二酰基甘油调控细胞功能的机制

二酰基甘油(DG)是一些磷脂水解产生的一种有重要功能的第二信使,它主要通过激活细胞内的蛋白激酶C(PKC)进而磷酸化一系列底物蛋白,产生相应的细胞效应．在细胞整体水平,DG还是一种重要的脂类物质的代谢中介产物,通过若干代谢途径参与脂类和激素代谢循环,目前,有关DG调控细胞生理功能的研究,主要集中在细胞信号转导方面．     

苹果和葡萄果实发育过程中蛋白激酶特性的比较研究

在苹果 (MalusdomesticaL .Borkh .cv .RedStarking)和葡萄 (VitisviniferaL .×V .lubruscaL .cv .Kyoho)的不同发育阶段均检测到蛋白激酶活性 ,它们可被Ca2 强烈激活 ,表明依赖钙的蛋白激酶是苹果和葡萄果实中一类非常重要的蛋白激酶。钙调素 (CaM)对苹果和葡萄果实蛋白激酶没有激活作用 ,同时CaM拮抗剂calmidazolium、W7及三氟乙酸 (TFA)均可不同程度地抑制其活性 ,表明依赖钙的蛋白激酶中可能有含类似钙调素结构域的蛋白激酶(CDPK)的存在。在苹果和葡萄果实发育中 ,依赖钙的蛋白激酶无论在其活性变化还是特性上都存在着显著差异 :苹果果实发育的不同阶段依赖钙的蛋白激酶活性无明显变化 ,而葡萄果实在发育的第Ⅱ期蛋白激酶活性大大高于第Ⅰ、Ⅲ期 ;苹果果实依赖钙的蛋白激酶可被Mn2 强烈激活并对热敏感 ,而葡萄果实依赖钙的蛋白激酶却不受Mn2 及热处理的影响 ;此外 ,葡萄果实蛋白激酶活性不受磷脂酰丝氨酸 (PS)的影响 ,而苹果果实蛋白激酶可被PS激活 ,表明苹果果实中还可能有钙和磷脂激活的蛋白激酶即PKC的存在。苹果和葡萄果实发育中蛋白激酶种类、特性及其活性变化的不同 ,暗示了这两种果实发育调控的差异 ,也意味着苹果和葡萄果实发育调控可能与蛋白激酶密切相关。     

肿瘤酶学的研究现状及展望

近年来,关于酶在细胞癌变中所起的作用以及酶与癌基因产物的关系在国内外是十分重要的课题。从细胞增殖和癌变中酶的作用方面来考察,有两种重要的信息传递系统引人注目。一类是通过Ca~(++)和肌醇—1、4、5—三磷酸(IP_3)作为第二信使的系统;另一类是通过蛋白质的酪氨酸残基磷酸化进而引起细胞内反应的系统。参与第二信使系统的酶以蛋白激酶—C为代表,参与酪氨酸残基磷酸化系统的酶是酪氨酸(蛋白)激酶。蛋白激酶—C (一)蛋白激酶—C的激活蛋白激酶—C是存在于细胞液中的丝氨酸蛋白磷酸化酶。它被激活后则转移到膜上而起     

苹果和葡萄果实蛋白激酶特性分析

以组蛋白Ⅲ S作苹果和葡萄果肉蛋白激酶制剂底物时 ,反应体系中加EGTA可抑制蛋白激酶活性 ,而加Ca2 可激活蛋白激酶的活性 ,表明苹果和葡萄果实中有依赖钙的蛋白激酶存在。而且 ,葡萄果实微粒体蛋白激酶呈热稳定性 ,苹果果实微粒体蛋白激酶对热敏感。以髓鞘碱性蛋白 (MBP)作底物 ,在苹果和葡萄果实微粒体中都检测出很高的蛋白激酶活性 ,并且不依赖于钙 ,说明苹果和葡萄果实中可能有分裂原激活的蛋白激酶 (MAP激酶 )的存在。苹果和葡萄果实MAP激酶的活性都表现出对二价阳离子Mg2 或Mn2 的依赖 ,并对高温处理表现出了激活效应     

