固定化青霉素酰化酶的研究

将巨大芽孢杆菌胞外青霉素酰化酶通过共价键连接到醋酸纤维素载体上,制成的固定化青霉素酰化酶的表观活力达2000 u／g左右(PDAB法)。水解lO％(w／v)的青霉素G钾盐落液,使用30批,保留活力70％以上。6-氨基青毒烷酸(6-APA)总收率平均达88．37％。固定化青霉素酰化酶水解青霉素G的最适pH为9．95,最适温度为55℃,表观米氏常数为1.093×10-2mol／L,在pH 5．8-10．7,温度45℃以下酶的活力稳定。     

功能基化聚丙烯酸甲脂固定化氨基酰化酶的研究

以功能基化聚丙烯酸甲酯为载体制备固定化氨基酰化酶时,载体制备时的交联度,致孔剂用量和混合致孔剂比例均会影峋酶的固定化效率。结果表明25％交联度和loo％致孔剂用量制备的载体最佳。用此载体固定化氨基酰化酶可提高酶对高底物浓度、离子强度、温度、pH、有机溶剂和蛋白质变性剂的耐受能力。用固定化酶柱式反应器连续拆分N－乙酰基－DL－苯丙氨酸,使用一个月仍可保留90％的酶活力。     

聚丙烯腈纤维固定化青霉素酰化酶性质的研究

将巨大芽孢杆菌（Bacillusmegaterium）青霉素酞化酶连接到聚丙烯腈纤维载体上,制成固定化青霉素酰化酶。其表现活力约为2000u／g。水解青霉素G的最适温度为50℃;最适PH为9．0;在PHS．5～10．3、温度50℃以下酶的活力稳定;表观米氏常数Ka为1．33×10-8mol／L;最大反应速度Vm为2．564mmol·min-1;苯乙酸为竞争性抑制剂,抑制常数为0．16mol／L。水解10％的青霉素G钾盐溶液,使用20批,保留酶活力80％。     

颗粒状固定化青霉素酰化酶的研究

将巨大芽孢杆菌 (Bacillusmegaterium)胞外青霉素酰化酶通过共价键结合到聚合物载体EupergitC颗粒环氧基团上 ,制成的颗粒状固定化青霉素酰化酶表现活力达 1 40 0 μ/g左右。固定化酶水解青霉素的最适 pH8 0 ,最适温度为 55℃。在pH6 0～ 8 5、温度低于 40℃时固定化酶活力稳定。在 pH8 0、温度 37℃时 ,固定化酶对青霉素的表现米氏常数Ka为 2×1 0 - 2 mol/L ;苯乙酸为竞争性抑制剂 ,抑制常数Kip为 2 8× 1 0 - 2 mol/L ;6 APA为非竞争性抑制剂 ,抑制常数Kia为 0 1 2 5mol/L。固定化酶水解青霉素 ,投料浓度为 8% ,在使用 2 0 0批后 ,保留活力 80 %左右 ,6 APA收率平均达 89 48%。     

几种纤维素及无机吸附载体对青霉素酰化酶的吸附作用及其固定化

本文就几种纤维素和无机吸附载体对青霉素酰化酶的吸附作用及其固定化进行了研究,结果表明:DEAE-纤维素、EYI-纤维素、微晶纤维素、CM-纤维素、羟基磷灰石、中性氧化铝、硅藻土及粉末状膨润土对青霉素酰化酶都有很强的吸附能力,其固定化青霉素酰化酶的比活分别在1.47～19.43u/g之间,活力回收率为16.3％至84％,几种固定化酶的最适pH均较游离酶低,且其操作稳定性较好。     

