雷公藤多甙对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响

采用超排卵技术研究雷公藤多甙（GTW）对小鼠卵母细胞的成熟和体外受精以及脏器等的影响,GTW对小鼠卵母细胞生发泡破裂没有影响,但可以抑制卵母细胞第一极体的释放,影响卵母细胞的存活率并可降低体外受精率和超排卵的卵母细胞数量。GTW可以破坏卵母细胞成熟,降低卵母细胞的体外受精能力,影响小鼠的正常生殖功能。     

生精细胞凋亡相关基因

细胞凋亡(apoptosis)是一种基因控制的细胞生理性自杀行为,用以维持细胞数量的相对恒定,可由某种刺激或抑制剂的移除而激活。在哺乳动物精子发生过程中,各级生精细胞都会发生相应的凋亡,通过严格调控以确保成熟精子生成的数量和质量。生精细胞的凋亡是一个许多基因参与的复杂的不可逆过程,其中Bcl-2/Bax基因族、p53基因、Fas-Fasl基因、C-myc基因、CREM基因、HSP基因族、c-Kit/SCF基因、Insl3基因、iNOS基因、BMP8B基因、TR基因和存活蛋白(survivin)基因等发挥了重要作用。研究哺乳动物睾丸生精细胞凋亡相关基因,有利于了解生精细胞凋亡机制,为进一步阐明精子发生的调控机制,预防和治疗精子发生相关疾病提供重要的理论依据。     

小鼠生精细胞凋亡相关基因的分子克隆

利用手术隐睾的方法建立小鼠生精细胞凋亡模型,通过光镜、电镜以及原位末端标记法（TUNEL）证实手术隐睾可成功诱导小鼠生精细胞凋亡;在此基础上应用抑制消减杂交法（suppression subtractive hybridization,SSH)对隐睾和对侧睾丸组织的基因表达进行研究,在隐睾组织中分离得到24个高表达cDNA片段,经克隆、PCR和酶切鉴定、测序及匹配分析,证实24个cDNA片段均为新的ESTs,已被GenBank接受并给予新序列编号。任选其中3个cDNA片段作为探针进行Northern印迹杂交,证实它们在隐睾和对侧睾丸组织有差异表达。上述结果提示手术隐睾是研究生精功能降低和睾丸组织凋亡过程中基因表达的适合实验模型,所分离的差异表达cDNA序列可能与生精细胞凋亡密切相关。     

镉对雄性小鼠生精细胞的影响

为了研究镉对小鼠生殖力和生精细胞的作用,本文对氯化镉处理后的雄性小鼠进行了交配实验,以观察其对怀孕率、每窝产仔数及子代性比的影响。测定比较了注射镉后,小鼠成熟精子的总LDH酶和LDH-X酶的活性;还用双向电泳方法分析了成熟精子的蛋白质变化。结果表明,处理组在怀孕率、每窝产仔数及子代性比方面无统计学意义的差异。成熟精子的总LDH活性经镉处理后未发现明显变化,但镉能显著地抑制与精子运动的能量有关的LDH-X酶的活性。双向电泳图谱表示,镉处理后,精子中含量较少的三组蛋白质或消失不见,或发生明显变化。     

小鼠睾丸特异基因在生精细胞中阶段性表达的定量分析

在Balb/c小鼠精子发生过程中,许多基因都具有严格的时空表达特性.实验利用半定量RT-PCR验证了12个小鼠精子发生相关基因的组织学分布,采用SYBR Green I荧光定量PCR分析了它们在不同发育阶段生精细胞中的差异表达.结果显示,所有基因仅在睾丸组织中高表达;Prm1、Prm2、Tnp1、Tnp2在长形精子细胞中的表达水平最高,分别是粗线期精母细胞阶段的1.9、2.8、3.2和2倍;Dnajb3呈上调表达,在长形精子细胞中的含量是粗线期精母细胞阶段的2.5倍;Akap4在长形精子细胞阶段的表达水平尤为突出,是粗线期精母细胞的5.5倍;Spata3和Spata4在圆形及长形精子细胞中的表达量相近,分别是粗线期精母细胞阶段的3倍和1.5倍;hils1和Tex24在圆形精子细胞阶段的表达水平最高,分别是粗线期精母细胞阶段的1.9和1.4倍;Spag41和Papo1b从粗线期精母细胞到长形精于细胞阶段呈明显的下调表达,分别下降了45%和34%.结果提示,被检测的基因具有明显的阶段特异性表达特征,为深入研究这些基因在小鼠精子发生过程中的作用提供了新资料,同时也为荧光定量PCR技术在精子发生相关基因定量表达研究中的可行性提供了充分例证.     