6_m2细胞转化与肌醇磷脂代谢相关性研究

肌醇磷脂代谢与V-mos癌基因转化细胞的相关性,迄今为止未见报导。本文用6m2细胞(Moloney鼠类肉瘤病毒(含V-mos)温度敏感突变株(MoMuSVts110)转化的NRK细胞)为模型,探讨了肌醇磷脂代谢与细胞转化的相关性。在33℃ (转化型温度)时,细胞内PIP(磷脂酰肌醇-4-磷酸)含量明显高于39℃(正常型温度),显示出转化型6m2细胞中存在一个提高的PI激酶活性。同时可见DG(二酰甘油)和IP_3(肌醇三磷酸)含量和蛋白激酶C(PKC)活性均明显高于正常型细胞。当细胞由39℃转至33℃10min,PIP、DG、IP_3含量和PKC活性均明显增加,并伴随有PKC活性由胞质向质膜上的转移。实验结果表明肌醇磷脂代谢参与了6m2细胞转化过程。文中对其作用机理进行了讨论。     

大鼠脑甘油二酯激酶的活性及其抑制物的研究

<正> 甘油二酯激酶(diacylglycerol kinase,DGK)广泛的存在于动物组织。它在消耗ATP情况下能使甘油二酯(diacylglycerol,DG)转变成磷脂酸(PA),PA再经磷脂酶A_2作用,水解成花生四烯酸,后者是前列腺素合成的原料。 目前已公认DG为第二信使,DG存在于细胞膜上,能特异地激活蛋白激酶C(protein     

3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1激活AGC家族激酶的机制研究进展

3磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(3phosphoinositidedependentproteinkinase1,PDK1PDPK1)是蛋白激酶B(proteinkinaseB,PKBCAKT)的上游激酶,通过与3,4,5三磷酸磷脂酰肌醇[PtdIns(3,4,5)P3]作用激活相邻的PKB分子.同时,PDK1被称为AGC激酶的掌管者(master),能够激活包含PKB在内的一系列的AGC激酶家族成员.PDK1磷酸化这些激酶的保守区域Tloop区,使它们充分激活,从而调节细胞代谢,生长,扩散,生存,抗凋亡等诸多生理过程.本文就PDK1调节AGC激酶的活性,与功能上命名的PDK2的关系,PDK1分子自身的调节,PH结构域对自身活性及AGC激酶活性的影响,PDK1定位以及作为一个新药物靶标等方面做了综述.     

蛋白激酶Cδ的克隆表达纯化及其在药物先导化合物筛选中的初步应用

蛋白激酶C家族是一类磷脂酰丝氨酸依赖丝氨酸 苏氨酸蛋白激酶。PKCδ(蛋白激酶Cδ)是蛋白激酶C家族成员。PKCδ的异常激活将会导致糖尿病和多种癌症的发生 ,因此 ,PKCδ的特异性抑制剂能成为治疗这些疾病的潜在药物 ,如能以PKCδ为分子靶点来筛选特异性抑制剂 ,就可以建立癌症及糖尿病的药物先导化合物筛选模型。通过RT-PCR的方法 ,克隆了鼠源的PKCδ,并构建了哺乳动物细胞表达载体 ,获得了可稳定表达PKCδ的COS1细胞株。通过亲和吸附的方法获得了较为纯净的PKCδ ,并对酶学活性作了进一步的分析 ,建立了以PKCδ为靶点的药物先导化合物筛选模型。     

盐胁迫对玉米根尖质膜上受钙激活的蛋白激酶的影响

以02mal／L的NaCl对玉米根尖进行盐胁迫,导致质膜上一种受钙激活的蛋白激酶（该激酶表现为钙依赖蛋白激酶的特性）的活性迅速增加。盐胁迫至15min时激酶的活性达到最大,较对照高30％,以后逐渐降低,盐胁迫至切50min时激酶活性仍略高于对照。10％PEG6000处理玉米很尖也可诱导质膜上受钙激活的蛋白激酶活性增加。用外源ABA处理玉米根尖,未导致上述蛋白激酶活性的变化。放射自显影显示质膜上33kD和58kD两种蛋白可能是质膜受钙激活的蛋白激酶的内源底物。     

多功能的钙/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ介导的细胞信号传导

钙调素(Calmodulin,CaM)是一个特别的对钙敏感的蛋白,在钙信号传导通路中扮演重要角色钙/钙调素依赖性蛋白激酶(Calcium/calmodulin-dependent kinases(CaMKs))与荷尔蒙、神经递质及其他信号引起的细胞反应相关作为重要的第二信使,钙/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaM-KⅡ)是一类在细胞中无所不在的表达的蛋白激酶,能维持细胞内的钙浓度在很低的水平,再增加后续的特定的钙激动刺激.钙/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ独特的全酶结构和自我调节的性质使其对短暂的钙信号和胞内钙的变化能做出延长反应.本文从结构、合成、细胞分布、反应底物、生理功能等方面介绍了钙/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ的激活对细胞信号传导的作用.     