M.natoriense TNJL143-2菌的D-氨基酰化酶的固定化研究

D-氨基酰化酶可用于D-氨基酸的生产,本研究利用来源于Microbacterium natoriense TNJL143-2的D-氨基酰化酶,分别通过琼脂糖包埋、介孔二氧化硅MCM-41和SBA-15吸附,制备了三种固定化酶,并对三种固定化酶的固定化条件、酶学性质、活性保持时间、重复使用次数、米氏常数等参数进行了研究。结果表明,MCM-41载体固定化酶的蛋白固定率为91.6%,SBA-15载体固定化酶的蛋白固定率为88.0%,琼脂糖包埋法蛋白固定率为79.5%。MCM-41、SBA-15以及琼脂糖三种载体固定化酶最适反应pH均为7.0,最适反应温度范围均为37℃。在固定化酶的活性保持时间以及重复利用活性方面,SBA-15固定化酶同样优于其他两种固定化酶。以D型苯丙氨酸(D-Phe)为底物时,琼脂糖包埋固定化酶的Km为28.8 mol/L,SBA-15固定化酶的Km为25.9 mol/L,MCM-41固定化酶的Km为25.0 mol/L。同时本文还探索了三种固定化酶的pH使用范围及酸碱稳定性、温度使用范围及热稳定性,结果显示,SBA-15作为固定化载体均表现出较广的适用范围及较高的稳定性。在不同条件的反应体系中,SBA-15固定化酶的蛋白损失率始终小于其他两种固定化酶。     

聚丙烯腈纤维固定化青霉素酰化酶合成头孢氨苄的研究

将巨大芽孢杆菌胞外青霉素酰化酶通过共价键结合到聚丙烯腈纤维的衍生物上。制成的丝状固定化青霉素酰化酶表现活力达 1 5 3U g(湿重 )。固定化酶合成头孢氨苄的最适pH为 6 5 ,最适温度为 40℃。 7 ADCA的投料浓度以 4%为好 ,7 ADCA与PGME的投料量比率为1∶2 ,最佳用酶量为 1 70U g 7 ADCA。在pH6 5、温度 3 0℃时 ,固定化酶对 7 ADCA的表观米氏常数K7 ADCA为 0 1 6 2mol L ,对PGME的表观米氏常数KPGME为 0 3 6 4mol L ,最大反应速度Vmax为0 0 4 6 2mol·L- 1·min- 1,用固定化酶合成头孢氨苄 ,使用 5 0次保留酶活力 83 9%     

以环氧乙烷为活性基的多孔颗粒状固定化青霉素酰化酶的制备

报道了用以环氧乙烷为活性基的多孔颗粒状载体（Eupergit-C）制备固定由巨大芽孢杆菌（B．megaterium）产生的青霉素酰化酶的研究。用已二胺,赖氨酸对载体进行化学修饰后制备固定化酶,获得了较好的固定结果。用未修饰的载体制备固化酶,经24h固定反应,酶活力达176．5IU／g（wet）,酶活力总叫率达53．7％,酶蛋白的固定量为19＝7mg/g（dr）,酶蛋白的固定效率达87．5％。游离酶的酶浓度对制备固定化酶的活力无显影响。当加酶量从312IU/g（dry）上升到6250IU／g（dry）时,固定化酶活力从89IU／g(wet）上升到475IU／g（wet）,总收率和固定化效率分别从99％和99％下降到26．5％和32．5％,酶蛋白的固定量从6．9mg/g（dry）上升到112mg/g（dry）,酶蛋白的固定效率从99％下降至80．5％。以酶活力为155IU/g(wet）,酶蛋白固定量为22mg/g(dry）的固定化酶水解青霉素G钾盐,经过20批循环水解后,剩余酶活力为92．5％。     

固定化青霉素V酰化酶的制备及性质

尖镰孢(Fusarium oxysporum)FP941青霉素V酰化酶经γ氧化铝吸附洗脱、硫酸铵沉淀和脱盐处理后,固定在环氧丙烯聚合物载体上,湿固定化酶表现活力为217 IU/g,固定化产率为53%。固定化酶作用最适温度为55℃,最适pH为80;在pH50～110及50℃以下稳定;37℃使用25次后,酶活力保留90%。     