小鼠生精细胞增殖与凋亡的年龄变化

为研究雄性小鼠睾丸在发生,发育过程生精细胞增殖与凋亡的年龄变化,本研究采用了免疫细胞化学,凋亡细胞原位检测,电镜及体视学图象分析等方法,对胚胎15天到生后10月后发育阶段生精细胞的超微结构,PCNA表达,凋亡情况进行了较深入地研究,结果：（1）精原细胞PCNA反应在胚胎15天为阳性,从胚胎18天到生后5天,降为弱阳性,而阳性的精原细胞在生后7天重新出现,一直到生后6月,仍可见部分精原细胞呈阳性反应;（2）生后3天,可见凋亡的精原细胞染色质浓缩,核膜出现明显的核周隙,核碎裂,凋亡细胞数从生后1天到生后第3周有增加的趋势,于生后第3周出现峰值,之后降低,之后降低,结论：（1）PCNA阳性细胞而密度到生后第2周出现峰值,而凋亡细胞数于生后3周出现峰值,生精细胞凋亡的高峰要滞后其增殖峰1周左右,而且与其所处生精周期的特定阶段有关;（2）精原细胞在胚胎发育过程中向曲细精管周边迁移,其排列由无序到有序;（3）在生后各发育 ,精原细胞始终保持DNA复制的能力。     

GTW对小鼠骨髓细胞微核和精子畸形的影响

研究了雷公藤多甙(GTW)的抗生育剂量、中间剂量和治疗剂量对昆明种小鼠骨髓细胞微核和精子畸形的影响,并对用药后其体重变化和睾丸/体重的比例进行比较。骨髓微核试验和睾丸/体重比变化分析均显示中间剂量组和治疗剂量组有不同程度的遗传毒性,且存在剂量-效应关系,但小于阳性对照;精子畸形率呈下降趋势,生育力的可复性可能也是下降的;体重变化可见中间剂量组存在较高的代偿能力。     

来氟米特配伍雷公藤多甙治疗难治性肾病综合征的疗效观察

目的:观察来氟米特联合雷公藤多甙治疗难治性肾病综合征(RNS)的疗效。方法:选取52例RNS患者随机分为观察组(32例)与对照组(30例),其中对照组给予来氟米特和激素联合治疗,观察组给予来氟米特配伍雷公藤多甙治疗。疗程均为6个月,治疗期间比较两组疗效,检测患者24h尿蛋白定量、血清总蛋白和白蛋白、血肌酐、血尿素氮、谷丙转氨酶变化情况,同时观察患者有无不良反应。结果:①治疗6个月后,观察组完全缓解率和总有效率分别为28.13%、78.13%,略高于对照组26.67%的完全缓解效率和76..67%的总有效率,但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。②经过治疗,RNS患者24h尿蛋白定量逐渐下降,而血清总蛋白和白蛋白水平逐渐增加,与治疗前比较差异均有显著性(P<0.01),其中观察组各指标变化比对照组明显(P<0.05)③治疗后观察组与对照组患者尿素氮、血肌酐含量均较治疗前显著降低(P<0.01或0.05),而谷丙转氨酶水平无明显变化(P>0..05),两组间差异无显著性(P>0..05)。④观察组不良反应发生率为12.50%,明显低于对照组23.33%的发生率,组间差异有显著性(P<0.05)。结论:米氟米特联合雷公藤多甙治疗能明显缓解RNS患者的临床症状,改善肾功能,减少蛋白尿的产生,且短期内不良反应较少。     

