免疫诊断细胞方法(续五)

<正>6.分离T和B淋巴细胞的方法。 为检查T和B淋巴细胞的一系列特性,应使用仅含1—5％另一型淋巴细胞和其他白细胞的纯悬液,这种悬液是利用T和B淋     

猪红细胞与人淋巴细胞形成玫瑰花环的影响因素

Lay等人曾发现人T淋巴细胞与猪红细胞形成花环,证实在人T淋巴细胞表面存在猪红细胞受体。为探讨该种受体的特性,我们观察了若干因素对人T淋巴细胞与猪红细胞花环形成的影响,现报告如下: 材料与方法猪红细胞悬液制备取抗凝猪血,用Hanks液洗涤3次,并以Hanks液配成0.5％猪红细胞悬液(约为8×10~7个细胞/毫     

免疫诊断细胞方法(续完)

<正>(二)测定被刺激淋巴细胞上清液中淋巴因子活性的方法 1、白细胞移动抑制因子的鉴定方法。 籍指示细胞移动抑制来测定上清液淋巴因子活性。为此可用第六章的方法。 (1)白细胞移动抑制的间接反应。 指示细胞 使用人白细胞悬液或豚鼠腹腔渗出液巨噬细胞判定上清液白细胞移动抑制因子的活性。制备这些悬液与制备抑制白细胞移动的直接反应相同。可使用精制巨噬细胞或多核白细胞悬液,因为正是这些细胞对MIF起反应。因此,如果不用精制多核白细胞,则必须注意用于指示白细胞悬液的细胞组成。淋巴细胞占多数的悬液不能用于检     

B细胞免疫球蛋白与T细胞抗原受体基因的种系结构及其体细胞重排

免疫现象的第一步是免疫活性细胞对抗原的识 别。脊椎动物和人体有两类免疫活性细胞与抗原发生 特异性结合反应：B淋巴细胞表面的抗原受体与可溶 性抗原反应,T淋巴细胞表面的抗原受体与细胞表面 抗原反应。这些受体分子的基本结构单位是类似的异 型二聚体（heterodimer) ; B细胞抗原受体（B cell rece ptor, BCR）由轻链（L）和重链(H)构成,T细胞抗原 受体（T cell receptor, TCR）由,链和0链构成。抗原 分子多种多样。一个抗原分子还往往会有一个以上的 表位（e pi tope）或称抗原决定基（antigenic determinant) 均应有与它互补的对位（paratope）即抗原受体可与它 发生特异性结合反应。一个脊推动物或人体的B细胞 和T细胞必需而且事实上具备极为丰富的抗原受体贮 备库。在抗原刺激下,带有特异性抗原受体的B细胞 或T细胞发生克隆扩增（clonal multiplication),每个克 险只具有一种抗原结合特异性。这里有两个矛盾。一 个是淋巴细胞基因组内基因有限,与为如此众多受体 蛋白质分子编码需要大量遗传信息之间的矛盾;另一 个是淋巴细胞基因组的全能性与一个成熟淋巴细胞只 表现一种抗原受体特异性之间的矛盾。探究这些矛盾 的奥秘是近三十年来免疫遗传学中一个吸引人而又使 人烦恼的课题。     

小鼠淋巴结及胸腺T、B淋巴细胞的鉴别

本文用细胞化学ACP偶氮染色法和5′N“Gomori”染色法鉴别小鼠淋巴结及胸腺T、B淋巴细胞。测定小鼠上述淋巴组织细胞悬液样品中ACP及5′N活力所得的结果,淋巴结的ACP阳性细胞为67％左右,5′N阳性细胞为31％左右,胸腺的ACP阳性细胞为97％,5′N阳性细胞为10％。上述结果是相互符合的,也与目前已报导的小鼠及人的淋巴结和胸腺T、B淋巴细胞百分数基本符合。 文中就ACP偶氮染色法与非特异性酯酶染色法进行了比较,证明在小鼠上述淋巴组织细胞悬液中ACP阳性淋巴细胞基本上代表T淋巴细胞。 还就5′N“Gomori”法染色过程中,基质液中铅离子浓度对5′N活力的影响,ACP活力抑制剂的使用和机理以及所得出的小鼠淋巴结及胸腺中T,B淋巴细胞百分数的可靠性进行了初步讨论。 在深入研究机体细胞免疫和体液免疫以及二者的相互关系所进行免疫功能的测定方面,应用免疫学方法的报导较多,而有关细胞化学的应用则甚少,如非特异性酯酶染色法鉴别T淋巴细胞的资料(Mueller,1975;1976;Ranki,1976),以及鉴别B淋巴细胞的零星记载。M(?)ller等(1974)在人的脾(白髓)切片细胞中曾发现5′核苷酸酶(5′N)反应与EAC玫瑰花试验花瓣形成的阳性关系较好。此外在人的淋巴结切片观察中也证实了在EAC阳性区只出现5′N阳性反应(M(?)ller,1974)Uusit     

