从凝胶中回收DNA

引言 琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺电泳技术目前得到了广泛的应用。它们按分子大小分离DNA分子,具有很高的分辨率。从混合物中分离单一种类DNA分子,凝胶电泳既可用于分析又可用作制备。用于制备时一个主要问题是如何从一含DNA的胶带中得到较高的DNA回收率而避免凝胶介质污染。本文拟对回收的方法学作一概述。     

琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术检测小麦基因组DNA RAPD扩增产物的方法学比较

通过20%(wv)的琼脂糖凝胶和5%(wv)的聚丙烯酰胺凝胶电泳对小麦白粉病抗、感特性品种基因组DNA的RAPD检测结果表明:5%聚丙烯酰胺凝胶对线性DNA分子(01～20kb)和长度相差100bp以下的DNA分子的分离较20%的琼脂糖凝胶电泳效果好。因此,我们研究出了一项利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测小麦白粉病抗、感特性的新技术,在工作中建立了一种适合于检测小麦基因组DNA结构差异的电泳方法。该方法主要包括:(1)丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺的新配比;(2)分离DNA片段的最佳凝胶浓度;(3)电泳条件;(4)脱色、漂洗、银染、显色过程。实验发现,该技术对于小麦白粉病抗、感特性检测中的小片段和长度相差100bp以下的线性DNAPCR扩增结果的分辨效果较好。应用该技术在抗感品种间已经发现了DNA水平上的差异。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳

电泳是分离混合物中离子成分的最有效方法之一。以聚丙烯酰胺凝胶作支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳。这种电泳方法分辨率高,灵敏度大,重复性强,并且操作简便,因此广泛应用于分子生物学,生物化学,细胞学,免疫学,酶学等学科的研究,近年来在微生物分类上的应用也逐渐引起人们的注意。例如1968年     

辽宁产东亚钳蝎(Buthus martensii Karshi)毒两种毒素的纯化及其部分性质的研究

用CM-Sephadex C-50分离辽宁产东亚钳蝎毒得到十二个蛋白组份,对其中的第八组份进行了CM-Sephadex C-50重层析和Sephadex G-50凝胶过滤,最后得到两种纯化的毒素。应用低pH系统不连续聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳、SDS-不连续聚丙烯酰胺凝胶板状电泳及等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳鉴定均为单一条带。二者的分子量和等电点分别为8,980,8,660和7.58,7.90。还测定了粗毒对小白鼠的LD50(腹腔注射)、有关酶活力和毒素I的氨基酸组成。 试验结果还表明,用13％胶浓度的SDS-不连续聚丙烯酰胺凝胶板状电泳测定小于10,000道尔顿的蛋白质的分子量,可以获得较为满意的结果。     

我国不同地区东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch)毒在三种类型电泳中的比较研究

用SDS—不连续聚丙烯酰胺凝胶板电泳、pH4.5—不连续聚丙烯酰胺凝胶板电泳和聚丙烯酰胺凝胶圆盘等电聚焦电泳,分离我国不同地区东亚钳蝎毒。其图谱表明:不同产地的东亚钳蝎毒蛋白的种类及含量存在一定的差异,地区相近,差异较小,反之亦然。     

PAGE技术对韭菜ISSR-PCR产物指纹检测效果的影响

PAGE技术是以聚丙烯酰胺凝胶作为载体的一种区带电泳检测技术,包括控制聚丙烯酰胺凝胶浓度、聚合速度、均匀度、着色度、干净度和凝胶漂移等技术环节。在分析各技术环节影响因素的基础上,系统地总结了各技术环节对韭菜ISSR扩增产物电泳指纹检测效果的影响。     

我国不同地区东亚钳蝎（Buthus martensii Karsch）毒在三种…

用ＳＤＳ－不连续聚丙烯酰胺凝胶板电泳、ｐＨ４．５－不连续聚丙烯酰胺凝胶板电泳和聚丙烯酰胺凝胶圆盘等电聚焦电泳,分离我国不同地区东亚钳蝎毒。其图谱表明：不同产地的东亚钳蝎毒蛋白的种类及含量存在一定的差异,地区相近,差异较小,反之亦然。     