来氟米特配伍雷公藤多甙治疗难治性肾病综合征的疗效观察

目的：观察来氟米特联合雷公藤多甙治疗难治性肾病综合征（RNS）的疗效。方法：选取52例RNS患者随机分为观察组（32例）与对照组（30例）,其中对照组给予来氟米特和激素联合治疗,观察组给予来氟米特配伍雷公藤多甙治疗。疗程均为6个月,治疗期间比较两组疗效,检测患者24h尿蛋白定量、血清总蛋白和白蛋白、血肌酐、血尿素氮、谷丙转氨酶变化情况,同时观察患者有无不良反应。结果：①治疗6个月后,观察组完全缓解率和总有效率分别为28.13%、78.13%,略高于对照组26.67%的完全缓解效率和76..67%的总有效率,但两组间差异无统计学意义（P〉0.05）。②经过治疗,RNS患者24h尿蛋白定量逐渐下降,而血清总蛋白和白蛋白水平逐渐增加,与治疗前比较差异均有显著性（P〈0.01）,其中观察组各指标变化比对照组明显（P〈0.05）③治疗后观察组与对照组患者尿素氮、血肌酐含量均较治疗前显著降低（P〈0.01或0.05）,而谷丙转氨酶水平无明显变化（P〉0..05）,两组间差异无显著性（P〉0..05）。④观察组不良反应发生率为12.50%,明显低于对照组23.33%的发生率,组间差异有显著性（P〈0.05）。结论：米氟米特联合雷公藤多甙治疗能明显缓解RNS患者的临床症状,改善肾功能,减少蛋白尿的产生,且短期内不良反应较少。     

Studies on the Sesquiterpene Alkaloids of Tripterygium wilfordii Hook.

This paper reports two sesquiterpene alkaloids isolated from Tripterygium wilfordii Hook. f. Their structures are assigned as Ⅰ and Ⅱ, respectively, by MS, UV, IR, 1HNMR and 13CNMR spectroscopic analysis. Alkaloid Ⅱ is a new alkaloid named wilfornine. These al- kaloids were shown to be immunosuppressives.     

雷公藤次生代谢产物雷公藤红素含量与环境因子相关性分析

采用多元逐步回归分析对分布于浙江、福建、湖南、湖北和贵州5个省内6类不同居群药用植物雷公藤（Tripterygium wilfordil）的160株个体进行了雷公藤红素含量和环境因子的相关性分析。结果表明,在空间分布上,各居群间的雷公藤红素含量差异较大,其中湖南黄岩居群雷公藤红素含量最高,为1．0585×10^-2g·g^-1,贵州雷山和福建泰宁居群最低,分别为4．9889×10^-3g·g^-1和4．9887×10^-3g·g^-1;而在居群内的雷公藤红素含量相对一致,基本呈正态分布。实验结果表明,雷公藤中雷公藤红素的积累在很大程度上受环境因子的影响。进一步利用SPSS软件对各个环境因子作逐步回归分析,表明年均日照时长（X）、年均降雨量（X2）和土壤含氮量（蚝）是影响雷公藤中雷公藤红素含量（Ⅵ的主导因子,且各因素均与雷公藤红素含量呈负相关。经检验,回归方程为Y=19．308-0．01X1-0．02X2—0．062X5,雅达到0．917,F检验回归方程的线性关系显著。研究结果表明,环境因子,特别是日照、水分和土壤含氮量能够影响雷公藤中雷公藤红素的含量。该文还对提高雷公藤中药用成分雷公藤红素含量的研究策略进行了讨论。     

白僵菌、绿僵菌对雷公藤丽长角巢蛾的侵染力测定

经室内侵染力测定,球孢白僵菌Beauveria bassiana和金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae皆能侵染雷公藤丽长角巢蛾Xyrosaria lichneuta幼虫,不同菌株的侵染力存在显著差异。3株白僵菌中,Bb27菌株毒力最强,菌液为1×10^5～1×10^9个·mL^-1五个不同浓度梯度的孢子悬浮液时,害虫15d校正死亡率在58．3％-100％之间;LT50分别为9．36d,6．26d,3．89d、2．54d．2．10d;LC50为4．87×10^4个·ML^-1。3株绿僵菌中,MaZPTP01菌株毒力最强,5种孢子浓度15d校正死亡率分别为52．4％、69．0％、76．2、92．9％、95．2％;LT50分别为11．47d、6．89d、4．36d、2．68d、2．13d;LC50为7．39×10^4个·mL^-1。Bb27和MaZFIT01菌株可应用于林间作进一步防治试验。     

