Glycine—SDS—PAGE测定小分子多肽分子量

小分子多肽分子量的测定 ,目前多采用Ｔｒｉｃｉｎｅ -ＳＤＳ -ＰＡＧＥ系统[1～ 3 ] ,但系统中的Ｔｒｉｃｉｎｅ价格昂贵 ,加之电泳时间较长 ( 3～ 4ｈ) ,为此 ,作者经过实验摸索 ,建立了Ｇｌｙｃｉｎｅ -ＳＤＳ -ＰＡＧＥ测定小分子多肽的方法。1　材料和方法表 1　制胶配方成分分离胶 (ｍｌ)浓缩胶 (ｍｌ)分离胶单体母液 1 3 3 -浓缩胶单体母液 -0 23 2ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ-ＨＣｌ 1 3 3 -(ｐＨ8 8)0 5ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ-ＨＣｌ -0 3 8(ｐＨ6 8)尿素 1 44ｇ -Ｈ2 Ｏ 0 40 910 %ＳＤＳ 40 μｌ 15 μｌ10 %ＡＰＳ 2 5 μｌ 12 μｌＴ…     

三种海鸟卵壳的超微结构和无机成分的研究

应用扫描电镜和ＴＮ－５５００能谱仪对三种海鸟卵壳的超微结构和基本无机元素进行研究分析,结果表明,基本结构相似,但表层突起和裂纹,乳锥和锥本形态,以及气孔在单位面积内的数量,壳膜与卵壳的锚连方式,壳膜元素组成等都存在着不同,这既反映其遗传,繁殖生理功能上的差异,也显示了不同种鸟卵壳之间的相似和相异性,因而对研究严分类和地理分布具有一定差异价值。     

牛微量白细胞样品的处理及其Y染色体特异DNA的扩增

本文建立了牛微量白细胞样品的处理及其Ｙ染色体特异ＤＮＡ的扩增的方法。采集成年公牛全血,用ＥＤＴＡ抗凝血。分离白细胞,用０．１４５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ洗净,用０．１４５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ稀释,计数。分别将０．５、５０、５００细胞在含１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ、５０ｍｍｏｌ／ＬＫＣｌ、２ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２、０．４５％ＮＰ－４０、０．４５％Ｔｗｅｅｎ－２０、０．１ｍｇ／ｍＬ蛋白酶Ｋ、总体积２０μ     

高浓度钾抑制杜氏盐藻生长的生理机制

在含１ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ的杜氏盐藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌａｓａｌｉｎａ（Ｄｕｎａｌ）Ｔｅｏｄ．）培养液中加入５０ｍｍｏｌ／Ｌ以上的ＫＣｌ可观察到Ｋ＋对杜氏盐藻生长有明显的抑制作用,而当ＫＣｌ达１００ｍｍｏｌ／Ｌ时,杜氏盐藻的生长被完全抑制。另一方面,当培养液中缺乏Ｋ＋时,杜氏盐藻的生长也被显著抑制。在正常培养条件下,伴随着杜氏盐藻的生长,培养液的ｐＨ由８左右升高至１０左右,而高浓度Ｋ＋则显著抑制杜氏盐藻培养液ｐＨ的升高;而在培养液ｐＨ为７．０至１０．０的范围内,不同ｐＨ对杜氏盐藻的生长无明显影响。将杜氏盐藻在高浓度Ｋ＋条件下预处理１２ｈ以上,杜氏盐藻的光合放氧速率显著下降,光合速率下降的程度与Ｋ＋浓度的高低和预处理的时间长短呈正相关。高浓度Ｋ＋处理也引起杜氏盐藻叶绿素含量的显著下降。对经高浓度Ｋ＋预处理的杜氏盐藻的光合放氧速率与培养液中ｐＨ变化同时进行测定的结果表明,Ｋ＋抑制杜氏盐藻光合速率的同时也显著抑制了光照条件引起的培养液ｐＨ的上升。实验结果表明,Ｋ＋抑制杜氏盐藻光合作用以及抑制杜氏盐藻生长与Ｋ＋影响跨盐藻质膜的质子运输之间可能存在一定关系。     

蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)对ATEE的降解

赤子爱胜蚓（Ｅｉｓｅｎｉａｆｅｔｉｄａ）体内的一种纤溶酶原激活剂（ｅ－ＰＡ）能够降解人工合成底物Ｎ－乙酰－Ｌ－酪氨酸乙酯（ＡＴＥＥ）,该降解反应的最适ｐＨ为８．５,而且在０．２ｍｏｌ／ＬＮａ２ＨＰＯ４中的活性要强于在０．０５ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．５）中．分别测定了ｅ－ＰＡ的大小亚基及全酶在０．２ｍｏｌ／ＬＮａ２ＨＰＯ４与０．０５ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．５）两种体系中的Ｋｍ和Ｋｃａｔ．结果表明,在０．２ｍｏｌ／ＬＮａ２ＨＰＯ４中,全酶的ＡＴＥＥ活性远远高于大小亚基单独的ＡＴＥＥ活性,而在０．０５ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．５）中则没有这种现象．从蛋白质结构的角度对这一结果作了解释．用不同抑制剂和ｅ－ＰＡ作用,结果表明,ｐｅｐｓｔａｔｉｎ,Ｅ－６４和ＥＤＴＡ对ｅ－ＰＡ的ＡＴＥＥ活性都有不同程度的抑制,这一点与ｅ－ＰＡ的ＢＡＥＥ活性不同．     

测定红豆杉悬浮细胞中多酚氧化酶活性的反应条件初探

多酚氧化酶 (ＰＰＯ)是导致红豆杉培养细胞褐变的主要因素 ,迄今这一问题尚未得到根本解决。本文初步探讨了不同ｐＨ值和温度 ,以及聚乙烯吡咯烷酮等 4种化合物对红豆杉悬浮培养细胞中ＰＰＯ活性的影响。红豆杉 (Ｔａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ)细胞来自华中理工大学生物工程系。称取 1ｇ细胞加入ｐＨ 6 .8的0 .0 5ｍｏｌ·Ｌ-1磷酸缓冲液中 ,在 4℃下研磨后 ,于 2℃低温离心 (1 5 0 0 0×ｇ) 2 0ｍｉｎ ,取 0 .1ｍｌ上清液 (粗酶液 ) ,以 0 .0 2ｍｏｌ·Ｌ-1邻苯二酚为底物 ,测定多酚氧化酶活性。酶活性以每ｍｉｎ光密度变化 0 .0 0 1为 1个…     

油葵的组织培养和试管内开花

1　植物名称　向日葵 (Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓａｎｎｕｓ)品种油葵 ,采自南宁市葵花世界游乐园。2　材料类别　种子胚 ,带芽茎段。3　培养条件　培养基 :( 1 ) 1 /2ＭＳ +ＮＡＡ 0 .2ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ;( 2 )ＭＳ + 6 ＢＡ 2 .0～ 5 .0 ;( 3)ＭＳ +ＫＴ 0 .2 +ＣＨ 2 0 0 ;( 4 )ＭＳ +ＫＴ 5～ 1 0。以上培养基均含 3%蔗糖 ,0 .5 %琼脂粉 ,ｐＨ 5 .8,培养温度为 2 5℃左右 ,光照 1 6ｈ·ｄ- 1 ,光照度 1 5 0 0ｌｘ。4　生长与分化情况4.1　无菌苗的培养　将油葵带芽茎段和去壳种子 ,以 75 %乙醇浸泡 30ｓ,再用 0 .1 %的ＨｇＣｌ2 灭菌…     

