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1.
大肠杆菌精氨酰—tRNA合成酶高表达条件的优化及酶… 总被引:3,自引:2,他引:3
控制培养基中氨苄青霉素的用量、PH和培养时间,从含E.coli args变种ARGS381KA的E.coli TG1转化子中,得到了E.coli ArgRS变种ArgRS381KA的高表达。从2升培养液中得到15克湿菌体,粗抽液中ArgRS381KA的比活为503单位/毫克。经过两次DEAE-Sephacel柱层析,在4天时间内,可得到78毫克电泳一条的纯酶,活力回收达80%。该方法可以作为从含a 相似文献
2.
胶质细胞衍生的神经营养因子成熟肽基因的克隆、表达及纯化的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
通过PCR的方法克隆了胶质细胞衍生的神经营养因子(gliacel-linederivedneu-rotrophicfactor,GDNF)成熟肽的基因,并将其连接到E.coli高效表达载体pET16b,在E.coli中获得高效表达.表达蛋白占菌体总蛋白21%以上,以包涵体形式存在,经体外复性后用金属螯合亲和层析的方法得到具有较高纯度和活性rhGDNF. 相似文献
3.
N~+离子注入对不同辐射敏感性微生物超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性的影响 总被引:8,自引:0,他引:8
以E.coli和耐辐射生球菌(Deinococcusradiodurans)为试材,研究了N^+离子注入对其SOD,CAT和POD活性的影响及共对自由基的清除,结果表明:D.radiodurans经N^+离子注入后SOD和CAT酶活高于E.coli的,而POD酶活不仅很低于E.coli的;随剂量的增大,两者SOD和CAT酶活均为增后减,只是其SOD酶活的变化峰值对应剂量分别为6×10^15N^+/ 相似文献
4.
控制培养基中氨苄青霉素的用量、pH和培养时间,从含E.coliargy变种argr381KA的E.coliTG1转化子中,得到了E.coliArgRS变种ArgRS381KA的高表达。从2升培养液中得到15克湿菌体,粗抽液中ArgRS381KA的比活为503单位/毫克。经过两次DEAESephacel层析,在4天时间内,可得到78毫克电泳一条带的纯酶活力回收达80%。该方法可以作为从含args的E.coliTG1转化子中提纯E.coliArsRS的通用方法。 相似文献
5.
利用突变的绿色荧光蛋白基因为标记构建新型克隆载体 总被引:3,自引:0,他引:3
将三位点替换突变的绿色荧光蛋白(GFP_S65T、V68L、S72A)基因插入到pBluescriptSK(+)的XbaⅠ和SacⅠ之间,构建为新型的克隆载体pGreenLD。此质粒载体在E.coli中表达后使菌落在日光下呈现黄绿色,而在长波紫外光照射下呈现亮绿荧光,当外源DNA片段插入该载体的多克隆位点使gfp基因表达受阻时,转化的E.coli菌落为白色。因此可以用E.coli菌落黄绿色/绿色荧光的消失作为检测指标来筛选含有重组质粒的克隆。 相似文献
6.
E.coli分泌表达载体的构建和人表皮生长因子在E.coli中的分泌… 总被引:2,自引:0,他引:2
采用PCR技术从E.coli基因组片中克隆出碱性磷酸酯酶的启动子和信号肽序列,在PhoA启动子5端设计了EcoRⅠ酶位点,在信号肽编码序列3端设计了HindⅢ酶切位点,将PCR产物酶切后EcoRⅠ-HindⅢ片段克隆至pBR322的EcoRⅠ-HindⅢ倍点,组构出含有PhoA启动子和信号肽序列的分泌表达载体pBM-Pho-,之后将人表皮生长因子的成熟肽基因克隆至该载体,使之有E.coli中获得分 相似文献
7.
