枸杞生物技术研究进展

综述了国内外枸杞生物技术研究进展,包括了枸杞无性植株的再生、胚培养在育种中的应用;单倍体和多倍体,单细胞和原生质体培养技术;体细胞突变体筛选以及遗传转化再生植株的研究进展。     

烟草叶肉细胞原生质体培养成植株的研究

应用自制的纤维素酶从三个烟草品种的叶肉组织获得大量完整的有活力的原生质体,阐述了影响原生质体活力的某些因素。详细叙述了烟草原生质体的培养过程和方法,由于培养技术的改进,试验所用三个烟草品种的叶肉原生质体已经生长分裂形成愈伤组织,并分化成再生植株。此外,观察到“金星”的双倍体与单倍体叶肉原生质体在同一培养基上生长的差异。并对自制纤维素酶与日本纤维素酶(Onozuka)进行了比较。讨论了烟草原生质体从体积增大到细胞分裂形成愈伤组织过程中必须移贴的原因。     

烟草原生质体微滴培养及细胞早期分裂的定点观察

原生质体培养的常规技术是群体培养。而建立单个(或少数)原生质体培养技术则可以跟踪每一原生质体的动态变化与研究不同类型原生质体之间的相互关系,从而使有关的细胞生物学研究更加精确深入;还可以有选择地单独培养细胞融合体、突变体、转化细胞等遗传操作     

芸苔属植物幼嫩花粉原生质体分离、培养及花粉－体细胞原生质体的融合

芸苔属植物幼嫩花粉原生质体分离、培养及花粉－体细胞原生质体的融合李昌功,周嫦,杨弘远（武汉大学生命科学学院,植物生殖生物学研究室,武汉４３００７２）花粉原生质体兼具花粉、单倍体和原生质体三方面的特性,是花粉生物学与植物细胞工程中有特色的实验体系。迄今...     

激动素N-6-苄基腺嘌呤的简便制备方法

N-6-苄基腺嘌呤、N-6-呋喃甲基腺嘌呤及N-6-异戊烯腺嘌呤等都是激动素类物质,目前在植物原生质体的研究,细胞融合后愈伤组织的培养以及单倍体植株培养等方面都     

美味牛肝菌原生质体再生菌丝的新方式

食用菌原生质体的分离并培养成再生菌丝是研究食用菌细胞融合和基因转移的一项技术。有的文章已综述了有多种食用菌的原生质体已被分离,只有一些种的原生质体被培养成再生菌丝体,美味牛肝菌的原生质体虽已被分离但未培养成再生菌丝。食用菌原生质体可以通过不同方式再生菌丝体。Peberdy曾论述过有的真菌是由原生质体膨大生长成形态不正常的类似出芽链的细胞而再生菌丝的较为特殊的方式。本文报道美味牛肝菌原生质体通过一种新的生长方式而发育成菌丝体。     

马铃薯叶肉细胞再生植株研究初报

早在五十年代,人们就以消除病毒为目的进行马铃薯茎尖培养。六十年代,花药培养技术应用于作物育种,七十年代Y.Irikura等从野生马铃薯花药获得(2n=12)单倍体植株,J.F.Shapard,R.E.Totten等人通过马铃薯叶肉细胞原生质体培养获得了再生植株,P.     

运用生物技术开展水稻育种

近年来,许多学者报道水稻原生质体培养成功并获得其再生植株。这一成就必然打破水稻育种与发展中的生物技术之间的隔墙。本文将介绍这些技术是如何发展的,以及这些技术将如何有助于推动水稻育种。水稻原生质体培养和植株再生许多学者用培养的水稻细胞,能容易地分离得到原生质体,并成功地使分离的原生质体经培养、壁再生、细胞分裂而再生成植株。在此研究中,用于分离原生质体的愈伤组织或悬浮细胞的质量极为重要,因为水稻原生质体的分离和培养     