无花果曲霉原生质体形成与再生条件的探讨

根据正交试验得出无花果曲霉原生质体形成的最佳条件,用１％的混合酶液（０．５％纤维素酶＋０．２５％蜗牛酶＋０．２５％溶菌酶）作用无花果曲霉菌体细胞,原生质体产量达３．２×１０７个·ｍｌ－１,渗透压稳定剂为０．６ｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ于０．２ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＯ３＋４（ｐＨ５．８）中,酶解时间和酶解温度分别为３．０ｈ、３０℃．比较不同酶解时间、再生稳定剂和碳源等因素对原生质体再生的影响,可确定最佳再生条件,再生率达３０％以上．     

反胶束萃取血红蛋白的研究

研究了ＣＴＡＢ－正辛醇－正庚烷交束溶液萃取牛血红蛋白（ｐＨｂ）时、ｐＨ值、表面活性剂浓度、助表面活性剂浓度、离子种类和离子强度、溶剂比以及蛋白质浓度等因素对萃取效果的影响,并以蛋白质分子与表面活性剂分子间的相互作用以及反胶束大空间阻碍作用上进行了解释。研究表明,水相ＰＨ值在１０．５￣１２．５之间,ＫＣ１浓度为０．１ｍｏｌ／ｌ,反胶束溶液中表面活性剂浓度为０．０２ｍｏｌ／ｌ,正辛醇与正庚烷之比为０．     

快速显示血细胞及骨髓细胞DNA、RNA的方法

实验对传统的甲绿 派若宁法做了一定的改进 ,使染色时间缩短 ,步骤简化 ,效果良好。并对骨髓和脾造血细胞内ＤＮＡ、ＲＮＡ的定性和定量显示进行了一定的探讨。1.材料和方法1 1　材料 :派若宁Ｙ染液的配制 6%派若宁Ｙ(ＡＭＲＥＳＣＯ分装 ) 1ｍｌ,0 2Ｍ醋酸缓冲液(ｐＨ5 0 ) 8ｍｌ,蒸馏水 8ｍｌ ,优质甘油 1ｍｌ。此过程在磁力搅拌器上进行。 2 %甲绿用 0 1ＭＰＢＳｐＨ7 2溶液配制 ,经三氯甲烷洗脱去影响染色效果的甲紫成分 ,制得较纯的甲绿溶液。1 2　染色方法 :取小鼠股骨 (用ＲＰＭＩ 1640培养液将骨髓冲出 )和脾细胞 ,制成细胞悬液…     

疏水吸附性载体上附加基团对天冬氨酸酶性质的影响

６－氨基已酸和四乙烯基五胺通过高碘酸氧化法分别引入到邻甲苯胺基琼脂珠（ＴＡ）衍生物上,得到ＣＴＡ和ＡＴＡ,天冬氨酸酶在ｐＨ５．５,０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液中,０．５ｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ存在下通过疏水吸附固定化在ＴＡ,ＣＴＡ和ＡＴＡ上。结果表明三种固定化酶活力回收均达９０％以上,同ＴＡ－天冬氨酸酶相比,ＣＴＡ－酶,ＡＴＡ－酶的最适ｐＨ,ｐＨ稳定性等均有所改变,其中ＡＴＡ－酶的热稳定性,使用稳定性增强     

无花果蛋白酶在阴离子交换树脂上的固定化

无花果蛋白酶通过８％戊二醛活化载体,共价结合到聚苯乙烯阴离子交换树脂ＧＭ２０１上,固定化作用在ｐＨ７．７,酶浓度０．８ｍｇ／ｇ树脂,４℃下进行６ｈ。得到的固定化酶表观Ｋ_ｍ值（酪蛋白,１．１１×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ）小于溶液酶Ｋ_ｍ值（１．９６×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ）;固定化酶活性在ｐＨ６～８保持稳定,溶液酶最适ｐＨ为７．２;固定化酶最适温度由溶液酶的５０～６０℃移至３７℃;固定化酶２５℃保持７ｄ,重复水解酪蛋白７次后,保留８３．３％活性。固定化酶对酪蛋白水解度达４７．５％,对大豆球蛋白达１１．６％。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对K~＋刺激的小麦根质膜ATP酶活性、K~＋吸收、外渗及再分配的影响