利用突变的绿化荧光蛋白基因为标记构建新型克隆载体 总被引:1,自引:0,他引:1
将三位点替换突变的绿色荧光蛋白(GFP-S65T、V68L、S72A)基因插入到pBluescript SK(+)的XbaⅠ和SacⅠ之间,构建为新型的克隆载体pGreenLD。此质粒载体在E.coli中表达后使菌落在日光下呈现黄绿色,而在长波紫外光照射下呈现亮绿荧光,当外源DNA片段插入该载体的多克隆位点使gfp基因表达受阻时,转化的E.coli菌落为白色。因此可以用E.coli菌落黄绿色/绿色 相似文献
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采用PCR技术从E.coli基因组片段中克隆出碱性磷酸酯酶(PhoA)的启动子和信号肽序列.在PhoA启动予5'端设计了EcoRⅠ酶切位点,在信号肽编码序列3'端设计了HindⅢ酶切位点.将PCR产物酶切后EcoRⅠ-HindⅢ片段克隆至pBR322的EcoRⅠ-HindⅢ位点,组构出含有PhoA启动子和信号肽序列的分泌表达载体pBM-Pho-1.之后将人表皮生长因子的成熟肽基因克隆至该载体,使之在E.coli中获得分泌表达,另采用pINⅢ载体系统以分泌方式表达了人表皮生长因子。 相似文献
9.
乳酸菌素对指示菌作用方式的研究 总被引:2,自引:1,他引:2
利用指示菌生长曲线法和琼脂再培养法研究了乳酸杆菌AT-1产生的乳酸菌素对指示菌(Escherichiacoli.sp.4447)的作用方式。与大多数抑菌剂的作用规律相似,乳酸菌素在极低浓度(<24WU:106个E.colisp.4447)时,能刺激指示菌的生长;达到一定浓度之后,开始表现出抑菌作用,并且随其浓度逐渐增高(40~80WU:106个E.colisp.4447),抑菌作用更加显著直至完全抑制指示菌的生长。取检测平板上透明圈区域的琼脂块于肉汤液体培养基中37℃再培养24h,指示菌仍能生长,该结果表明:由乳酸杆菌AT-1产生的乳酸菌素对指示菌的生长呈现抑制作用。 相似文献
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大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG-2100的构建及应用 总被引:3,自引:0,他引:3
利用分子生物学方法,构建了大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG-2100,研究了编码日本血吸虫中国大陆株谷胱甘肽S-转移酶抗原基因在卡介苗中的表达,以含人结核杆菌热休克蛋白70基因全长序列的质粒pMT-70为模板,扩增出hsp70启动子,测序选出无错配的启动子,将其定向克隆入E.coli-Mycobactrium穿梭质粒pBCG-2000中,构建成E.coli-Mycobacterium穿梭表达 相似文献
12.
55只Balb/c小鼠,5只作为正常对照组,其余50只荷瘤后随机分为10组, 5组为 TES对照组, 5组为E. coliDNA治疗组。荷瘤第4d起,分别于治疗组和对照组小鼠皮下注射 DNA(100mg/L)或 TES(0. 1mol/L),0.3ml/只,隔日1次,共5次。于荷瘤第5,9,13,17,21d处置对照组和治疗组各一组小鼠,进行E.coliDNA抗肿瘤免疫的动态研究。结果表明, E. coli DNA体内抑瘤作用出现早、强且持久,主要是通过诱导肿瘤组织坏死所致,它可迅速持久地激活免疫系统,防止出现免疫低下或紊乱;对照组小鼠荷瘤早期可出现暂时的免疫功能增强,随荷瘤时间延长,逐渐降低至较低水平,并出现免疫紊乱。 相似文献
13.
大肠杆菌脂多糖核心型及其检测方法 总被引:2,自引:0,他引:2
柯岩 《微生物学免疫学进展》2000,28(4):90-94
大肠杆菌脂多糖核心型根据其化学结构的不同分为5种,即E.coli R1、R2、R3、R4和K12。用传统化学分析法检测大肠杆菌脂多糖核心型,极为复杂,此法只适用于实验室研究。为此,我们建立了E.coli脂多糖核心型血清学检测法,并对致病性大肠杆菌和正常人类粪便中分离的大肠杆菌脂多糖核心型进行了检测。 相似文献
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利用枯草杆菌碱性蛋白酶E基因的信号顺序构建分泌表达载体 总被引:7,自引:0,他引:7
本文利用枯草杆菌碱性蛋白酶基因E(aprE),对建立枯草杆菌分泌表达的载体-宿主系统作了探讨。首先用大肠杆菌-枯草杆菌穿梭的启动子克隆质粒pGKV210对aprE的启动子功能进行检测,发现用E.coli作为研究aprE表达信号的“中间宿主”是可行的;然后在穿梭质coli作为研究,aprE表达信号的“中间宿主”是可行的;然后在穿梭质粒,进而构建了基于aprE启动子和信号顺序的分泌表达载体pSP1和p 相似文献
15.
