试验、干燥试验、紫外线照射试验测定其抵抗力;小鼠腹腔接种法观察其侵袭力。本菌为双相型真菌,经分离培养该菌呈现真菌所特有的菌落特征,在沙氏肉汤中呈菌膜和沉淀生长;玉米粉琼脂小培养,在镜下可见到大小不等圆形和卵圆形孢子。对10种糖类同化试验阳性,不分解尿素,还原硝酸盐。对氟康唑等4种抗真菌药均敏感;对温度、干燥、紫外线有一定耐受力;侵袭力较弱,组织内酵母相呈细胞内感染。结论观察丛生丝孢酵母菌的生物学鉴定特性,对丛生丝孢酵母菌的实验室鉴定奠定基础和临床诊断提供依据。     

红色毛癣菌的生物学特性研究

目的 观察红色毛癣菌在不同温度、不同培养基上的生长和产孢情况,并对其进行分子生物学鉴定.方法 ①大培养:采用沙堡葡萄糖琼脂(SDA)和马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平皿,27℃、35℃黑暗培养,测量菌落直径,绘成生长曲线.②小培养(钢圈法):采用SDA、PDA、溴甲酚紫乳固体葡萄糖琼脂(BCP-MSG)、乳蜜琼脂(M)和复合维生素B(VitB)培养基,27℃、30℃黑暗培养,观察镜下菌丝生长、孢子产生情况.③进行rDNA 18S和ITS序列测定.结果 在SDA,PDA上,27℃条件下菌落生长速度较35℃快;在5种培养基上,SDA、PDA产孢较快较多,复合维生素B培养基产孢较慢,但产生大分生孢子较多.30℃产孢更丰富.对部分菌株rDNA ITS、18S PCR扩增产物纯化后直接测序,结果在GenBank中比对、分析,相似度为98%～100%,均鉴定为红色毛癣菌.结论 SDA、PDA均为鉴定和分离红色毛癣菌的合适培养基.5种培养基均可用来刺激红色毛癣菌产孢,其中SDA、PDA产孢较早、较丰富.红色毛癣菌rDNA 18S和ITS序列测定是一种快速准确的红色毛癣菌分子生物学鉴定方法.     

地生弯颈霉的培养与生长条件

从长白山北坡森林土壤中分离纯化得到1株地生弯颈霉(Tolypocladium geodes),对其培养及生长条件(如培养基、光照、温度、碳源、氮源和pH等)进行了试验。结果表明,地生弯颈霉在麦芽浸膏琼脂培养基(MEA)上菌落生长直径最大,马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上产孢量最高;5~30℃温度范围内均能生长,25℃时生长和产孢量最佳;最适碳源和氮源分别为葡萄糖和柠檬酸铵;光暗交替条件下,最利于其生长和产生孢子;pH4~9范围内均能生长和产孢,pH=8时菌落直径最大,pH=6时产孢量最高。     

束状刺盘孢的体外培养条件研究

目的对束状刺盘孢体外培养,观察形态特征。方法将束状刺盘孢接种在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)中分别置于4℃、28℃、35℃和37℃下培养2周,观察生长情况;选取生长最好的菌株分别接种在沙堡弱培养基(SDA)、PDA、察氏培养基(CPA)、胡萝卜琼脂培养基(CDA)和玉米粉培养基(CMA)中,同一温度下培养2周,观察菌落形态及镜下形态。结果菌株在28℃条件下生长最快、菌落发育饱满、产生灰色色素;菌株在五种培养基中生长快慢依次是PDA>CDA>CMA>SDA>CPA,菌落在PDA、CDA和CMA中呈鼠灰色,SDA中呈白色和棕色,CPA中呈白色和鼠灰色,SDA和CPA中未见分生孢子和刚毛产生。结论在PDA、CDA和CMA中28℃条件下,较适合束状刺盘孢生长。     

临床常见酵母菌的特征和鉴定

自然界酵母有500多种,但能致病的只有20多种,主要见于念珠菌属、隐球菌属、球拟酵母、丝孢酵母属和地霉属。酵母的特性：以芽殖为主的单细胞真菌,菌落呈乳酪样,无毛样气生菌丝（见图1）。对人类有致病性的酵母可依菌落形态分为两类：一类是酵母菌：单细胞,呈圆形或卵圆形,以母细胞产生芽胞而繁殖,不形成有性孢子。当酵母菌生长于固体培养基时,其形成的菌落与细菌菌落较为类似,不同于霉菌的粉状菌落,如隐球菌即属于此类。另一类是类酵母样真菌：圆形或卵圆形细胞,以出芽生殖而繁殖,有芽生孢子、菌丝,无子囊。     