生理性胰岛素释放需要蛋白激酶C吗?

近年来,关于生理性胰岛素释放是否与β细胞上蛋白激酶 C 被激活有关的问题,受到注目。一些研究表明,Ca~(2+)依赖性蛋白激酶 C 或磷脂依赖性蛋白激酶 C(作为单独酶或有关酶族)存在于啮齿类动物的β细胞上。蛋白激酶 C(PKC)可由内源性二酰基甘油或花生四烯酸激活;也可由外源性12-0-tetradecanoylphor-bol-13-acetate(TPA)、欧瑞香脂激活。其机制可能为分泌颗粒或细胞支架上关键蛋白质磷酸化,使 Ca~(2+)的细胞外装置被致敏。对蛋白激酶 C 非特异性抑制剂的研究发现,多粘菌素 B、三氟吡啦嗪和抗霉素 A 不仅抑制蛋白激酶 C     

蛋白激酶B的PH结构域可溶性表达与纯化及其二级结构分析

蛋白激酶B(亦称为Akt)是一种蛋白质丝氨酸 苏氨酸激酶 ,因其与蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)具有相对高的同源性 ,而被命名为PKB .作为磷脂酰肌醇 3激酶 (PI3 kinase)的下游分子 ,它广泛参与细胞各种功能的调节 .PKB对代谢的影响主要表现为促进蛋白质的合成 ,促进糖原的转运[1] .同时 ,PKB还在细胞增殖与调控中发挥重要作用[2 ] .PH结构域 (pleckstrinhomologydomain)是一种存在于多种信号蛋白质和细胞骨架相关蛋白质中的功能性区域 .它通常由 7个反向平行的 β片层和C末端的一个α螺旋构成 .PH结构域的配体具有一定的多样性…     

多功能的钙／钙调素依赖的蛋白激酶II介导的细胞信号传导

钙调素（Calmodulin,CaM）是一个特别的对钙敏感的蛋白,在钙信号传导通路中扮演重要角色钙／钙调素依赖性蛋白激酶（Calcium／calmodulin-dependent kinases（CaMKs））与荷尔蒙、神经迷质及其他信号引起的细胞反应相关、作为重要的第二信使,钙／钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ（CaM—KⅡ）是一类在细咆中无所不在的表达的蛋白激酶,能维持细胞内的钙浓度在很低的水平,再增加后续的特定的钙激动刺激。钙／钙调素依赖的簧白激酶Ⅱ独特的全酶结构和自我调节的性质使其对短暂的钙信号和胞内钙的变化能做出延长反应：本文从结构、合成、细胞分布、反应底物、生理功能等方面介绍了钙／钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ的激活对细胞信号传导的作用。     

玉米根尖质膜的受钙激活蛋白激酶的特性

以生长3－4d的玉米（ZeamaysL．）根尖为材料,用两相法得到高纯度的质膜,鉴定了质膜上存在一受钙激活的蛋白激酶。该类激酶主要位于质膜内侧;钙的半激活浓度为50μmol／L;外源钙调素对激酶没有明显的活化作用;钙调素拮抗剂三氟拉嗪（TFP）可明显抑制激酶活性,半抑制浓度为75μmol／L;该类激酶对外源底物组蛋白ⅢS型有较高的特异性。结果显示此激酶属于钙依赖钙调素不依赖蛋白激酶。质膜上33kD和58kD两种蛋白可能是这种钙依赖蛋白激酶的内源底物。     