雷公藤次生代谢产物雷公藤红素含量与环境因子相关性分析

采用多元逐步回归分析对分布于浙江、福建、湖南、湖北和贵州5个省内6类不同居群药用植物雷公藤(Tripterygium wi lfordi i)的160株个体进行了雷公藤红素含量和环境因子的相关性分析。结果表明, 在空间分布上, 各居群间的雷公藤红素含量差异较大, 其中湖南黄岩居群雷公藤红素含量最高, 为1.058 5×10-2g.g-1, 贵州雷山和福建泰宁居群最低,分别为4.988 9×10-3g.g-1和4.988 7×10-3g.g-1; 而在居群内的雷公藤红素含量相对一致, 基本呈正态分布。实验结果表明, 雷公藤中雷公藤红素的积累在很大程度上受环境因子的影响。进一步利用SPSS软件对各个环境因子作逐步回归分析, 表明年均日照时长(X1)、年均降雨量(X2)和土壤含氮量(X5)是影响雷公藤中雷公藤红素含量(Y)的主导因子, 且各因素均与雷公藤红素含量呈负相关。经检验, 回归方程为Y=19.308-0.01 X1-0.02 X2-0.062 X5, R值达到0.917, F检验回归方程的线性关系显著。研究结果表明,环境因子, 特别是日照、水分和土壤含氮量能够影响雷公藤中雷公藤红素的含量。该文还对提高雷公藤中药用成分雷公藤红 素含量的研究策略进行了讨论。     

Therapeutic impact of the ethyl acetate extract of Tripterygium wilfordii Hook F on nephritis in NZB/W F1 mice

This study was designed to examine the potential use of the ethyl acetate (EA) extract of Tripterygium wilfordii Hook F (TwHF), a Chinese herbal medicine, in the treatment of systemic lupus erythematosus. A total of 48 28-week-old female NZB/W F1 mice were randomly divided into three groups and orally administered vehicle or the EA extract of TwHF at 18.25 mg/kg (EAlow) or 36.5 mg/kg (EAhigh) for 14 weeks. Proteinuria and serum anti-double-stranded (ds)DNA antibody titers were assayed before and after treatment. At the end of treatment, all animals were sacrificed and pathological changes in the kidneys were examined by observers blinded to the treatment regimens. Immunohistological studies were carried out on kidneys and spleens. At 28 weeks of age, proteinuria (>30 mg/dl) and anti-dsDNA antibodies were found in all mice in the three groups. Fourteen, sixteen and fifteen mice in the vehicle, EAlow and EAhigh groups, respectively, completed at least four weeks of treatment. At the end of treatment, the mean proteinuria of the EAlow and EAhigh groups was significantly less than that of the vehicle group and no different from proteinuria at the onset of treatment. Histological evidence of glomerulonephritis, glomerular deposition of IgG and complement 3 and cellular infiltration in the interstitium and perivascular regions were significantly less severe in the EA extract treated mice than in vehicle treated mice. Treatment with the EA extract significantly inhibited the progression of kidney disease in NZB/W F1 mice, though had no significant effect on the levels of anti-dsDNA antibody.     