免疫诊断细胞方法(续一)

<正> 二,抗人的T和B淋巴细胞与其它白细胞抗血清的获得 各淋巴细胞群体和其他型白细胞特异性抗血清,首先必须与相应的细胞起反应。此外,这些抗血清应当除去非特异的抗淋巴细胞作用,从而加强其免疫抑制的特异性。用相应的材料通过免疫动物获得抗血清。因输血姙娠和某些疾病出现的抗淋巴细胞抗体也能用作试剂。 (一)抗T淋巴细胞血清(ATC) 的制备 1.免疫动物的材料。 可用胸腺细胞或无细胞的胸腺组织。作     

母牛分枝杆菌制剂对T淋巴细胞增殖反应影响的研究

以氚标记胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入法检测每分钟脉冲数(CPM),比较母牛分枝杆菌活菌悬液、辐射杀死菌悬液及高温杀死菌悬液对健康人外周血T淋巴细胞增殖反应的影响.以此作为评价治疗以细胞介导免疫为主的结核病免疫功能障碍免疫制剂效力的一个重要参数.在加入单一刺激因子实验中,对照组CPM为448±131;加入BCG、母牛分枝杆菌活菌悬液、辐射杀灭菌悬液以及高温杀死菌悬液的CPM分别为1037±194,2299±140,1819±528,994±186.这4种制剂的刺激指数均在2.0以上,尤其是母牛分枝杆菌活菌悬液、辐射杀死菌悬液分别为5.13,4.06.结果表明,母牛分枝杆菌3种制剂与BCG基本相似,在体外对T淋巴细胞增殖反应有明显的促进作用,其中以活菌悬液和辐射杀死菌悬液更为显著.另一试验中,以重组白细胞介素-2(rIL-2)作对照,BCG、母牛分枝杆菌悬液、辐射杀死菌悬液及高温杀死菌悬液分别加入rIL-2,目的在于观察菌体抗原加淋巴因子对T淋巴细胞增殖反应有无协同刺激作用.对照组的CPM为3721±1336,BCG加rIL-2组CPM为6904±1218;母牛分枝杆菌3种制剂的CPM分别为9544±172…     

B7分子家族及其配体

新近发现众多B7分子家族成员及其受体，其第二信号功能并不单纯表现为T淋巴细胞正向激活，对激活T细胞效应功能和诱导耐受也有调节作用。这些B7分子在非淋巴组织广泛表达，而它们的受体仅在激活的淋巴细胞表面诱导表达。本对其结构、表达和功能特点作一综述。     

Notch 信号通路与淋巴细胞发育

Notch 信号通路为一广泛应用且高度保守的信号转导途径,决定多能祖细胞的分化方向,其中在共同淋巴祖细胞向 T 淋巴细胞或 B 淋巴细胞分化选择中具有决定性作用 . Notch 信号通路参与淋巴细胞的发育过程,促进 Tαβ细胞的形成、诱导处女型 T 细胞变为调节型 T 细胞、阻止 CD4+T 细胞向 Th1 类型分化,以及增加外周免疫器官边缘区 B 细胞的数量 . 在分析 Notch 蛋白结构的基础上,综合最新进展,系统阐明了 Notch 信号通路的组成、作用机制、参与的淋巴细胞发育过程以及所起的作用 .     

日本七鳃鳗类淋巴细胞的分离及细胞学特征

为分离纯化并鉴定日本七鳃鳗(Lampetra japonica)血液中的类淋巴细胞,采用Ficoll密度梯度离心法分离出单个核细胞层,并得到分离单个核细胞层的最佳分离液比重为1.092。利用流式细胞仪对分离到的单个核细胞层细胞进行分选,根据细胞的前向光及侧向光散射特征成功分选出类淋巴细胞,分选效率为95.68%,每毫升外周血可分离纯化得到类淋巴细胞2.4×106个。通过透射电镜观察七鳃鳗类淋巴细胞,细胞为圆形或椭圆形,细胞表面有突起、无微绒毛,胞质内含有板状嵴线粒体、粗面内质网、游离核糖体和液泡等。淋巴细胞异质性实验结果表明,日本七鳃鳗血液白细胞中尚未发现T淋巴细胞、B淋巴细胞的分化。     