１０－８ｍｏｌ／Ｌ的ＤＯＮ毒素加入小麦根质膜制剂中可促进Ｋ＋刺激的ＡＴＰ酶活力,１０－６ｍｏｌ／Ｌ开始呈抑制效应,抑制程度随ＤＯＮ浓度加大而提高。根尖（５ｃｍ）离体根段于０．５ｍｍｏｌ／Ｌ的ＫＣｌ中,１０－８ｍｏｌ／Ｌ的ＤＯＮ能促进根段Ｋ＋吸收,１０－６ｍｏｌ／Ｌ以上浓度则Ｋ＋吸收呈抑制,１０－２ｍｏｌ／Ｌ浓度下根段的净吸收为负值,表明组织中Ｋ＋大量外渗。根段置蒸馏水中６ｈ,４ｍｍｏｌ／Ｌ的ＤＯＮ即导致振段Ｋ＋渗漏。用ＤＯＮ处理整株小麦根,浓度在０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ以上可促进Ｋ＋从植株其它部位向根运输,而浓度在８ｍｍｏｌ／Ｌ时即抑制Ｋ＋向根富集,且根内Ｋ＋明显渗漏。     

中国Bt Ken－Ag最佳发酵培养基的优选及其发酵生理学研究

用正交试验方法选出ＢｔＫｅｎ－Ａｇ菌株的发酵培养基Ｍ３和ＦＢＨ２两个配方,其发酵液菌数可稳定的保持７０亿／ｍｌ,芽孢晶体形成率达８０－９０％,用ＦＢＨ２配方,对棉铃虫的毒力效价在２０００ＩＵ／μｌ以上。同时研究了在发酵培养基上的生长,ｐＨ变化、芽孢晶体形成以及糖、氮的代谢情况。     

藏马鸡卵壳的扫描电镜观察

利用扫描电镜对我国特有珍禽──藏马鸡的卵壳进行了超微结构观察。电镜下显示：藏马鸡卵壳从内向外由壳膜层、锥体层、海绵层和表层等组成。壳膜层内层致密、含少量纤维,外层为纵横交错成网状的纤维结构,锥体层由许多乳头状突起密集排列组成,海绵层为似沉积岩层的层状结构,表层在卵壳最外面,上由具保护性的透明蛋白质薄膜覆盖。与同属的褐马鸡的卵壳进行比较,其超微结构存在差异。     

PAS反应在显示真菌中的应用和体会

ＰＡＳ反应 (Ｐｅｒｏｄｉｃ Ａｃｉｄ Ｓｃｈｉｆｆｒｅａｅｔｉｏｎ)属于糖类的组织化学反应 ,它不仅在对糖原、粘蛋白、粘多糖及含碳水化合物的物质有特异性 ,而且对真菌的显示亦十分理想。现将ＰＡＳ显示真菌的体会予以介绍 :1、材料和方法1.ｌ材料选取外检中食道、胃、鼻腔、上颌窦、肺、皮肤、指 (趾 )甲等组织ＨＥ染色切片中疑有真菌感染者5 0例。重新切片。1.2　改良Ｓｃｈｉｆｆ试剂的配制 ,碱性品红 0 5ｇ加1ｍｏｌ/Ｌ盐酸 15ｍｌ,振荡使之溶解 ,再加 0 6 %偏重亚硫酸钠 85ｍｌ。紧盖瓶塞 ,振荡后在室温下放置 2 4ｈ ,溶液呈草…     