苹果和葡萄果实蛋白激酶特性分析

以组蛋白Ⅲ－Ｓ作苹果和葡萄果肉蛋白激酶制剂底物时,反应体系中加ＥＧＴＡ可抑制蛋白激激酶活性,而加Ｃａ＾２＋可激活蛋白激酶的活性,而且,葡萄果实微粒体蛋白激酶钙的蛋白激酶存在。而且,葡萄果实微粒体蛋白激酶呈热稳定性,苹果果实微粒体蛋白激酶对热敏感。以髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）作底物,在苹果和葡萄果实微粒体中都检测出很高的蛋白酶活性,并且不依赖于钙,说明苹果和葡萄果实中可能有分裂原激活的蛋白激酶（ＭＡＰ激     

诱发大鼠肝癌早期病变中蛋白激酶和磷脂的变化

<正> 近年来发现蛋白激酶不但参与细胞的代谢调节,还与细胞的增殖和分化密切相关。除酪氨酸蛋白激酶是某些癌基因的表达产物外,钙-磷脂依赖性蛋白激酶(又称蛋白激酶C,PK-C)是促癌剂TPA(12-O-tetradecanoyl-phorbol-13-aeetatc)的受体。作者在前文中曾报导:分化诱导剂视黄酸可使人肝癌细胞株SMMC-7721中蛋白激酶C的活力明显降低;而蛋白激酶A(cAMP依赖性蛋白激酶,PKA)则明显增加。本文研究化学诱发大鼠肝癌早期病变中这两种蛋白激酶的变化,观察有无和视黄酸处理时相反的改变。为了证实诱癌是否成     

蛋白激酶C研究的最新进展

作为能使蛋白激酶C(PKC)活化的第二信使甘油二酯(DAG)不仅可由磷脂酰肌醇(PtdIns)水解产生,大量实验表明还可从磷脂酰胆碱(PC)水解而来,其中磷脂酶C(PLC)及磷脂酶D(PLD)参与了这一过程,磷脂酶A₂(PLA₂)的作用产物脂肪酸(FA)也能激活PKC.PKC至少有10种亚型,依据其活化方式可分三大类:典型PKC,新PKC和非典型PKC.PKC参与了基因表达的调控.     

肠管平滑肌中Ca~(2+)活化、磷脂依存性蛋白激酶与肌醇磷脂代谢的关系

在大白鼠肠管平滑肌中发现了被Ca~(++)所活化、磷脂依存性蛋白激酶(以下简称C-激酶)。此酶存在于细胞的可溶性部分,通常为无活性型,可被Ca~(++)、磷脂和含不饱和脂肪酸的甘油二酯活化。这种活化机制是可逆的。在各种磷脂中磷脂酰丝氨酸最有效。含不饱和脂肪酸的甘油二酯可增加酶的反应速度。C-激酶的活性还可被异博停、地布卡因、丁卡因等能与磷脂结合的药物所抑制。     

NOK与Akt相互作用并增强Akt的活化

NOK是一个新近鉴定的受体型蛋白酪氨酸激酶分子,它能够促进肿瘤的形成和转移.前期的研究表明,NOK在小鼠前B细胞(BaF3)中能够激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路.但是,人们并不清楚NOK在细胞内是如何激活PI3K信号通路的.研究发现,NOK与PI3K下游的效应分子蛋白激酶B(Akt)具有直接的相互作用.并且,在人胚肾细胞(HEK293T)中,NOK能明显增强Akt的活性.通过NOK缺失突变体的免疫共沉淀实验,确定了Akt能直接结合NOK的激酶结构域.同时,Akt的激酶活性缺失体并不影响其与NOK的结合,但也观察到,持续活化的Akt跟NOK具有更强的相互作用.最后,发现NOK对胰岛素介导的Akt激活并没有产生叠加效应.实验结果显示,NOK可以与Akt直接相互作用并增强PI3K/Akt信号通路的活化.     

膜联蛋白A1在恶性肿瘤中的研究进展

膜联蛋Al(Annexin Al,Anx Al)是一类细胞中广泛存在的钙磷脂结合蛋白,具有高度保守的C端中心结构域和独特的N末端,参与多种重要的细胞生理过程.其作为蛋白激酶C及酪氨酸蛋白激酶的底物参与MAPK/ERK信号传导通路,并作为PLA2的抑制剂调节细胞活动.近来多项研究表明膜联蛋白Al通过调节MAPK/ERK信号传导通路参与多种肿瘤的发生,并且参与肿瘤的分化与转移等.本文就膜联蛋白Al与恶性肿瘤发生、发展与转移之间的关系做一综述.