新生隐球菌的酚氧化酶及用于菌种鉴定的研究

采用4％玉米浸汁咖啡酸琼脂(CACA)培养基。观察了具不同生物学特性的新生隐球菌的酚氧化酶活性,并对临床常见的多种酵母和酵母样真菌作了该酶的检测。结果,受试的3个变种、5种血清型和尿素酶阴性新生隐球菌均呈明确的阳性反应;150株常见酵母和酵母样真菌中43株新生隐球菌全部呈酚氧化酶阳性。107株其它酵母和酵母样真菌全部阴性。具各种不同生物学特性的新生隐球菌均特异性地产生酚氧化酶,用检测该酶的方法作该菌鉴定的特异性和敏感性均为100％,且可于72小时内得到结果。此外,结合尿素酶试验可以准确的鉴定出尿素酶阴性的新生隐球菌。     

林生地霉血液分离株的形态学观察

目的 进一步了解林生地霉的形态学特征和产孢方式。方法受试菌株复苏后,转种于沙堡培养基,37℃和27℃温箱培养3周,每天观察菌落生长情况,并对其丝状型和酵母样型两种菌落进行光镜观察。在培养1周时,挑取菌落常规制片后行扫描电镜和透射电镜观察。结果 培养第2～3d,菌落开始生长,初为白色绒毛样、粉末样,1～2周后菌落均转变为乳酪样,其中37℃下培养的菌落转变较早。菌丝相时,光镜下可见丰富的分支、分隔菌丝,成链的关节孢子和圆形、椭圆形小分生孢子。酵母相时,光镜下可见丰富的芽生孢子,少量的厚膜孢子、外生或内生的关节孢子,菌丝稀少。扫描电镜下可见菌丝分支末端或侧面着生球形、棒状的分生孢子,末端凹陷。透射电镜下可见分生孢子与菌丝分离时全壁断裂,另一端正在出芽。结论 林生地霉包括丝状型和酵母样型两种菌落形态和链状排列的矩形关节孢子、圆形或椭圆形的小分生孢子、厚膜孢子以及分支、分隔菌丝为其形态学特征,有芽殖、外生和内生节孢子三种产孢类型。     

都柏林念珠菌的鉴定及与白念珠菌3种表型鉴别方法的研究

目的 从临床分离的念珠菌中进一步鉴定都柏林念珠菌,并评价3种表型鉴别白念珠菌和都柏林念珠菌的方法.方法 对17株临床分离并初步鉴定的白念珠菌和1株ATCC白念珠菌标准株,采用PHR1同源序列PCR法检测,鉴定出其中的都柏林念珠菌;分别采用45℃生长试验、YEPD(1%酵母浸膏,2%蛋白胨,2%葡萄糖)液基39℃芽管生成试验、Staib琼脂(鸟食琼脂)厚壁孢子形成试验对两种菌的表型特点进行比较.结果 17株临床分离的白念珠菌中有3株鉴定为都柏林念珠菌;45℃时,两种菌在改良沙堡弱琼脂上均无明显生长,YEPD液基中仅有1株白念珠菌生长良好;YEPD液基39℃培养2种菌均无芽管生成;Staib琼脂培养72h,3株都柏林念珠菌中有2株可形成厚壁孢子,而白念珠菌则无,与PHR1同源序列检测结果基本一致.结论 PHR1同源序列检测是鉴别都柏林念珠菌与白念珠菌的可靠方法,Staib琼脂厚壁孢子形成试验有助于鉴别两菌,45℃生长试验和YEPD液基39℃芽管生成试验则不能有效鉴别两菌.     