体内外感染PRRSV处理下仔猪脾淋巴细胞增殖活性的变化

为了探讨体内或体外感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的仔猪脾淋巴细胞在体外培养的增殖能力,本研究将PRRSV-GXA分离株经Marc-145细胞大量增殖培养,然后体内感染仔猪,接种病毒后分别于第11天、第14天和第21天从活体猪收获脾脏,分离脾淋巴细胞后用ConA和LPS于体外进行诱导增殖.研究结果显示第11天收获的T淋巴细胞增殖能力高于对照组,而B淋巴细胞增殖能力明显下降;第14天收获的T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖能力均极显著低于对照组;第21天收获的B淋巴细胞增殖能力略高于对照组,T淋巴细胞增殖能力略低于对照组.同时,用不同滴度的PRRSV体外感染PRRSV阴性的猪脾淋巴细胞,经ConA和LPS诱导增殖后,发现病毒滴度在103~106 TCID50/mL范围内,能明显提高脾淋巴细胞的体外增殖能力;而病毒滴度在100~102 TCID50/mL范围时,脾淋巴细胞增殖能力低于对照组.本研究结果说明PRRSV体内或体外感染对仔猪脾淋巴细胞增殖活性均有显著的影响,将为临床上PRRS的综合防治提供理论依据.     

带有F_c受体和绵羊红血球(SRBC)受体的双重标志淋巴细胞的研究

淋巴细胞亚群的研究是免疫学研究中一个重要方面,已经显示淋巴细胞有 T 淋巴细胞、B 淋巴细胞、K 细胞等亚群,这些细胞表面都有特征性表面标志。近年亦注意到有些淋巴细胞表面不但有 T 淋巴细胞表面特征,亦同时有 B 细胞或 K 细胞表面特征,这些称为双重标志淋巴细胞。     

白细胞介素-26研究进展

白细胞介素(interleukin,IL)-26最初被认为由T细胞特别是辅助性T细胞17产生。最近的研究发现,自然杀伤细胞、巨噬细胞、成纤维细胞和血管平滑肌细胞也产生IL-26。研究显示,IL-26能够特异性地结合到靶细胞的IL-10R2/IL-20R1受体复合物上,产生特定的胞内信号。除此以外,IL-26还可直接杀灭胞外细菌,并能与死亡细菌DNA或死亡细胞DNA片段结合形成IL-26-DNA复合物,激活浆细胞样树突状细胞Toll样受体9,分泌Ⅰ型干扰素IFN-α,在宿主防御和慢性炎性疾病中发挥重要作用。现对IL-26的结构、来源、受体和功能等进行综述。     

海蛇乙醇浸出物对小鼠免疫系统的影响

目的 探讨海蛇乙醇浸出物（AEBFSS）在小鼠体内、体外对免疫系统的影响。方法 体外试验：采用AEBFSS与小鼠脾细胞共孵育72h,测定T、B淋巴细胞转化功能;体内试验：采用每天灌胃给予小鼠1次AEBFSS,共6天。测定脾脏中T淋巴细胞转化功能和溶血素抗体生成水平。结果 在体外条件下低浓度AEBFSS促进T、B淋巴细胞增殖,高浓度时则作用相反;在体内条件下低浓度AEBFSS能增加B细胞生成溶血素抗体,对T细胞增殖无明显影响,高浓度则抑制T、B细胞功能。结论 AEBFSS对小鼠免疫系统有一定的双向调节作用。     

小鼠B7-H4基因的真核表达及其对淋巴细胞增殖的影响

目的构建小鼠B7-H4胞外段的真核表达载体,观察其在体外对淋巴细胞增殖的影响,为深入研究B7-H4在T细胞活化及移植排斥反应中的作用提供实验材料。方法提取小鼠肺、脾脏总RNA,RT-PCR反转录cDNA,以此为模板,扩增B7-H4胞外段基因,将其导入pGEM-T Easy载体,构建TA-mB7-H4质粒。用XBaI和HindIII双酶切后琼脂糖凝胶电泳分析和测序鉴定。将测序证实的mB7-H4酶切后装入MYC-HIS-EGFP-N荧光表达载体中,构建B7-H4-EGFP真核表达载体,转化JM109感受态细菌,提取重组质粒,酶切后琼脂糖凝胶电泳分析和测序鉴定。同时构建control-EGFP载体。应用脂质体法将重组质粒转染CHO细胞,经G418筛选,获得稳定表达B7-H4-EGFP的CHO细胞株,用MTT分析其分别对BALB/c小鼠、C57小鼠淋巴细胞和二者混合淋巴细胞增殖的影响。结果经测序证实,所克隆的小鼠B7-H4 cDNA和构建的重组质粒基因序列正确;转染的CHO细胞能稳定地表达跨膜型重组蛋白B7-H4;表达的B7-H4对淋巴细胞增殖具有明显抑制作用。结论成功构建了B7-H4真核表达系统,能表达有生物学活性的B7-H4分子,为进一步探讨B7-H4在T细胞活化和移植排斥反应中的作用奠定了基础。     