棉花组织培养研究的现状和前景

对棉花组织培养中胚珠（幼）培养和杂种植株获得,体细胞无性系变异和抗性突变体筛选,花药培养和单倍体育种,体细胞胚发生和人工种子的制作,离体棉纤维诱导和超级棉生产,原生质体培养和植株再生等研究进展,问题和前景作了概述。     

超甜玉米原生质体培养和植株再生

以商用超甜玉米(SS7700)的单倍性悬浮细胞培养物为材料游离的原生质体,经培养再生成完整植株并移栽成活。用悬浮细胞作为滋养物比对照提高植板率130倍以上。有机附加物丰富的培养基比简单培养基植板率要高。孔径在0.22—8.0μm 的硝酸纤维素或醋酸纤维素滤膜作为支持膜,对原生质体培养都是合适的。和原生质体亲缘关系越近的物种作为滋养细胞的效果越好。在检查过的11植由原生质体再生的植株中,10株为单倍体,1株为二倍体。     

高效甘蔗黑穗病菌原生质体的制备

原生质体质量是丝状真菌遗传转化成功的关键。本研究以甘蔗黑穗病菌为试验材料,对其原生质制备和再生的条件进行研究。结果表明,将甘蔗黑穗病菌单倍体菌株JG36摇床培养24 h,然后加入5 mg/m L溶壁酶、30 mg/m L纤维素酶和30 mg/m L蜗牛酶的混合酶液,28℃160 r/min摇床上酶解3 h。1.2 M/L Mg SO_4作为原生质体制备时的渗透压稳定剂。在此条件下,制备原生质体得率最高达86.86%,原生质体再生率达到63.26%。     

高产谷胱甘肽的酵母融合菌株的选育及其培养条件的研究

通过初筛、单倍体分离、诱变及原生质体融合技术选育到一株谷胱甘肽产量明显提高的融合菌株ZJF71,其谷胱甘肽产量分别为亲株的1.59和1.42倍。并对其培养条件进行了研究,结果表明碳源、装液量和培养时间对融合菌株ZJF71生产谷胱甘肽的影响较为显著。在优化的培养条件下,发酵液中谷胱甘肽总量达到185.3mg/L,为初始培养条件下的2.8倍。经遗传稳定性分析,证明融合菌株ZJF-71是遗传稳定的。     

石竹科植物组织培养与细胞工程

近年来,植物组织培养与细胞工程研究在石竹科植物上取得了一定进展。现从组织培养、原生质体培养和体细胞杂交、单倍体育种、试管开花、转基因等5个方面对其进行综述,并展望了石竹科植物在组织培养和细胞工程研究方面的发展前景。     

啤酒酵母菌的细胞融合

啤酒多倍体酵母菌原生质体已成功地与单倍体原生质体进行融合。经细胞壁再生后,稳定的融合重组体被分离出来。这些融合体的基因分析表明,融合体中含有双亲的基因型。孢子形成良好,且每个子囊中含有四个孢子,每个孢子确实是二倍体。这样原生质体融合就提供了一个对啤酒酿造酵母进行遗传分析的方法。但是如果没有一个方便的杂交技术,这个方法将是很困难的。     

被子植物配子-体细胞杂交研究的进展与展望

Pental和Power于1985年提出用植物的单倍体原生质体,与二倍体体细胞原生质体融合产生三倍体植株,以用于限量基因转移研究的设想"'。次年粘毛烟草（Nicotianaglutinosa川、抱子四分体原生质体与烟草（N．tatacum）的体细胞原生质体融合,就成功地得到了三倍体杂种植株,并被称     

向日葵未受精胚珠培养再生植株

迄今,有关向日葵离体雌核发育的研究,仅蔡得田与周嫦(1983)、Gelebart与San(1987)由未传粉子房培养分别得到单倍体小苗和植株,而在未受精胚珠培养方面,阎华等对诱导胚状体形成的因素作了大规模研究,但未继续研究其植株再生问题。我们在上述基础上,经过三次重复实验,建立了向日葵未受精胚珠培养再生单倍体植株的技术流程,使其进一步用于育种及细胞工程成为可能。     