中华羊茅内生真菌Neotyphodium sp.生物学与生理学特性的研究

本文对中华羊茅Festuca sinensis内生真菌Neotyphodium sp.的生物学与生理学特性进行了报道。研究发现:中华羊茅内生真菌能在10-30℃生长,5℃和35℃几乎不能生长,最适生长温度是25℃;适宜的pH是7-9;不同的碳、氮源利用能力不同,利用能力最好的分别是甘露醇和酵母浸液;在不同培养基上的生长速度与产孢特性存在差异,马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上生长最快,水琼脂(WA)和海水营养琼脂(SNA)培养基上生长最慢,但WA和SNA产孢最多。     

Geotrichum sp．SYBC WU-3脂肪酶的双水相萃取和酶学性质

初步研究双水相体系对Geotrichum sp．SYBC WU-3脂肪酶的萃取分离效果,选用PEC4000／NaH2 PO4作为戍相系统进行系统研究,考察影响脂肪酶萃取的各种因素（如PEG相对分子质量及质量分数、NaH2PO4质量浓度、pH）,并采用正交实验进一步优化实验条件,确定双水相萃取体系为PEG质量分数为30％、NaH2PO4质量分数为20％、体系pH为6,在此条件下Geotrichum sp．SYBC WU-3脂肪酶经硫酸铵沉淀和双水相萃取两步纯化的纯化倍数达到最大,较Geotrichum sp．SYBC WU-3脂肪酶粗酶纯化了22倍。Geotrichum sp．SYBC WU-3脂肪酶纯酶为低温碱性脂肪酶,最适反应温度为15oC,最适pH为9．5,相对分子质量为3．58×10^4。     

正己醇降解菌的分离、筛选及分类鉴定

为获得可降解正己醇的真菌菌种,分别以苹果园土壤、苹果渣、苹果酒醪和醋醅为分离源,采用富集培养和紫外线定向诱变,得到了两株能在pH3.8-4.0的条件下降解正己醇的真菌菌株TF和TM。菌株TM和TF在马铃薯葡萄糖培养液中对4.0mg/mL正己醇的降解率分别为45.60±5.43%和23.82±9.27%,与对照在α=0.01水平上差异显著。结合形态学特征及26S rDNA D1/D2区(菌株TM)和ITS区(菌株TF)序列分析,对两株菌进行了分类鉴定。结果表明:菌株TM属于地霉属Geotrichum,菌株TF为白地霉Geotrichum candidum(有性型Galactomyces geotrichum)。     

林生地霉所致小鼠系统感染的形态学研究

目的用组织病理学和电镜的方法观察林生地霉(Geotrichum Silvicola)所致小鼠各感染脏器的形态学改变。方法将72只健康昆明小鼠随机分为3组,免疫正常 腹腔接种组(A组)、免疫抑制 腹腔接种组(B组)和正常对照组(C组)。分期处死各组小鼠,取出肝、肾、脾、肺、心进行大体观察和组织病理学检查,病理切片分别进行HE和PAS染色,同时送扫描和透射电镜观察。结果A组仅有少数几只小鼠肝脏表面见到针尖至粟粒大小的脓性感染灶,数目较少(1.10±1.63),其余脏器偶见。B组大多数小鼠肝脏表面可见脓灶数目较多(8.18±2.59),约针尖至粟粒大小;其次为肺。C组无变化。B组的病理学改变早期以急性炎症反应为主,后期逐渐形成肉芽肿伴慢性炎细胞浸润,PAS染色可见灶状分布的真菌孢子和菌丝。电镜可见感染组织中的孢子和炎症细胞。结论林生地霉所致的系统性感染,肝脏最为易感。组织病理学改变为真菌感染非特异性炎症。     

产低温脂肪酶菌株Geotrichum candidum ch-3的选育、发酵条件及酶学性质研究

从新疆昌吉市油脂化工厂的含油冻土中筛选到一株产低温脂肪酶的菌株ch-3,形态鉴定及18SrDNA序列分析表明该菌株为白地霉,命名为Geotrichum candidum ch-3。我们对其生长及产酶情况和酶性质做了初步研究。该菌株的最适生长温度是20℃。玉米浆、豆油可显著促进脂肪酶的产生。粗酶液经双水相萃取和Sephadex G-75凝胶过滤分离纯化后进行酶学性质的研究。该脂肪酶最适作用温度为35℃,在0℃可保持66%的相对酶活性,最适pH值为7.0,对热较敏感,50℃处理20min,剩余酶活为55%,Fe2＋、Cu2＋、Mn2＋以及Ca2＋对酶有较强的激活作用。     

Assessment of glucosinolate-derived isothiocyanates as potential natural antifungal compounds against citrus sour rot disease agent Geotrichum citri-aurantii