核桃的组织培养和快速繁殖

植物名称　薄壳香核桃 (Ｊｕｇｌａｎｓｒｅｇｉａｃｖ .“ｂｏｋｅｘｉａｎｇ”)。2　材料类别　 3～ 4年生嫁接苗。。3　培养条件　培养基 :( 1 ) 1 /2ＤＫＷ ＢＡ1～ 2ｍｇ·Ｌ-1(单位下同 ) ＩＢＡ 0 .0 1 Ｖｃ2～ 5 ;( 2 )ＤＫＷ ＢＡ2 ＮＡＡ0 .5 ＧＡ0 .5 ;(3)ＤＫＷ ＢＡ 1～ 2 ＩＢＡ 0 .0 1 ;( 4 ) 1 / 2ＤＫＷ ＩＢＡ 2 ＮＡＡ 2 ;( 5 )蛭石培养基。蔗糖浓度为 3.0 % ,琼脂浓度为 0 .6 %～ 0 .8% ,ｐＨ 5 .8,培养温度 ( 2 5± 2 )℃ ,每天光照1 2ｈ ,光照度 1 5 0 0～ 2 0 0 0ｌｘ。4　生长与分化情况4.1　芽的诱导…     

紫叶酢浆草的组织培养

1　植物名称　紫叶酢浆草 (Ｏｘａｌｉｓｖｉｏｌａｃｅａ)。2　材料类别　叶片、叶柄。3　培养条件　培养基有 :( 1 )ＭＳ ＮＡＡ 0 .5ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ;( 2 )ＭＳ ＩＢＡ 1 .0 ＮＡＡ 0 .5 ;( 3)ＭＳ ＩＢＡ 1 .0 ＮＡＡ 0 .5 ＫＴ 1 .0 ;( 4 )ＭＳ ＩＢＡ 0 .5 ＮＡＡ 0 .5 ＫＴ 1 .0。以上培养基含蔗糖 2 5 ｇ·Ｌ- 1 、琼脂 0 .5 %,ｐＨ 5 .8。培养温度为 2 2～ 2 5℃ ,照光 1 2ｈ·ｄ- 1 ,光照度为 2 0 0 0ｌｘ。4　生长与分化情况4.1　叶柄的分化情况　取盆栽紫叶酢浆草叶片与叶柄 ,流水洗净 ,用 70 %酒精浸洗 30ｓ…     

酵母基因组DNA的两个简易制备方法

酵母基因组ＤＮＡ的制备一般需要制作原生质体。我们基于丝状真菌的方法[1,2 ] 发展了 2个酵母基因组ＤＮＡ的制备程序 ,取得了良好的效果。1　材料与方法1.1　材料菌种　野生酿酒酵母菌种Ｇ1Ｍ 2 34为本中心周惠副教授惠赠。1.2　方法1.2 .1　酵母基因组ＤＮＡ制备方法　①方法 1:接种酵母菌种于无菌的 5 0ｍＬＹＰＤ或ＳＤ培养基 ,在30℃生长至对数生长晚期。滤液 4 0 0 0ｒ/ｍｉｎ离心10ｍｉｎ。菌体用液氮碾磨破壁。加 7ｍＬＤＮＡ缓冲液 (10 0ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ ＨＣｌ,ｐＨ 8.0 ,10ｍｍｏｌ/ＬＥＤ ＴＡ ,1%ＳＤＳ)。混匀 ,6 5℃保…     

蓝尾石龙子孵化期卵内物质和能量的利用

研究了安徽滁州蓝尾石龙子卵在温、湿度分别为 3 0℃、-1 2kPa的孵化条件下 ,胚胎对卵内物质和能量的利用。本研究蓝尾石龙子卵孵化期为 2 1 1d ,卵孵化时从基质中吸水导致重量增加。卵孵化过程中 ,干重、非极性脂肪和能量转化到孵出幼体的比率分别为 5 7 1 %、3 8 8%和 5 2 3 %。新生卵卵壳中5 0 %的灰分、5 9%的钙转移至孵出幼体中 ,胚胎发育所需要的无机物来自卵黄和卵壳。