以聚丙烯腈纤维为载体制备固定化青霉素G酰化酶的研究

以酸部分水解聚丙烯腈纤维为载体 ,以戊二醛为交联剂 ,共价键结合制备了固定化胞外青霉素G酰化酶。当水解后的载体中 NH2 基含量为 690 μmol g和含水量为 64%时 ,对酶蛋白的固定量达 1 0 0mg g以上 ,固定化酶的活力达 2 30 0IU g ,酶活力总产率为 30 % ,固定化效率为 56%。酶活力的总产率和固定化率随加酶量的增加而降低。该酶可以将浓度为 2 5%～1 2 5%的青霉素G钾盐水解 98%以上。批投青霉素G钾盐为 1 0g,酶负荷为 1 50IU g(PGK) ,经2 0批水解反应后 ,剩余酶活力为 80 %。用二硫基苏醣醇处理固定化酶 ,对水解青霉素G钾盐的操作稳定性有促进作用。固定化酶的室温保存半衰期为 1 30d。用戊二醛和硼氢化钠溶液处理固定化酶后 ,酶活力的室温保存稳定性有所降低。     

多孔醋酸纤维素球形载体固定化糖化酶的研究

报道了一种多孔醋酸纤维素球形固定化酶载体的制备技术,以NaIO₄氧化法活化,固定糖化酶,测定了固定化糖化酶的催化反应特性,并与游离酶作了比较.固定化酶在55℃下水解10批淀粉溶液,总反应时间超过24 h,活力无显著变化.     

醋酸纤维素膜为基础的葡萄糖生物传感器的研制

用共价法将酶固定在醋酸纤维素膜上,方法简便易行,制造的酶膜稳定,比活力高。同时采用该方法制备了葡萄糖氧化酶酶膜,与氧电极组装成测定葡萄糖的生物传感器,线性范围为50~800mg／dl,仪器工作的最适pH为6．0,最适温度为40℃。将该膜与过氧化氢电极组装得到的传感器具有以下特性：线性范围为10~200mg／dl,最适pH为6．0,测定结果与酶试制盒有良好相关性。     

几种动物肝脏糖胺聚糖的醋酸纤维素薄膜电泳分析

采用酶解和离子交换色谱的方法,从兔、鸡、猪和羊肝组织中提取和纯化得到了糖胺聚糖（GAGs）.通过比较透明质酸（HA）、硫酸软骨素A（CS-A）、硫酸软骨素C（CS-C）、硫酸皮肤素（DS）、肝素（HP）、硫酸乙酰肝素（HS）等标准品在醋酸钡、醋酸锌、吡啶-甲酸等几种不同缓冲体系下的醋酸纤维素薄膜电泳行为,结合灰度积分建立了适合于微量GAGs定性和定量分析的电泳方法.将从不同动物肝脏组织中提取的GAGs运用该方法进行分析,发现 不同动物肝脏组织中,GAG含量和组成均有较大差异：羊肝中GAGs含量最高（0.52 mg/g 组织干粉）,种类也最丰富,含有HA、HS、DS和CS,其中HA所占比例最高;鸡肝中GAGs含量最少（0.18 mg/g组织干粉）,主要含有HA和DS;兔肝GAGs种类与猪肝相似,均含有HA、HS和DS,但HS是猪肝GAGs的主要成分,DS是兔肝GAGs的主要成分.     