摇瓶培养条件下雷公藤不定根生长及次生代谢产物含量的研究

以雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook. f.)不定根为材料,研究摇瓶悬浮培养条件下接种密度、装液比例、逐级放大、消泡剂、大孔吸附树脂种类及浓度对雷公藤不定根增长量、不定根及培养基中雷公藤内酯醇、雷公藤吉碱、雷公藤次碱含量的影响。结果显示,接种密度在15 g/L (FW)时较适合不定根的继代培养和次生代谢产物的积累。250 m L摇瓶中装入100 m L培养基,即装液量为2/5时,培养基利用率最高。随着摇瓶体积的逐渐放大,不定根增长量和3种次生代谢产物含量略有下降,5 L摇瓶中不定根增长量为对照的91.6%,内酯醇、吉碱和次碱的含量分别为对照的91.8%、91.7%和96.9%。6种大孔吸附树脂中,XAD-7处理对不定根的生长有明显促进作用,培养结束时,3种次生代谢产物产量显著提高,当XAD-7浓度为0.5 g/瓶时不定根增长量为对照的1.2倍,内酯醇、吉碱和次碱产量最高,分别为对照的2.9、2.4和2.2倍。培养基中添加消泡剂后不定根增长量、3种次生代谢产物总产量均不同程度下降,其中,LX-603处理后,虽然不定根增长量为对照的85%,内酯醇、吉碱和次碱产量分别为对照的78%、64%和87%,但明显抑制了培养过程中泡沫的产生。研究结果表明筛选的摇瓶逐级放大培养雷公藤不定根的方法效果较好,可为雷公藤不定根生物反应器放大培养奠定基础。     

Influence of pH and temperature on the expression of sboA and ituD genes in Bacillus sp. P11

Temperature and pH are key factors influencing the production of antimicrobial peptides. In this work, qRT-PCR methodology was used to demonstrate the effect of these two variables on sboA (subtilosin A) and ituD (iturin A) expression in Bacillus sp. P11, an isolate from aquatic environment of the Amazon. Bacillus sp. P11 was incubated in BHI broth for 36 h at 30, 37 and 42 °C, and the pH values were 6.0, 7.4 and 8.0. The production of subtilosin A and iturin A was confirmed by mass spectrometry. The sboA expression increased 200-fold when the initial pH was 8.0. In contrast, ituD expression was maximum at pH 6.0. Increased temperature (42 °C) was adverse for both genes, but ituD expression increased at 37 °C. Expression of sboA and ituD was strongly affected by pH and temperature and qRT-PCR proved to be a powerful tool to investigate the potential of Bacillus strains to produce subtilosin A and iturin A.     

不同采收期雷公藤甲素测定及其动态积累

采用HPLC法测定不同采收期雷公藤根、茎、叶的主要活性成分雷公藤甲素含量,掌握雷公藤甲素的动态积累。结果表明,雷公藤甲素浓度在7.75～250 μg·mL^-1范围内线性关系良好(R²=0.9997),雷公藤加样回收率为99.21%,RSD值为1.578%,该方法回收率较好。雷公藤甲素的含量在不同生长期、不同部位存在一定差异,不同部位甲素含量由高到低依次为叶、根、茎,雷公藤叶片具有资源开发利用潜力。7～8月采收的雷公藤叶片甲素含量最高,11～12月雷公藤根部甲素含量达最高。雷公藤不同器官均具有较高的药用价值,研究结果为雷公藤人工采收、质量评价和资源开发提供一定的科学依据。     

The Isolation and Structure of Three New Diterpenes from Tripterygium wilfordii Hook

This paper deals with the isolation of three new diterpenes: triptono-terpene, triptonoterpene methyl ether and triptolidenol from Tripterygium wilfordiiHook. F. Their structures are assigned as Ⅰ, Ⅱ, and Ⅲ, respectively by means of spectors-copic analyses (UV, IR, 1HNMR and MS), preparation of the derivative and chemicaltransformations.     

Determination of diterpenoid triepoxides in Tripterygium wilfordii by micellar electrokinetic capillary chromatography

A micellar electrokinetic capillary chromatographic (MEKC) method has been established for the identification and determination of diterpenoid triepoxides in the Chinese herb Tripterygium wilfordii Hook F. and its preparations. Studies of the influence of boric acid and borax buffer concentration and pH, and of sodium dodecylsulphate (SDS) concentration have been carried out, and the optimum separation for the triepoxides was achieved using 20 mM boric acid and 10 mM borax with 20 mM SDS as the running buffer. MEKC was found to exhibit good accuracy, precision and repeatability. The sensitivity of the assay was sufficient to monitor the three active components in T. wilfordii and its preparations.