用细胞融合的方法选育耐高酒精度的酿酒酵母

选择耐高渗透压、耐高酒精度和发酵终了产酒精量较高的黄酒酵母H—1和目前酒精工业生产用菌K号酒精酵母K—1,运用细胞融合技术选育发酵速度快、产酒精量高的工业用酒精酵母.双倍体黄酒酵母H—1和双倍酒精酵母K—1经过产孢前预培养和产孢培养后,蜗牛酶水解子囊孢子壁,离心收集单倍体子囊孢子,培养后得到单倍体黄酒酵母H—2和单倍体酒精酵母K—2.用硫酸二乙醇诱变处理单倍体细胞,得到单倍体黄酒酵母的维生素缺陷型H—3和单倍体酒精酵母的氨塞骏营养缺陷型K—3通过正交试验找出了H—3和K—3原生质体形成及再生的较优条件是:对数生长后期的细胞33℃、0.2%的β—巯基乙醇预处理15分钟,然后4%蜗牛酶作用2小时.用35%聚乙二醇和10mMCaC1_2诱导融合40分钟,于再生基本夹层培养基上培养获得营养互补融合子,并且考查了融合子的遗传稳定性.通过耐酒精度、一发酵速度和最终产酒精量的测定,筛选出融合子HK—6.HK—6与生产用K号酒精酵母相比,发酵速度相接近,而最终产酒精量提高了11%.可耐受16%的酒精度.     

电场诱导营养缺陷型酵母原生质体的融合

本文以酿酒酵母营养缺陷型单倍体菌株; Jz-25,a,ura。和Jz-22,a,trp’ade一的原生质体为材料,采用改进的大尺寸电融合小池,以频率为1MHz,强度为450V／cm的正弦交变电场作电介质电泳,使原生质体沿电力线方向排列成串,建立起质膜间的紧密接触;接着以高强度4．5kv／cm、短时程40μs的Rc放电脉冲触发并列质膜的可逆电击穿,引起膜的通透性瞬时增大,从而导致原生质体的融合．为了进一步增大从电极间取出的融合体数目,而克服由于增高交变电场引起的使溶液过热的副作用,实验中还设计了以PEG聚集原生质体后,加高强度7．0kv／cm短时程45μs的可逆电击穿脉冲触发融合的程序。实验结果表明;上述两种电融合程序的融台频率都要比以相同材料所作的纯PEG对照实验的融合频率有所提高。通过对融合产物作交配型检验和测量细胞的尺寸,初步可以证明融合子在质融后已发生核配,产生出二倍体菌株。看来细胞电融台方法可成为一种实际应用的技术。     

食品上的应用

乳链球菌广泛应用于乳品和其他食品发酵,因此人们有兴趣用重组 DNA 技术进行菌株改良。采用原生质体融合使乳链球菌(Streptococcus lactis)和枯草芽孢杆菌(Baccllus subtilis)之间进行质粒的基因间转移。细胞分别在 M17-glc 或 LB 肉汁中培养,然后收获,并悬浮于 SMMP 和 SMM-M17-glc中。利用40%聚乙二醇6000在SMM 中进行原生质体融合。进行了原生质体再生的选择。通过原生质体同枯草芽孢杆     

麦角固醇高产菌株的构建及其培养优化条件的研究

通过初筛、单倍体分离、诱变及酵母菌种间原生质体融合技术构建了2株麦角固醇产量明显提高的优良菌株YEF-21和YEF-29。并对YEF-21的培养优化条件进行了研究。结果表明在优化的实验条件下YEF-21的生物量及麦角固醇含量的综合值分别为原始亲株YE227和YE180的1.54和1.55倍。经遗传稳定性分析,没有发现标记基因的分离现象,从而证明获得的融合菌株是遗传稳定的,是具有一定实际应用价值的麦角固醇高产菌株。