乙基纤维素微胶囊对过氧化氢酶固定化的研究

以乙基纤维素作膜材,用液中干燥法使过氧化氢酶微胶囊化。研究了微胶囊化操作条件对酶活性的影响。通过测定微胶囊化酶的释放曲线,证明微胶囊膜对过氧化氢酶具有较好的固定性能力。固定化酶用于催化底物过氧化氢分解,测定米氏常数为０．５５ｍｏｌ／Ｌ。     

高分子膜载体固定化木瓜蛋白酶

在浸润条件下,以0.5%(v/v)戊二醛交联的高分子膜尼龙载体固定化木瓜蛋白酶。对固定化条件进行了优化,比较了固定化酶与游离酶的酶学参数。结果表明,4℃、pH6.0条件下,将膜载体浸润于2mg/mL酶液中5h,固定化酶活为303.4U/g。固定化酶最适反应pH为6.0～7.0,最适反应温度为65℃。其pH稳定性、热稳定性均比游离酶高。     

Immobilization of penicillin G acylase on macro-mesoporous silica spheres

In this study, macro-mesoporous silica spheres were prepared with a micro-device and used as the support for the immobilization of penicillin G acylase (PGA). To measure the enzymatic activity, the silica spheres with immobilized PGA were placed into a packed-bed reactor, in which the hydrolysis of penicillin G was carried out. The influences of the residence time, the initial concentration of the substrate, the accumulation of the target product 6-aminopenicillanic acid, and the enzyme loading amount on the performance of the immobilized PGA were investigated. The introduction of macropores increased the enzyme loading amount and decreased the internal mass transfer resistance, and the results showed that the enzyme loading amount reached 895 mg/g (dry support), and the apparent enzymatic activity achieved up to 1033 U/g (dry support). In addition, the immobilized PGA was found to have great stability.     

头孢菌素C酰化酶突变位点的研究

头孢菌素C酰化酶能直接将头孢菌素C(CPC)转化为7-氨基头孢烷酸(7-ACA),此一步酶法具有很大的经济价值,所以得到很多研究者的关注,特别是提高CPC酰化酶活性及专一性的研究。以CPC酰化酶基因ecs50为基础,利用重叠延伸PCR,对文献报道的活性提高的突变体酶S12的6个位点分别进行突变,将得到的6个突变体V122A、G140S、F297N、I314T、I415V、S710L进行诱导纯化后,检测酶活,以此来研究不同突变位点对酶活力的影响。结果 V122A的比活为106U/mg,它的转化效率比初始酶提高23.7%。     

巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶在新型环氧载体ZH-HA上的固定化

巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶共价结合在新型环氧-氨基型载体ZH-HA 上,通过对酶浓度、固定化时间、pH以及缓冲液浓度等条件的考察,确定了最优固定化条件:50 mg比活力6000 U/g的巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶蛋白和1g ZH-HA悬浮于pH 9.01 mol/L磷酸缓冲液,室温搅拌6 h,制得固定化巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶,活力2126 U/g湿载体,活力回收率7.67%.比较研究了固定化酶与原酶性质,原酶最适温度45℃,最适pH为8.0.固定化酶则分别是50℃和9.0,分别比溶液酶偏移5℃、1.0个pH单位.经过40批连续水解青霉素G钾盐,固定化巨大芽孢杆菌青霉素酰化酶仍保持80%的活力,显示出良好的工作稳定性.     

Immobilization of enzyme onto cellulose-titanium oxide composite fiber

Fibers of a cellulose-TiO(2) composite were prepared by the reaction of cellulose with titanium iso-propoxide. Enzymes were immobilized on the fibers easily and simply under mild conditions. The fibers were stable in common solvents, high ionic solutions, and over a wide range of pH values 3-10. (c) 1993 John Wiley & Sons, Inc.     

Immobilization of penicillin G acylase on aminoalkylated polyacrylic supports

A procedure is described for the immobilization of penicillin G acylase (PA) on Amberlite XAD7 modified by transamidation with 1,2-ethylenediamine and activated with glutaraldehyde. Reduction with sodium borohydride of the Schiff's bases formed between the amino groups of the protein and glutaraldehyde results in a dramatic improvement of the operational stability of the immobilized enzyme without affecting the catalytic activity. The enzyme kept in presence of the substrate, penicillin G, displays an increased stability with respect to that stored in pure phosphate buffer solution. The inactivation kinetics of the immobilized preparations of PA, determined in a continuous fixed bed reactor, as well as a discontinuous batch reactor, are reported.