In this study, the antifungal effects of six different isothiocyanate (ITCs) compounds (methyl, allyl, butyl, ethyl, benzyl and 2-phenylethyl ITCs) were investigated to be use against the citrus sour rot disease caused by Geotrichum citri-aurantii in vitro and semi-commercial (in vivo) conditions. Antifungal activities of the vapour phases of different ITC compounds were examined on the arthroconidia germination and mycelial growth of G. citri-aurantii. Mycelial growth of G. citri-aurantii was inhibited in a concentration-dependent way. The minimum inhibitory concentrations of benzyl, methyl, allyl and ethyl ITCs on mycelial growth were 0.06, 0.08, 0.10 and 0.10 µl/L, respectively. Arthroconidia germination of G. citri-aurantii was completely inhibited by benzyl, methyl, allyl and ethyl ITCs at concentrations of 0.05, 0.07, 0.07 and 0.07 µl/L, respectively. Light microscopy observations revealed that the ITC compounds, at completely inhibiting concentrations, caused considerable morphological changes in the fungal hyphae. Under in vivo conditions, the average rotting area caused by G. citri-arantii was inhibited 100% by ethyl, methyl and allyl ITC compounds at concentrations of 8.0, 12.0 and 12.0 µl/L, respectively. Results suggest that ITC’s may be useful and effective natural antifungal compounds to control the citrus sour rot disease agent.     

应用RAPD技术鉴定地霉的实验研究

目的探讨RAPD技术在快速鉴定地霉中应用。方法用E.Z.N.A.yeastDNAkit提取地霉菌基因组DNA,采用随机引物AP3(5'-TCGTAGCCAA-3')、ATG(5'-ATGGATCGGC-3')、RP2(5'-AAGGATCAGA-3')、OPA-10(5'-GTGATCGCAG-3')对临床上致病性白地霉、林生地霉皮损株和血液株的基因组DNA进行扩增,对各病原菌的DNA指纹的特征进行分析。结果成功提取了地霉的基因组DNA,其纯度和浓度均能满足PCR反应的要求。利用4种引物对基因组DNA进行扩增,不同种真菌的DNA显示不同的DNA带型,分离自不同感染部位的同种不同株真菌的DNA显示的主要DNA带型基本一致。结论采用E.Z.N.A.yeastDNAkit提取的地霉基因组DNA可以用于PCR反应。RAPD法鉴定地霉菌简单、快速、特异,可用于临床诊断。     

果香地霉原生质体的释放与再生

本文报道了果香地霉(Geotrichum suaveolens)原生质体释放与再生方法和结果,讨论了影响原生质体释放和再生的几个重要因子用溶壁酶(Lywallzyme)20—25mg/ml处理6—8小时,可获得较高的原生质体得率(5.6—5.9×10~6个/ml),0.8M MgSO_4是理想的稳定剂。对再生过程观察表明,再生具有三种模式,即直接出芽,间接出芽和链式增殖。不同碳源和稳定剂对再生率以及再生模式都有影响。在液体再生培养基中,用纤维二糖作碳源,再生率可达76.3%,在RSDA—甘露醇固体再生培养基中,再生率为8.7%。实验发现,原生质体再生可能存在“邻近效应”,即当一个原生质体再生时,它可活化邻近的原生质体,促其再生,使再生率提高,甚至这种作用还可能影响到再生模式。     

原生质体紫外诱变选育白地霉GXU08脂肪酶高产菌株

目的:初步筛选脂肪酶高产菌株。方法:以白地霉GXU08为出发菌,对其进行原生质体紫外诱变选育。结果:筛选得到6株脂肪酶活力比出发菌株GXU08高的突变株,其中菌株4-39的酶活达14.2U,比GXU08提高了63.2%。突变株经9次传代,3次摇瓶复筛,其脂肪酶酶活性保持稳定,为今后进一步研究不同的育种方法进一步提高脂肪酶的产量打下基础。     

Poly-l-lysine Produced by Streptomyces. Part II. Taxonomy and Fermentation Studies

As a result of screening for a Dragendorff-positive substance of microbial origin, l-lysine homopolymer (25 ~ 30 residues) with alpha and epsilon linkages was obtained from the culture filtrate of an actinomycete identified as Streptomyces albulus. Various cultural conditions for the favorable production of the lysine polymer were studied. The decline of pH during the fermentation process was an essential condition for the accumulation of lysine polymer. The addition of proline had a considerable effect.     

Is There a Correlation of Structure and Activity of Upases Under Various Reaction Conditions?

Five different microbial lipases were tested for their hydrolytic activity with a soluble substrate, for their behaviour in the presence of denaturants and the inhibitory effect of alkyl and arylboronic acids.