日本血吸虫26kD抗原基因在BCG中的表达 总被引:5,自引:0,他引:5
研究了外源基因日本血吸虫26kD抗原(Sj26GST)在卡介苗(bacilusCalmete-Guerin,BCG)、耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)和大肠杆菌(E.coli)中的表达.运用重组DNA和聚合酶链反应(PCR)等分子生物学技术,以表达Sj26GST的E.colipGEX衍生质粒为模板,经PCR得到编码Sj26GST的全长cDNA片段.将其按正确的阅读框顺序,克隆到人结核杆菌热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)70的启动子下游,再将HSP70启动子和Sj26GST基因一起亚克隆到E.coli-分枝杆菌穿梭质粒pBCG-2000中,得到E.coli-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG-Sj26.pBCG-Sj26电转化入BCG和M.smegmatismc2155中表达Sj26GST抗原,所表达的天然重组Sj26GST(rSj26GST)为可溶性蛋白,在SDS-PAGE上分子量为26kD处可见明显的表达蛋白带.其表达量分别占BCG和M.smegmatis菌体总蛋白的15%和10%.可见,Sj26GST基因能在BCG中高效表达. 相似文献
16.
利用重组DNA技术在大肠杆菌中克隆并表达了金黄色葡萄球菌A蛋白SpA。在E。coli RR1中SpA的表达量随培养温度的升高而增加,42℃的表达量是23℃的6倍,但该在热休克应答缺陷的E.coli CAG597及CAG627中却消失。当删除spa基因上游的一段序列后,仍有SpA表达,但其表达量的热休克效应在E.coliRR1中也消失。这表明被删除的序列后,仍有SpA表达,但其表达量的热休克效应在E 相似文献
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N~ 离子注入对不同辐射敏感性微生物超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性的影响 总被引:13,自引:0,他引:13
以E.coli和耐辐射微球菌(Deinococcusradiodurans)为试材,研究了N+离子注入对其SOD、CAT和POD活性的影响及其对自由基的清除。结果表明:D.radiodurans经N+离子注入后SOD和CAT酶活高于E.coli的,而POD酶活不仅很低也低于E.coli的;随剂量的增大,两者SOD和CAT酶活均为先增后减,只是其SOD酶活的变化峰值对应剂量分别为6×1015N+/cm2和2×1015N+/cm2,而CAT的则均为4×1015N+/cm2;它们的POD酶活变化则不同,各处理耐辐射微球菌POD酶活保持低而恒定的水平,而大肠杆菌的则是中低剂量较恒定,较高剂量逐渐增大;对1016N+/cm2注入的细胞培养到后对数期,再测其自由基ESR波谱信号强度,发现比同剂量注入、未进行培养的要弱的多。 相似文献
18.
将生孢噬纤维粘菌(SporocytophagaB29)染色体用PstI部分酶切后,连接到大肠杆菌(E.coli)质粒载体pUC8上,然后转化E.coliJM83,从而建立了B29的基因文库,并筛选一个含有内切葡聚糖纤维素酶(CMCase)的阳性克隆.从此阳性克隆中提取质粒再转化JM83,发现所有的氨苄青霉素抗性(Apr)转化子都具有CMCase酶活性,证明在大肠杆菌中克隆到一个B29的内切葡聚糖酶基因. 相似文献
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痢疾福氏2a asd基因的克隆及其序列分析 总被引:5,自引:0,他引:5
本文根据大肠杆菌(E.coli)K12asd基因两侧序列设计了一对引物,用全菌PCR扩增了福氏2a T32株的asd基因及其两侧序列。对PCR产物的初步结果表明,在asd基因两端存在BamH I位点。为了防止由PCR扩增带来的差错,我们又从福氏2a T32株染色体中克隆了全长的asd基因。序列分析了结果表明,福氏2aT32株asd基因的序列与E.coli K12的完全一致,全长1680bp,其两侧 相似文献
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分泌型重组人生长激素的研制 总被引:5,自引:2,他引:3
从人脑垂体组织中克隆了人生长激素基因并构建了分泌型表达基因工程菌E.coliK802/pAVGH。研制的rhGH中试产品,各项技术指标均达到临床应用要求 相似文献