鼠γ疱疹病毒68(MHV68):研究γ疱疹病毒感染的模型

γ疱疹病毒成员遍及自然界,可感染包括人在内的多种哺乳动物.γ疱疹病毒的生物学特性主要有:(1)能在淋巴细胞中潜伏感染;(2)可以产生淋巴增生性疾病;(3)与淋巴组织和非淋巴组织肿瘤关系密切.最开始γ疱疹病毒根据感染T或B细胞的不同而分为γ1和γ2疱疹病毒,前者主要感染B淋巴细胞,如感染人和棉顶绒猴的EBV(EpsteinBarr virus);γ2疱疹病毒则感染T淋巴细胞,以感染松鼠猴的疱疹病毒samiri(herpesvirus samiri,HVS)为代表.但后来证实γ2疱疹病毒可同时感染T、B淋巴细胞,而EBV亦可引起T淋巴细胞肿瘤.因此以后发现的γ疱疹病毒则根据其基因结构及基因组中代表性序列的特点,将其归为γ1或γ2亚类.如感染人的卡波氏肉瘤相关病毒(Kaposi's sarcomaassociated herpesvirus,KSHV)或称人疱疹病毒8(human herpesvirus-8,HHV8)就归为γ2[1].     

逆转录病毒载体表达的膜型免疫球蛋白介导B细胞受体细胞信号传导

B细胞的激活是通过B细胞受体与其特异性抗原的结合引起,并引发后续的信号级联反应.深入了解这一重要事件的分子机制是免疫学研究的重要目标.嵌合B细胞受体是B细胞信号功能研究的有效工具.然而,这一方法仅适用于工具细胞,不能被用于体内研究.本研究构建了能同时表达针对特异性抗原的膜型免疫球蛋白的重链和轻链的逆转录病毒载体,通过逆转录病毒载体将这一膜型免疫球蛋白表达在原始B淋巴细胞膜上.结果证实,通过逆转录病毒载体表达的膜型免疫球蛋白能引发B细胞受体的信号转导,可引发B细胞受体下游Syk和Erk1/2蛋白的磷酸化.本研究进一步表明,B淋巴细胞表达的膜型免疫球蛋白在体外和体内均能与特异性抗原结合并导致细胞增殖.因此,本研究提供了一个能在体外和体内快速方便地分析B细胞受体下游信号级联反应的方法,这一方法将有助于更深入地研究与B细胞功能相关的各种蛋白.     

医学分子遗传学第七讲免疫系统疾病分子遗传学

免疫系统是人体的主要防御系统。免疫系统由许多来自不同克隆的淋巴细胞所组成。淋巴细胞可分为两种类型：B细胞和T的,它的主要功能是制造抗体。抗体是在外来抗原作用于B细胞后所产生的,它可以专一性地识别相应的特定抗原。T细胞是由胸腺产生的,它在免疫系统中起细胞介导的作用。T细胞的功能是多方面的。它能产生T细胞受体。丁细胞受体是一类蛋白质,它能为由B细胞产生的抗体提供直接的模板。     

人白细胞介素17基因的分离及其在酵母中的表达

1995年,美国Immunex公司的姚政兵等人从激活的人T淋巴细胞中鉴定了一种新型的白细胞介素,即人白细胞介素17(human inter-leukm-17,hIL-17)。与此同时,法国的Fossiez等也从人类基因组中分离出相应的基因,二者的核苷酸序列完全相同。hIL-17主要由活化的记忆性CD4~ T细胞产生,通过表达于许多细胞上的受体发挥作用,它能活化转录因子NF-κβ并诱导成纤维细胞中IL-6、IL-8和胞间粘连     

粒、单型人白血病细胞系的建立及其细胞生物学性质的研究

用偏酸的RPMI1640液培养9例急性粒或粒单型白血病人白细胞,建立了3个非淋巴细胞性白血病细胞系。它们的细胞生物学性质基本相似。 成系细胞的成丛现象、胞间连丝和细胞繁殖都要求一定的细胞浓度,说明它们是以细胞群体存在的。 这些细胞非常活跃,有多种运动方式:用触须样伪足泳动;胞体呈葫芦状收缩或整个细胞拉长收缩前进。