微量聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳

聚丙烯酰胺凝胶作为电泳分离的支持物于1959年首次得到应用,而聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳则是于1964年发展起来的。同年在分离脑蛋白时,首先应用了微量聚丙烯酰胺凝胶电泳。1965年有人将毛细管用于微量盘状电泳技术并报道了毫微克(ng)蛋白的分离及定量。     

绿豆淀粉胶电泳在同功酶研究中的应用——关于淀粉胶电泳方法的改进

淀粉胶电泳是一种以淀粉凝胶作为介质的电泳方法。这种方法自1955年由Smithies首创以来,已普遍用于蛋白质化学的研究,特别是在同功酶的研究中使用较多。淀粉胶电泳的主要优点在于它的系统简便和无毒性。淀粉凝胶中葡萄糖残基所构成的三维网状结构虽不如聚丙烯酰胺凝胶那样均匀一     

以噬菌体作为配基的一种新型亲和材料的制备方法研究

目的:针对亲和层析材料制备困难的问题,本文拟研究以聚丙烯酰胺冷凝胶为基质,以噬菌体展示多肽为配基制备亲和材料方法的可行性.方法:以低温聚合制备的聚丙烯酰胺冷凝胶作为基质,将筛选噬菌体展示人肝脏cDNA文库获得的噬菌体作为配基,通过两种不同的化学键合方法键合于凝胶表面,制备亲和材料.通过高效液相色谱法(HPLC)分析此亲和材料对药物分子是否具有亲和能力.结果:聚丙烯酰胺冷凝胶具有较大的孔径及良好的亲水性,适用于生物大分子如噬菌体的键合,键合特异噬菌体展示多肽的凝胶材料与键合未筛选噬菌体文库的亲和材料比较,对药物分子具有明显的高亲和力.结论:以展示特异多肽的噬菌体为亲和配基,以聚丙烯酰胺冷凝胶为基质,通过化学键和方法制备亲和材料是具有可行性的,此种亲和材料在生物分子纯化特别是药物分析纯化、蛋白质分离纯化以及细胞分离分析等方面将具有一定的应用前景.     

一种检测聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质免疫活性的方法

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)已成为最有效的分离蛋白质手段。在免疫学研究中,经常遇到的问题是从聚丙烯酰胺凝胶中回收被分开的蛋白质组分,然后测其免疫活性。从聚丙烯酰胺凝胶中回收蛋白质的方法已有许多报道,其中以Hartvig的方法为最简便。该法以溴酚蓝为指示剂,利用电泳系统本身使     

植物组织中蛋白质及同功酶的聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳

聚丙烯酰胺凝胶电泳是鉴定蛋白质、酶的有力工具,是生物化学研究上不可缺少的实验技术。聚丙烯酰胺凝胶是一种合成的凝胶,是由丙烯酰胺单体和交联剂甲义丙烯酰胺在催化剂的作用下聚合而成的大分子。不同的甲义丙烯酰胺在和丙烯酰胺浓度可制成孔径不同大小的电泳基质。电泳时蛋白质混     

直立平板式连续浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶具有化学稳定性,透明度高,聚合体孔径可控制等性质,以及不存在非特异吸附和电渗作用等,因此聚丙烯酰胺凝胶电泳在分子生物学、生物化学、临床化学等学科的分析或分离方法中愈来愈占有重要地位。自Ornstein及Davis首先介绍了聚丙烯酰胺电泳法以来,无论在理论的深度和应用的广度上都有较大的发展,国内外均有专著。本文仅讨论直立平板式连续浓度梯度电泳,它的主要优点是分辨率高,同时由于在同一块凝胶板上可进行几个样品的电泳更便于比较和辨认,并可为进行双相电泳、分子量测定或制备电泳提供基础。     

