关于“分子筛”提法的一点意见

凝胶层析(又称为凝胶过滤或分子排阻层析)是近年来发展起来的一种研究生物大分子的相当普遍的技术。它是根据被研究物质的分子量的不同,因而从凝胶柱上流出的先后次序不同的原理,来分离由不同分子量的物质组成的混合物,所以人们又称之为“分子筛层析”,把凝胶介质在层析中的物理作用称为“分子筛作用”。在涉及到凝胶层析技术的一些文献中,“分子筛”的提法是比较普遍的,但是从凝胶层析分离大分子物质的过程看,“分子筛”这一提法似乎不够确切。     

凝胶过滤法测定蛋白质的分子量

一、分子筛的概念凝胶过滤是分子筛的一种,在介绍凝胶过滤法之前,首先介绍分子筛的由来。1928年,McBain提出了分子筛的概念。后来发现这一现象在许多地方都存在。1950年,Synge与Tiselins在解释凝胶层中的电泳和电渗现象时引用了分子筛的概念。此后发现在柱层析中也有这种现象,于是许多工作者尝试了一系列能适用于生物高分子分离纯化用的分子筛。到     

凝胶色谱法

概述凝胶色谱(凝胶层析)是一种液体柱色谱。利用这种方法,可根据样品中各种物质分子量大小的不同,将样品通过多孔胶床来达到分离的目的。这种方法有许多名称,如凝胶过滤,凝胶渗透色谱,排阻色谱,有限扩散色谱等。目前名称尚未完全统一。由于凝胶色谱有条件温和、方法简便、操作方便、分离范围广泛、重复性强、回收率高等优     

毕赤酵母发酵液的脱色和重组水蛭素的分离

用毕赤酵母表达重组水蛭素的发酵液中含有大量色素和一些杂蛋白。本文对发酵上清的脱色和重组水蛭素的分离进行了探讨。鉴于水蛭素的稳定性 ,用加热法预处理发酵上清取得了满意的效果。对离子交换、疏水层析、凝胶过滤、羟基磷灰石吸附层析以及它们的优化组合进行了研究 ,结果表明 ,阳离子交换层析、凝胶过滤和阴离子交换层析的组合对发酵上清的脱色和重组水蛭素的分离是有效的。     

溶液环境对百日咳疫苗分离纯化的影响

针对百日咳疫苗在低盐条件下不稳定, 容易聚集而导致层析过程收率低、分离度低的难题, 实验中选择脲作为稳定剂来改善百日咳疫苗所处的溶液环境, 并采用离子交换层析和凝胶过滤层析进行百日咳疫苗的分离纯化, 通过ELISA抗原活性测定和还原性SDS-PAGE等方法研究了脲对百日咳疫苗分离纯化的影响。结果表明, 在流动相中加入 2 mol/L脲作为稳定剂, 能显著提高离子交换层析和凝胶过滤层析中的PT和FHA活性回收率、凝胶过滤层析的分离度、PT和FHA的纯度。这些结果对百日咳疫苗的分离纯化和层析工艺优化提供了重要的依据和参考。     

也谈“分子筛”的提法问题

编辑同志:读贵刊1983年第2期龚划时同志“关于‘分子筛’提法的一点意见”一文深有同感。过去我们也曾就此进行过讨论,认为这一提法似乎不够确切,不利于人们(尤其是初学者)学习和掌握。或许有人会说,“分子筛”概念的内涵和外延都远远超出了机械之“筛”的概念。诚然,新近出版的《辞海》对“分子筛”释义道:它“泛指具有均一微孔而能选择性地吸附直径小于其孔径的分子的那些吸附剂。”从这个定义来看,凝胶层析中的葡聚糖等凝胶和电泳中的聚丙烯酰胺凝胶都是“分子筛”,但是,无论是从分离大分     