沙冬青cDNA-AFLP银染和条带回收方法分析

通过比较而获得沙冬青cDNA-AFLP银染和条带回收的最佳方法.银染时采取Bassam法和Sanguinetti法,凝胶条带回收时利用直接回收法、试剂盒法、LiCl高盐法和聚丙烯酰胺凝胶高效回收法.比较不同方法对于开展聚丙烯酰胺凝胶电泳的影响.采用Bassam银染法对获得的扩增产物进行染色后无法得到差异显示条带,而利用Sanguinetti银染法显色后可观察到比较明显的差异表达条带;以直接回收法、PAGE试剂盒法、LiCl高盐法对差异条带进行回收后,二次PCR无法得到扩增产物,采用聚丙烯酰胺凝胶高效回收法后则可获得比较清晰的二次扩增产物.Sanguinetti银染法和聚丙烯酰胺凝胶高效回收法是应用于本研究的最佳方法.     

聚丙烯酰胺凝胶电泳脂蛋白带的耐尔氏蓝染色法

目前聚丙烯酰胺凝胶电泳用考马斯亮蓝G或R染蛋白带、用过碘酸-Schiff试剂染糖蛋白带,均取得了满意的结果.至于用油红(OR)、苏丹黑(SB)对琼脂、醋酸纤维膜等凝胶中的脂蛋白带的染色鉴定是成功的,但对聚丙烯酰胺凝胶中的脂蛋白带的染色则不够满意.我们应用耐尔氏蓝[Nile’s blue] 染色法染盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的脂蛋白带取得了较好的结果.现介绍如下:     

电泳用水平聚丙烯酰胺干胶研制成功

聚丙烯酰胺凝胶电泳是快速低廉的生化分析技术。由于凝胶具有三维网状结构,电泳时兼具有分子筛效应和电荷效应,从而比其他电泳的分辨力大为提高,并在此基础上又发展了ＳＤＳ聚丙烯酰胺电泳、梯度胶电泳和等电聚焦聚丙烯酰胺电泳等技术。除大量用于各种蛋白质分析、分型...     

一种新的制备酸性聚丙烯酰胺凝胶的引发系统

一种新的制备酸性聚丙烯酰胺凝胶的引发系统孙新立＊孙海虹王友爱（河北师范大学生物系,石家庄０５００１６）关键词引发系统;转化率;聚合;酸性凝胶;成胶时间碱性聚丙烯酰胺凝胶电泳已经广泛应用于生化分析的各个领域。但酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳、过硫酸铵（ＡＰ）－...     

改良聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA

本文介绍了应用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA的改进方法。与以往方法相比,本方法从配制凝胶储备液,无需封口的水平灌胶,适当地提高电泳的电压梯度,采用改良银染法检测,省却凝胶固定,银染法DNA的纯化方法,及溴化乙锭染色法的操作等一系列改进措施,使聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA的操作得到简化,更便捷,并减小了对人与环境的毒害作用。     

用壳聚糖作为配基载体亲和层析提纯淀粉糖化酶的研究

以自制的壳聚糖作配基载体,植物血球凝集素(PHA)作配基,通过戊二醛交联研制成一种用于淀粉糖化酶提纯的新型亲和吸附剂。对淀粉糖化酶的亲和层析研究表明:提纯倍数为1.8,酶活性收率达80％,纯度经聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳(IEF-PAGE)鉴定为一条带,没有非特异性吸附作用。具有简单、安全、快速和高收率等优点。     

医药其它

961825 利用聚丙烯酰胺琼脂糖复合凝胶和无本底银染法的高分辨率SSCP分析[英]/Peng,H.…//BioTechniques.-1995,19(3).-410～414[译自DBA,1995,14(23),96-13803] 用聚丙烯酰胺琼脂糖复合凝胶(5％丙烯酰胺和