聚乙二醇修饰重组溶葡球菌酶的初步研究

目的:探讨聚乙二醇(PEG)修饰重组溶葡球菌酶(lysostaphin)的反应条件以及修饰后产物的纯化方法.方法:采用超声波细胞粉碎机进行菌体破碎,阳离子交换层析、疏水层析进行蛋白纯化;在不同条件下,将活化的单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺丙酸酯(mPEG-SPA)与纯化后的lysostaphin反应,以单个PEG-Lysostaphin的比例为指标,用SDS-PAGE、MALDI-TOF-MS方法确定其在修饰产物中的所占比例;采用Sephacryl S-200分子筛凝胶层析法对修饰产物进行分离纯化.结果:mPEG-SPA修饰lysostaphin的反应条件为pH 8.0,温度4℃,lysostaphin与mPEG-SPA的质量比为1∶5,反应时间2.0h;反应产物经一步Sephacryl S-200分子筛凝胶层析纯化后,初步实现分离.结论:初步确定了聚乙二醇修饰lysostaphin的反应条件及修饰产物的纯化方法.     

五步蛇毒降纤酶的快速分离与纯化

目的：建立快速分离纯化降纤酶工艺方法适合于规模化生产。方法以五步蛇毒为原料。采用ＥＤＴＡ络合－硫氰酸钾沉淀初步分离与快速离子交换和凝胶层析化相结合。分离纯化出符合新部颁标准的降纤酶成分。结果经初步分离五步蛇粗毒可使出血毒去除９２％,非类凝血酶（ＴＬＥ）成分去除６５．１７％,ＴＬＥ活性回收保持９２．６８％以上。层析组份中至少含有４种ＴＬＥ,其中１种为降酶成分。初步化学分离,。离子交换柱层析和凝胶过滤     

介绍一种蛋白、配体快速分离的方法——离心柱法

在我们的实验工作中,将生物大分子与配体分离或除去盐份,改变蛋白的缓冲体系的工作,可以说是每天都离不开。透析和分子筛层析等是常用的好方法。但透析方法的缺点是需要时间较长,对于不够稳定的样品也不适用。用分子筛柱可以较快分离,但普通柱层析方法往往导致样品的稀释而不可避免地造成损失。这里介绍一种快速、回收率高且不稀释样品的凝胶柱分离方法。由于这个方法首先由美国纽约城公共     

对脆弱类杆菌β-内酰胺酶及其与肠道微生态学关系的初步探讨

本文利用β-内酰胺酶作为分类学研究的方法,探讨了脆弱类杆菌与肠道菌之间的微生态学关系。临床分离菌株脆弱类杆菌55的β-内酰胺酶经离子交换层析、凝胶过滤和制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯化,纯酶与脂质体-CPS-K佐剂混合制备抗血清,并建立IgG-ELISA和Western blotting方法,其测定结果均表明脆弱类杆菌的β-内酰胺酶不同于其它类杆菌和肠道菌的β-内酰胺酶,具有种的特异性。     

柱串联法在凝胶过渡色谱中的应用一例

凝胶过滤色谱因其操作方法简单、重复性强等特点在大分子的分离化中被广泛使用,特别在基因工程蛋白质类药物的精细纯化中起着难以替代的作用。将Superdex75凝胶柱与SephacrylS-100凝胶柱串联在一起进行凝胶过滤,分离一种用普通凝胶过滤色谱难以分离的样品,成功地将分辨率（Rs）由0．71提高到1．70,得到了基线分离。     

用高效液相色谱法鉴定细菌夹膜多糖菌苗的分子大小

<正>现已证明细菌夹膜多糖的免疫学性质与其分子大小直接相关。因此,在鉴定多糖菌苗的效力及稳定性时,分子筛分离的分子大小是主要的判定标准。 一种适宜的方法已用于脑膜炎双球菌及肺炎双球菌菌苗的测定。此法采用软凝胶如SepharoseCL—4B或Sepharose CL—2B作凝胶色谱基质。按待测多糖体分子大小选用适宜的凝胶型号,例如从     

凝胶过滤层析参数对家蝇蛋白粗提液分离效果的影响

考察了凝胶过滤介质、层析柱直径、柱床高度和洗脱流速对家蝇Muscadomestica蛋白粗提液分离效果的影响,结果表明：凝胶过滤介质种类、层析柱直径、柱床高度、洗脱流速均能不同程度地影响家蝇蛋白粗提液的分离效果。在实验范围内,选择1.3 cm直径、40 cm柱床高度的Sephadex G-75,以0.4 mL/min的流速洗脱时,对家蝇蛋白粗提液的分离效果比较理想。     

括楼素的纯化及其免疫毒素的制备

利用凝胶过滤及离子交换层析从Trichosanthes kirilowii Maximowicz种子中分离出一种核糖体失活蛋白,称之为括楼素(Trichokirin)。这种毒素在无细胞体系中对蛋白质生物合成具有明显的抑制活性而对完整细胞的毒性很低。与单克隆抗体偶联后,括楼素对靶细胞显示了明显的特异性细胞毒作用。     

凝胶过滤

一九二六年MCBain在石油化学中应用沸石已经介绍了“分子筛”的名词。一九五五年Lathe和Ruthken对具有分子筛性能的淀粉作了详细的研究,同年Lindguise氏使用淀粉胶分离了肽和氨基酸。一九五九年Flodin和Porath报导了葡聚糖凝胶(dext-ran gel)在生化中的应用。     

低聚木糖分离纯化的研究进展

综述了低聚木糖分离纯化的研究进展。低聚木糖是一种非消化性寡糖 ,能选择性增殖肠道内双歧杆菌 ,可广泛应用于食品工业和饲料工业。低聚木糖的分离纯化技术主要包括层析分离技术 (包括凝胶过滤层析、离子交换层析和吸附层析 )和膜分离技术 (包括超滤、纳滤和反渗透 )。低聚木糖的提纯主要采用膜分离技术和层析分离技术 ,低聚木糖单一组分的分离主要采用凝胶过滤层析和吸附层析     

重组羧肽酶原B的复性方法研究

构建的羧肽酶原B表达质粒在大肠杆菌中获得高表达。但目的蛋白是以包涵体的形式存在。为了获得活性羧肽酶B,必须对其包涵体进行变复性。首先利用稀释复性确定了羧肽酶原B复性的最佳缓冲液;在凝胶过滤复性中,研究了柱长和洗脱流速对羧肽酶原B复性效率的影响;另外对比了稀释复性、透析复性、凝胶层析复性和Ni2 亲合层析法等四种方法对羧肽酶原B的复性效果。结果发现,这4种方法的复性效果有以下顺序:凝胶过滤复性>稀释复性>Ni2 亲合层析>透析复性。     

圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化的特性

圆弧青霉突变株ＰＧ３７发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质５２００ｕ的碱性脂肪酶,纯化倍数１６．５,得率３３．２％,在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电脉（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）上均呈现单一 白质条带。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和凝胶过滤分别测得酶的分子量为２７．５ｋＤ和２９．ｋＤ,表明该酶以单体形式存在。Ｎ末端１０个氨基酸的序列测     

超滤法及其应用

超滤法是一种根据溶液中分子的大小和形态,在埃(10~(-8)厘米)数量级选择性过滤的技术。这种方法,在一定的压力下(外源N_2压或真空泵压),使溶剂和较小分子的溶质能通过一定孔径的薄膜,大分子的溶质则不能透过,从而可以使高分子物质脱盐、脱水和浓缩;在一定的条件下,还可以起到分离和纯化的作用。从另一角度来看,超滤也可以认为具有溶液相的分子筛作用,根据所用超滤膜的型号不同,可以在分子量500—100,000内进行筛分。     

嗜热毛壳菌外切葡聚糖纤维二糖水解酶的纯化和部分性质研究

研究液体发酵嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum)产生的一种外切葡聚糖纤维二糖水解酶的分离纯化及特性。粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子层析、Sephacryl S-100分子筛层析、Q Sepharose Fast Flow强阴离子层析等步骤后获得凝胶电泳均一的外切葡聚糖纤维二糖水解酶。经12.5%SDS-PAGE和凝胶过滤层析方法测得该酶的分子量大小约为66.3kDa和67.1kDa。该酶反应的最适温度和pH值分别为65℃和5.0。在60℃以下酶比较稳定,在70℃酶的半衰期为1h,在80℃下保温20min仍具有20%的活性,该酶的热稳定性较中温真菌的同类酶高,与国外报道的嗜热真菌的同类酶热稳定性接近。以pNPC为底物的Km值为0.956mmol/L。